组织中核酸的提取与组分的鉴定

1、1/ 4教案与讲稿、教案2005级医学心理，2005级临床动物组织中核酸的 课程名称授课专业和班级本科9班，2005级临床本科6提取与组分的鉴定 班，2005级药学专科授课学授课内容纸层析鉴定转氨作用4学时时2006.11.27，6、7、8、9节，6、2006.11.30，7、8、9节，1、2、授课地点分析实验室日期节次2006.12.1，3、4节，1、2、3、2006.12.284节 教学目的熟悉苯酚法提取动物组织中核酸的原理和操作方法；了解核酸的 组成，掌握核酸组分的鉴定方法。教学重点动物组织中核酸提取的原理和操作方法；核酸组分的鉴定2/ 4教学难点核酸提取的操作；核酸组分的鉴定教具黑板、

2、粉笔、实验材料、实验仪器等。教学方法小班讲课动物组织中核酸提取的原理和操作方法10分钟教学过程核酸组分的鉴定10分钟学生实验操作130分钟实验结果观察及讨论分析10分钟（1）刘粤梅朱怀荣主编生物化学实验教程（人民卫生出版社）（2）张文峰黄林邦主编分析与实验检测技术（江西高校出版社）思考 题课后总结影响本次实验的因素？参考书籍二、讲稿（一）实验原理：核酸由磷酸、戊糖、含氮碱基化合物组成，根据戊糖的不同可分为脱氧核 糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两大类。由于它们在组织细胞中大部分与蛋 白质结合成核蛋白，因此，提取核酸时必须使核酸与蛋白质分离开并去掉蛋白 质。 核蛋白可用水从动物组织 （实验中

3、用肝）中提取，再用水饱和的酚去蛋 白，释放出核酸，最后用乙醇沉淀出核酸。核酸可被硫酸水解得到磷酸、戊糖、含氮碱基化合物，根据这三种物质的 性质特点可用不同的方法加以鉴定：1磷酸：可与钼酸试剂作用产生磷钼酸，后者在还原剂（如维生素C或氨基萘酚磺 酸等）作用下可立即被还原成蓝色的钼蓝，其颜色的深浅与磷的含量成正比。2含氮碱基化合物：嘌呤碱可与硝酸银作用生成灰褐色的絮状嘌呤银。3/ 43戊糖：核糖：与浓酸（浓盐酸或浓硫酸）共热得到糠醛，后者与3，5-二羟甲苯缩合而成绿色化合物。脱氧核糖：与浓酸（浓盐酸或浓硫酸）共热得到W-羟基-r-酮基戊醛，后者与二苯胺作 用生成蓝色化合物。（二）实验步骤：1核酸的

4、提取：1称取新鲜动物肝2克，剪碎置于研钵中，加3ml蒸馏水研磨成糊状（约5分钟）。2加90苯酚5ml于研钵中再研磨5分钟左右，转入离心管中3000 rpm离心5分钟。3用小滴管取上层液于离心管中，加2ml乙醚并搅拌均匀，3000rpm离心3分钟，用毛细滴管取下层液于另一离心管中。4加95乙醇2ml于离心管中，搅拌混匀后3000rpm离心5分钟弃上层 液即得核酸沉淀。2核酸的水解：于装有核酸沉淀的离心管中加2ml蒸馏水，震荡摇匀使沉淀溶解。加入10%硫酸2ml，摇匀，于沸水浴中加热7分钟，再冷却备用。3核酸的鉴定： 嘌呤鉴定：核酸水解液5硫酸浓氨水5AgNO3测定皿20滴 -数滴至碱性10滴4/ 4对照皿 -20滴数滴至碱性10滴加入AgNO3后观察变化，静止15分钟后比较两皿沉淀。 核糖检定：核酸水解液5硫酸3，5-二羟甲苯测定管4滴-6滴对照管4滴6滴摇匀后沸水浴10分钟，比较两管差异。 磷酸的鉴定：核酸水解液5硫酸钼酸试剂3维生素C测定管10滴-5滴10滴对照管-10