2012版生物实验专题讲义

1、目录第一节基础实验（一）2基础实验（二）微生物的培养与分离15第二节第三节基础实验（三）微生物的利用20第四节实验设计与分析28生物学史材料分析37第五节第六节现物技术（一）工程47物技术（二）细胞工程54第七节现简介逍遥生物，笑傲高考 本科毕业于北大生命科学学院获学博士学位高中生物高级教师 西城区生物学科人把繁杂的知识点结构化、体系化，让学生学习更轻松 秉持教育回归生活的原则，让知识真正学生点评：肖讲课十分细致，将一些难以理解的概念术语用平实而活泼的言语讲解出来，使我能够对知识做到真正理解。一些琐碎的知识点肖也经常做出整合，使知识能够系统化。跟着肖学，高考一定没问题！一直很喜欢肖帅！讲课，知

2、识点非常清楚，语言风趣幽默，人长得又细致而！严谨与仔细同在！不愧是肖，本来生物就是一门庞杂的学科，肖用缜密的逻辑思维把生物的各个知识点串联起来，让知识变得清晰化，网络化。小编推荐【笑谈生物】不可不知的生物学规律（址：）鼠标轻轻一点，就能和名师面对面！反复，深度消化，事半功倍！2013 年高考生物专题复习（一）实验专题高考说明对实验内容的要求第 1 页 共 59 页分类内容具体实验名称光学显微镜操作技术1. 临时装片的制作2. 临时装片的染色3. 临时装片的观察（低倍镜和高倍镜的使用）1) 生物组织中脂肪的鉴定2) 观察 DNA、RNA 在细胞中的分布3) 观察叶绿体和胞质环流4) 植物细胞的质

3、壁分离及复原的实验5) 观察细胞的有丝生物体内物质的分离和鉴定技术1. 物质的提取2. 物质的分离3. 物质的鉴定6) 光合色素的提取和分离7) 生物组织中还原性糖、蛋白质鉴定8) DNA 的粗提取与鉴定微生物的培养和利用1. 微生物的培养和分离2. 某种微生物数量的测定3. 培养基对微生物的选择作用4. 利用微生物进行发酵来生产特定的产物5. 发酵过程中亚硝酸盐含量的测定9) 大肠杆菌的培养和分离10) 探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化11）分离以尿素为氮源的微生物12) 观察土壤中能水解素的微生物13) 果酒及果醋的制作14) 腐乳的制作15) 泡菜的腌制及亚硝酸盐的测定1. 遗传学：

4、群体和家系2. 学：样方法和标志重捕法16) 某种遗传病在人群中的及其遗传方式17) 动植物种群密度的生物学研究中的科学思想和一般方法生物学发现的启迪（如细菌转化实验、噬菌体侵染细菌实验等） 做出假设和预期设计可行的实验方案和实验装置收集、分析数据，做的对简单的实验方案做出恰当的评价和修订第一节基础实验（一）一、利用光学显微镜的观察技术（一）临时装片的制作方法部位撕、切、涂、挑、剪（二）显微镜的使用（1）显微镜结构目镜物镜转换器物镜压片夹载物台粗准焦螺旋细准焦螺旋聚光镜下聚光镜镜座光圈（2）显微观察物镜、目镜镜头长短与放大倍数低倍显微镜观察：调光调焦（粗、细）调物象位置低倍物镜转换为高倍物镜的

5、操作低倍镜和高倍镜光亮度差异及调节无色透明结构观察的视野明暗度移动装片的方向和视野中物象移动方向的关系问题第 2 页 共 59 页显微观察时间漂洗解离染色取材压片滴水预处理（三）中实验1生物组织中脂肪的鉴定（1）实验原理：（2）实验材料：（3）实验步骤：浸泡切片染色试剂：漂洗目的：洗液：压片观察现象：2观察 DNA 和 RNA 在细胞中的分布（1）实验原理：（2）实验材料：人口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶内表皮细胞（3）实验步骤：取材水解试剂：作用：漂洗目的：洗液：染色试剂：观察现象第 3 页 共 59 页3用高倍镜观察叶绿体和细胞质（1）实验原理：绿色植物叶肉细胞中含有叶绿体活细胞细胞质处于不断状

6、态以叶绿体的（2）实验材料：作为观察胞质环流的标志（3）实验步骤：取材制片低倍镜观察现象：高倍镜观察现象：4观察植物细胞的质壁分离与复原（1）实验原理：（2）实验材料：（3）实验步骤：取材制片观察正常细胞滴加蔗糖溶液，观察发生质壁分离的细胞滴加清水，观察质壁分离复原的细胞第 4 页 共 59 页（4）实验应用：5植物细胞有丝（1）实验原理：临时装片的制作及观察（2）实验步骤：培养根尖取材解离液：目的：解离漂洗所用液体：目的：染色试剂：压片低倍镜下观察分生区细胞特点：高倍镜下观察例题：植物叶片表皮上分布着大量的气孔，气孔结构。当组成气孔的细胞（细胞）吸水后，会膨胀变形，气孔开启；反之细胞失水收缩

7、，气孔关闭。请根据所给的实验材料和用具，设计一个实验，证明气孔具有开启和关闭的功能。要求写出实验步骤、实验材料与主要用具：实验结果并作出解释。菠菜、清水、浓盐水、盖玻片、载玻片、显微镜、吸水纸、滴管、镊子等。实验步骤：预期实验结果并作解释：第 5 页 共 59 页二、物质的提取、分离和鉴定（一）物质的提取、分离和鉴定的一般方法取材提纯或分离鉴定破碎细胞过滤或离心试剂反应条件现象含量多；避免材料本身颜色对鉴定干扰研磨渗透加洗涤剂层析、盐析等（二）中具体实验1生物组织中还原性糖的鉴定（1）实验原理：（2）实验材料：（3）实验步骤：生物组织样液方法取组织样液加鉴定试剂注意事项：现象：沸水浴加热2生物

8、组织中蛋白质的鉴定（1）实验原理：现象：（2）实验材料：（3）实验步骤：生物组织样液方法：或蛋白质稀释液取样液加鉴定试剂注意事项：观察现象：第 6 页 共 59 页3叶绿体中色素的提取和分离（1）实验原理： 提取色素的原理：分离色素的原理：（2）实验步骤：取材SiO2 的作用提CaCO3 的作用的作用取色素研磨注意事项滤液：过滤滤纸条画线层析液的成分：注意事项：分离色素观察实验结果：4DNA 的粗提取和鉴定实验（1）实验原理：DNA 粗提取的原理：DNA 鉴定的原理（2）实验步骤：（以鸡血细胞中 DNA 的粗提取为例）鸡血细胞悬液 提取鸡血细胞的细胞核物质第 7 页共 59 页沉淀 DNA滤取

9、含 DNA 的粘稠物再溶解 DNA再沉淀 DNADNA 的鉴定例题：萝卜贮藏根组织细胞中是否存在蛋白质和 DNA？某生物小组对此进行研究，他们查阅资料得知：蛋白质在 10%NaCl 溶液中可沉淀析出；在蛋白质溶液中加入双缩脲试剂，溶液呈现特有颜色；DNA 溶于 10%NaCl溶液但在 95%中呈白色絮状沉淀，析出；DNA 与甲基绿染液结合，可见蓝绿色丝状物。实验材料：白萝卜。用具：粉碎机、烧杯、漏斗、试管、滤纸、玻棒、镊子、载玻片、天平、纱布。药品及试剂：蒸馏水、NaCl、95%、甲基绿染液、双缩脲试剂、蛋白质标准样品。请你根据所提供的条件参与实验设计并完成实验。一、材料处理：二、提取：三、鉴

10、定及结果：第 8 页 共 59 页三、1遗传学确定要群体和家系的遗传病，掌握其症状及表现设计表格及要点随机取样分多个小组所的群体数量要足够多的总人数及对象的结果人群中的发数不同人群的发数aN=×100%b汇总结果，统计分析，计算对象的对象的性状表现对象的亲子关系世代数家系汇总、统计结果，进行遗传病类型及遗传方式的分析注意：在系谱图无误的情况下，应用系谱法对某些系谱图进行分析时，有时得不到确切结论，因为系谱法是在表现型的水平上进行分析，而且这些系谱图的家系中世代数后代数少。因此，为了确定一种因遗传病的遗传方式，往往需要得到多个具有该遗传病家系的系谱图，并进行合并分析。2种群密度的取样植

11、物种群（和移动性较弱的动物种群）密度的取样样方法（1）原理和原则：（2）方法步骤：明确目的确定对象选取样方原则、样方大小计数计算种群密度方法第 9 页 共 59 页动物种群密度的方法标志重捕法（1）方法步骤（2）注意事项例题：工作者从东到计结果：我国北方 A、B、C 三种类型的草原地行。下表是不同面积的物种数量统（1）A、B、C 三种类型的草原对放牧干扰的抵抗力稳定性由强到弱的顺序是。导致这三种类型的草原物种数量不同的关键因素是。如果将 A 草原与我国东北针叶林相比，两者之间恢复力稳定性较强的是。（2）B 草原某种双子叶草本植物种群密度时，设计如下步骤：选取40cm ´ 40cm 为

12、最佳样方面积。在该物种分布较密集的地方取 5 个样方。计数每个样方内该植物的数。若计数结果由多到少依次为N1、N2、N3、N4、N5，则将 N3 作为种群密度的估计值。请指出以上设计步骤中的错误并加以改正。第 10 页 共 59 页例题参考显微操作技术例题实验步骤：1、取菠菜叶，用镊子撕取下表皮2、在载玻片上滴一滴清水，将下表皮放入清水中，盖玻片，制成临时装片3、将临时装片放在显微镜的载物台上，先在低倍镜下找到气孔，移到视察到的气孔状态，再用高倍镜进行观察，观4、在盖玻片的一侧滴上浓盐水，在另一侧用吸水纸，反复多次5、连续观察气孔的变化，并作预期实验结果并作解释：在清水中气孔开启，因为当细胞液

13、浓度大于细胞外溶液的浓度时，。细胞吸水膨胀变形，气孔开启；在浓盐水中气孔关闭，因为当细胞液浓度小于细胞外溶液浓度时，细胞失水收缩，气孔关闭。说明 这是一道开放的实验设计题，题干中给出实验材料、用具、原理，以及实验要研究的课题，要求学生能将练习显微镜的使用和临时玻片标本的制作等实验操作和实验技能进行综合运用，设计实验，解决新问题物质提取、分离与鉴定切块，加水 30ml，粉碎机粉碎，将匀浆经纱布过滤。一、材料处理：称取 50g 萝卜二、提取 1纱布过滤得到的滤液中加入 10%NaCl，直至沉淀析出。经滤纸过滤，将滤纸上的沉淀物放入试管中，加入 1ml 蒸馏水，振荡，用于蛋白质鉴定。2除去蛋白质的滤

14、液中，加入 95%，用玻棒轻轻搅拌，见有白色絮状沉淀产生，经滤纸过滤，用镊子将滤纸上的絮状沉淀置于载玻片，用于 DNA 鉴定。三、鉴定及结果1在用于蛋白质鉴定的试验试管中，加入双缩脲试剂，产生呈色反应，同时将蛋白质标准样品和 1ml 蒸馏水放入另一试管，加入双缩脲试剂产生呈色反应。观察到两试管中颜色基本一致，说明试验试管中有蛋白质存在。2在用于 DNA 鉴定的载玻片上，滴加甲基绿染液，DNA 呈现蓝绿色，说明该白色絮状沉淀为DNA。3通过对白萝卜贮藏根匀浆液的检测，说明有蛋白质和 DNA 的存在。例题（1）A、B、C水A 草原（2）选取的样方面积不对。应取物种数量达到稳定的最小面积100cm

15、´100cm 。取样方法不对。B 草原中随机取样。对种群密度值的估计方法不对。应以样方的面积中种群数量的均数作为种群密度的估计值。第 11 页 共 59 页基础实验（一）典型例题1用普通显微镜观察切片，当用低倍物镜看清楚后，转换为高倍物镜却看不到或看不清原来观察到的物体，不可能的是A. 物体不在视B. 切片放反，盖玻片在下面C. 低倍物镜和高倍物镜的焦点不在同一平面D未换目镜2下面是利用显微镜观察时的几个操作步骤，在显微镜下要把视野里的标本从图中的甲转为乙，其正确的操作步骤是： 转动粗准焦螺旋调节光圈转动细准焦螺旋 转动转 换器 移动标本ACBD3在下列实验中,必须始终用活细胞做材料

16、的是：在光学显微镜下观察植物细胞有丝胞的质壁分离和复原现象 叶绿体色素的提取和分离 观察花生子叶细胞中的油滴流现象 用健那绿染色观察线粒体分布观察细胞中 DNA 和 RNA 的分布过程 观察植物细观察黑藻叶片胞质环A 4下列关于低温诱导A原理：低温抑制BCD加倍实验的叙述，正确的是着丝点，使子不能分别移向两极B解离：盐酸混合液和卡诺氏固定液都可以使洋葱根尖解离C染色：龙胆紫溶液和醋酸洋红溶液都可以使D观察：显徽镜下可以看到大多数细胞的着色数目发生改变5下列关于叶绿体色素提取与分离的实验的表述，错误的是：菠菜叶片加清水研磨过滤后可得到色素提取液研磨时加入碳酸钙的目的是增大摩擦力，使研磨充分提取叶

17、绿体色素的方法为纸层析法在滤纸上色素提取液的划线要浸没在层析液中才能在滤纸上分离开来ABCD6性低血压是一种人类的遗传病。为了研究其方法是与遗传方式，正确的在人群中随机抽样在人群中随机抽样并计算研究遗传方式在患者家系在患者家系中A并计算研究遗传方式BCD第 12 页 共 59 页7某城市兔唇畸形新生儿出生率明显高于其他城市，研究这种现象是否由遗传因素引起方法不包括A对正常与畸形进行组比较研究B对该城市出生的双胞胎进行相关的统计分析C对该城市出生的兔唇畸形患者的血型统计分析D对兔唇畸形患者家系8下列对实验的相关叙述，正确的是A.探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的专一性作用，可用碘液替代统计分析试剂进行鉴定

18、B.纸层析法分离叶绿体色素的实验结果表明，层析液中叶绿素 b 溶解度最低C.人群中某种遗传病的，择有遗传病史的家系统计D.鉴定蛋白质，双缩脲试剂A 液和 B 液混合后再加入待检组织样液中9下列对有关实验的叙述，正确的是A. 在观察洋葱细胞有丝可镜检B. 对酵母菌计数时，用吸管吸取培养液滴满计数板的计数室及其四周边缘，轻轻盖玻片后即可镜检实验中，将已经解离、漂洗、染色的根尖置于载玻片上，轻轻盖玻片后即C在叶绿体色素提取实验中，研磨绿叶时应加一些D检测试管中的梨汁是否有葡萄糖，可加入适量，如无水乙醇试剂后，摇匀并观察颜色变化10“选择合适实验材料”是实验成败的关键。下列相关实验“选材”及“理由”分

19、析错误的是A酵母菌常被用来探究细胞呼吸的方式，因为酵母菌在有氧条件和无氧条件均能生活B质壁分离和复原实验常选用洋葱鳞片叶外表皮，因为外表皮细胞质基质含紫素，易观察现象CDNA 粗提取和鉴定实验，实验材料选用鸡血不用猪血，因为猪红细胞无细胞核，不易提取到 DNAD泡菜的腌制实验选择天然微生物乳酸菌、假丝酵母等, 这些微生物发酵产生乳酸、醇类等物质，不仅使泡菜酸脆可口，也抑制了杂菌的生长11下列关于“DNA 粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是A洗涤剂能细胞膜并增加 DNA 在NaCl 溶液中的溶解度B将 DNA 丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝C常温下菜花匀浆中有些酶类会影响 DNA 的提取

20、D用玻棒缓慢搅拌滤液会导致 DNA 获得量减少12分析下表，可推测注：“+”显色，“+”显色更深；“-”不显色.A甲溶液含有淀粉酶C混合溶液不含淀粉B乙溶液含有还原糖D混合溶液含有淀粉酶13下表中有关细胞化合物的各项内容，正确的是ABCD第 13 页 共 59 页溶液双缩脲试剂碘液试剂甲乙甲、乙混合14某小组进行观察洋葱根尖分生组织细胞有丝的实验，下列关于该实验的叙述正确的是A盐酸和B碱性C观察到D细胞内混合液主要起固定作用吡罗红（派洛宁）可用于染色末期细胞内细胞板向四周扩展形成新的细胞壁的存在状态可作为有丝各时期的依据参考1D13C：2D14D3D4B5A6D7C8B9C10B11C12D第

21、 14 页 共 59 页第二节基础实验（二）微生物的培养与分离一、微生物的概念二、微生物的培养技术1培养基的配制培养基所含营养物质培养基的种类及用途2除菌技术第 15 页 共 59 页方法应用范围灭菌培养基、培养皿、移液管等接种环、刮刀等接种器具熏蒸灭菌、紫外线照射、过滤空气接种室、接种箱、超净工作台细菌过滤器加热不稳定的物质消毒、次氯酸钠等化学试剂实验材料（如外）、工作台和器具高温煮沸划分依据种类用途物理性质半固体培养基观察微生物的运动，菌种保存、鉴定液体培养基扩大培养、工业生产化学成分天然培养基工业生产培养基微生物的分类、鉴定用途营养成分主要种类作用碳源CO2、NaHCO3糖类、脂肪酸等氮

22、源N2、NH3、铵盐、硝酸盐尿素、牛肉膏和蛋白胨生长因子（特殊成分）维生素、氨基酸、嘌呤碱和嘧啶碱等补充微生物生物必需的微量有机物无机物水无机盐3 接种方法在固体培养基接种：划线法和涂布法4 培养条件需考虑培养的温度、气体环境，还需考虑： 固体培养基倒置培养，液体培养基振荡培养。三、微生物的分离技术原理：单菌落的概念1法分离微生物用接种环蘸菌液后在含固体培养基的培养皿平板上划线，则在划线过程中菌液逐渐减少，菌体数量，菌间距离增大。培养10-20小时后，划线末处可观察到由个菌产生的单菌落；如果再挑取它们后，接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个菌产生的后代（或

23、纯种）。2法分离微生物mlmlmlmlmlml101102103104105106菌液9ml 水9ml 水9ml 水9ml 水9ml 水9ml 水对菌液进行逐步梯度稀释（数据表示稀释倍数）取稀释菌液各 1ml 在平板上涂布后进行培养第 16 页 共 59 页3利用分离微生物利用不同微生物所需的碳源、氮源不同或具有某些抗性进行微生物分离。4利用后挑取培养如：刚果红（CongoRed，简称 CR）与素形成红色复合物，但不能与二糖、葡萄糖发生颜色反含有素的培养基中加入刚果红，刚果红能与其中的素发生反应形成红色复合物，当素被纤维素酶分解后，刚果红素复合物就无法形成，培养基中就出现以素分解菌为中心的透明

24、圈，这样可以通过是否产生透明圈来筛选素分解菌。四、微生物的计数方法1. 稀释涂布平板法：数菌落数量后计算2. 称重法：已知每个菌体的重量3. 显微观察法：如比例计数法或血球计数板计数等五、微生物分离与培养的具体实验1大肠杆菌分离与培养培养基的配制和灭菌称量溶化调pH分装包扎灭菌灯旁操作培养皿立即置于水平位置上，轻晃动，铺满皿底倒平板倒LB固体培养基接种环、平板划线LB液体培养基接种环、扩大培养接种固体培养基倒置，37恒温培养箱，24h左右液体培养基空气浴或水浴培养箱（摇床），震荡培养固体培养基划线的末端出现单菌落液体培养基培养液变浑浊培养观察注意：使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能

25、丢弃。第 17 页 共 59 页2分离以尿素为氮源的微生物（1）实验原理选择培养基的使用选择培养基：将特定种类的微生物生长，同时抑制或其他种类微生物生长的培养基叫选择培养基不同微生物利用氮源种类不同。脲或称尿素，是蛋白质降解的产物。人和其他哺乳动物的尿中都含有尿素，大量的尿素存在对环境造成污染。有一些细菌含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。这类细菌对于自然界中的氮素循环具有重要的意义。脲酶（NH2) 2 C=O + H2O2NH3 + CO 2酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是 pH6.48.2，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色，以尿素为氮源的微生物培养一段时间后，由于

26、细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基中的尿素分解，产生的NH3 使培养基的 pH 由原来的中性变为碱性，于是培养基中的酚红由黄色变成红色，圆形红域愈大，表明这种菌利用尿素的能力。用液体稀释涂布法测定菌体数量，分离菌种。（2）实验步骤培养基的配制和灭菌注意：尿素经过细菌过滤器灭菌后加入土壤稀释液取（在有哺乳动物排泄物的地方取）倒平板LB全营养培养基（对照组） 尿素固体培养基（实验组）刮刀、稀释涂布接种培养 倒置，37恒温培养箱，24h左右LB全营养培养基菌落数量和种类多（杂）尿素固体培养基菌落少、单一，菌落周围出现红观察域3观察土壤中能水解（1）实验原理植物的细胞壁主要由素的微生物素、木质素和半素

27、组成。在枯树或草炭土中有许多能利用和分解这些物质作为能量和物质来源的微生物。他们可以将土壤中的枯枝落叶分解，并用于素酶的菌种有绿色木霉、变异青霉、黑曲霉和根霉。素酶的生产。已经发现并用于生产素酶不是单一的酶，是一类酶的总称，共同作用把素分解为葡萄糖。C1CxCx天然素直链素二糖处理过的素 -葡萄糖苷酶葡萄糖第 18 页 共 59 页（2）实验步骤（草炭土或枯枝落叶丰富土壤）不灭菌（实验组）灭菌处理（对照组）灭菌器皿A灭菌器皿B加无菌水调湿，每组土壤上分别放3张卷烟纸保湿小室中培养（保湿，通气）对照组卷烟纸几乎没变化（不分解） 实验组卷烟纸逐渐分解、破损观察第 19 页 共 59 页第三节基础实

28、验（三）微生物的利用一、果酒及果醋的制作1实验原理（1）酵母菌能以葡萄汁中的葡萄糖为原料，在无氧的条件下进行发酵。（2）醋酸杆菌在有氧的情况下，可将转变为醋酸。2方法步骤制作葡萄汁 （、榨汁）酵母菌菌种准备：干酵母粉+温水+蔗糖（少）清洁、无菌处理容器容（葡萄汁的量不超过发酵瓶的 2/3，：发酵瓶要密封，但定期拧松瓶盖放气，： 发酵温度：1825观察现象发酵过滤、分装、保存接种醋酸杆菌菌种原料：上述发酵获得的葡萄酒（）发酵瓶不能密封，瓶口发酵温度：3035一层干净的纱布果醋制作二、腐乳的制作1实验原理多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。（毛霉是一种丝

29、状真菌，分布广泛，常见于土壤、水果、蔬菜、谷物上）。毛霉等微生物可以产生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶。发酵过程中，在酶的作用下，豆腐块中的蛋白质、淀粉、脂肪被分解成多肽和氨基酸、麦芽糖、甘油和脂肪酸等。在多种微生物的协同作用下，普通的豆腐变成我们爱吃的豆腐乳。豆腐胚的外衣是由毛霉或根霉的菌丝组成的，进一步发酵时，又添加了红曲霉和其他成分。第 20 页 共 59 页2实验步骤用含水量低豆腐做原料合适的温度和湿度2d 后，豆腐块上出现白色菌丝让豆腐块上长出毛霉（前期发酵）来自于空气中的毛霉孢子直接接种的优良毛霉菌种分层加盐，下盐的作用： 析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬加盐腌制抑制微生物的生长，避免豆腐块

30、变质盐量： 多：影响腐乳口味少：不足以抑制微生物的生长，豆腐块变质酒：抑制微生物生长同时使腐乳具有独特香味加卤汤装瓶卤汤成分调味防腐杀菌其他香料（花椒、红曲粉等）密封腌制（后期发酵）三、泡菜的腌制及亚硝酸盐的测定1实验原理腌制泡菜的原理：在无氧的条件下，天然微生物乳酸菌、假丝酵母等利用蔬菜中的糖或其他营养物质进行发酵，产物有乳酸、醇类等物质，不仅使泡菜酸脆可口，也抑制了杂菌的生长。在腌制泡菜的发酵过程中，也会产生一定量的亚硝酸盐。（亚硝酸盐在食品生产中常用做食品添加剂，起到增色和防腐作用。膳食中的亚硝酸盐一般危害健康，但摄入总量达 0.30.5g 时，会引起，总量达 3g 时，会引起。我国卫生

31、标准规定，亚硝酸盐的残留量在肉制品中不超过 30mg/kg,酱腌菜中不超过20mg/kg，而婴儿奶粉中不得超过 2 mg/kg。）所测试材料沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下，其亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应一产物再与 N1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，可用光电比色法定量测定或目测比色法。2. 试剂提取试剂：氯化铵缓冲溶液（pH9.7）；硫酸锌溶液（0.4mol/L）；NaOH 溶液（2mol/L）显色剂：对氨基苯磺酸溶液和N1萘基乙二胺溶液等体积混合液亚硝酸钠标准溶液测定液：（浓度分别为 0、0.1、0.2、0.3、0.5g/ml)3. 实验步骤，这材料：白萝卜、圆白菜等白色或色浅

32、的蔬菜（ 坛内盐水要没过蔬菜且坛口要水封（目的？）？）腌制泡菜获取滤液泡菜+泡菜汁研磨（榨汁）、过滤沉淀蛋白质ZnSO4 溶液+NaOH 溶液酸化 重氮化显色比色（和不同浓度的标准显色液对照）第 21 页 共 59 页4实验结果基础实验（二、三）微生物的培养和利用典型例题1“筛选”是分离和培养生物新类型常用的，下列有关技术中不能筛选的是A. 在全营养的 LB 培养基中，筛选大肠杆菌B. 用尿素为唯一氮源，筛选能够分解尿素的微生物C用素为唯一碳源的培养基，筛选能分解素的微生物D在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体植物2下列关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述错误的是A. 用蒸馏水配

33、制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B. 取 104、105、106 倍的土壤稀释液和无菌水各 0.1mL，分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，37°C 恒温培养 2448 小时D确定对照组无菌后，选择菌落数在 300 以上的实验组平板进行计数3橘子罐头，采用酸碱处理脱去橘络，会产生严重污染。目前使用减少污染的酶解法去除橘络。下列生长在特定环境中的 4 类微生物，不能大量产生所用酶的是A生长在酸奶中的乳酸菌C生长在棉籽壳上的平菇4在密闭容器内，酵母菌利用葡萄糖产生B生长在麦麸上的黑曲霉D生长在木屑上的木霉，此过程不生成AATPB乳酸C三碳化合物DCO25在家庭中

34、用鲜葡萄制作果酒时，正确的操作是A让发酵装置接受光照C向发酵装置通入空气B给发酵装置适时排气D将发酵装置放在 45处6利用酵母菌发酵工业生产A玉米粉和有氧C玉米粉和无氧时，投放的适宜原料和在生产阶段要的必要条件分别是B大豆粉和有氧D大豆粉和无氧7甲图是果醋发酵装置。发酵初期不通气，溶液中有气泡产生；中期可闻到酒香；后期接种醋酸菌，适当升高温度并通气，酒香逐渐变成醋香。图乙中能表示整个发酵过程培养液 pH 变化的曲线是ABCD第 22 页 共 59 页8利用葡萄汁发酵产生果酒的过程中，高压蒸汽灭菌，但其他杂菌不能生长的是A. 经冲洗后的葡萄上只有野生型酵母菌，无其他杂菌B. 其他杂菌不能利用葡萄

35、汁中的糖作为碳源C在缺氧的发酵液中，酵母菌代谢产生抑制其他杂菌生长D在无氧条件下，其他杂菌不能进行细胞呼吸9腐乳制作过程中所利用的微生物主要是A乳酸菌B酵母菌C霉菌D多种细菌10下列关于腐乳制作的描述中，错误的是A在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶的微生物参与B含水量大于 85%的豆腐利于保持湿度，适宜制作腐乳C加盐和加酒都能抑制微生物的生长D密封瓶口前最好将瓶口通过火焰以防杂菌污染11腐乳的口味与豆腐有显著不同，主要A加入了多种调味品是B微生物产生的酶导致豆腐成份发生变化C放置时间，营养成份流失D加入红曲霉色素12. 腐乳制作初期，豆腐不加盐腌制，主要A避免豆腐脱水C避免口味不佳13. 下列

36、有关腐乳制做的操作，正确的是是B避免高浓度的盐抑制霉菌的生长D避免盐破坏豆腐成分A发酵初期要为霉菌生长提供良好的通气条件 B必须在豆腐上接种人工培养的菌种才能完成发酵C腌制豆腐胚后要向卤汤中加入蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶D将发酵温度14下列关于泡菜制在 35左右的表述，正确的是A利用酵母菌的无氧呼吸，使蔬菜中的有机物转化为乳酸等有机物B利用乳酸菌的无氧呼吸，使蔬菜中的有机物转化为乳酸和C腌制泡菜时加入适量的盐以促进蔬菜脱水D加入原泡菜坛中的“老汤”可缩短腌制时间，因为其中含有乳酸菌15下列关于制作泡菜的操作过程，不正确的是A选择可以密封的容器后可用于泡菜腌制左右B蔬菜用量在容器容积的 8C蔬菜和各

37、种调味品放入容器后，水量在能没过蔬菜为宜D蔬菜后装入泡菜坛之前要喷洒乳酸菌菌液第 23 页 共 59 页16. 有关泡菜中亚硝酸盐含量测定的原理，下列表述不正确的是A. 泡菜中的亚硝酸盐是一定条件下蔬菜在微生物的作用下产生的B. 提纯泡菜中的亚硝酸盐需要用到蛋白质沉淀剂，避免其干扰颜色反应C亚硝酸盐含量越高，与显色剂反应产物颜色越深，光密度值越大 D标准曲线是通过测定待检样品的亚硝酸盐含量获得的17. 下列表述错误的是A亚硝酸盐可能导致突变，是物质B膳食中只要含有亚硝酸盐，对就会产生C罐头、火腿等食品中都可能含有亚硝酸盐D工业用盐中的亚硝酸盐含量可能，因此不可食用18亚硝酸盐可使 DNA 的某

38、些碱基脱去氨基，碱基脱氨基后的变化如下：C 转变为 U（U 与 A 配对），A 转变为 I（I 为次黄嘌呤，与C 配对）。现有一 DN-AGTCG-TCAGC-经亚硝酸盐作用后，若链中的 A、C 发生脱氨基作用，经过两轮A -CGTTG-段为后其子代 DN断之一为-GGTCG-B-GCAAC-CCAGG-GGTTG-CGTAG-CD-GCATC-CCAAC-19人们利用某些微生物制作食品时，需要分析微生物的特点，容都正确的是微生物的发酵条件。下列与此有关的各项内20高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是A将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B将毛霉菌液接种在切成小块

39、的鲜豆腐上C将转植物叶片接种到无菌培养基上D将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上第 24 页 共 59 页21回答有关大肠杆菌分离培养系列问题（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑、和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。（2）在微生物培养操作中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行（行和；静止空气中的细菌可用紫外、灭菌）；操作者双手需进线杀灭，是紫外线能使蛋白质变性，还能。（3） 若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作多次重复外，还应保证待测样品稀释的。（4） 可

40、以依据菌落的形状、大小等菌落特征对获得的纯菌种进行初步的。（5） 培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是。（6） 若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。22利用农作物秸秆等质原料生产的乙醇，经可制成乙醇。使用乙醇减少了对石油的依赖。下图为生产乙醇的简要流程，请据图回答：（1）欲从土壤中分离获取微生物 A，应采用具有功能的培养基。调节 pH 后的培养基还需尽快进行处理，方能使用。（2）图中过程需要利用微生物 A 所产生的酶对质原料进行水解。可溶解复合物的产量与该酶活性有直接关系，衡量此酶活性的指标可用

41、表示。（3）图中过程常用的微生物是，此时其细胞呼吸类型是。细胞呼吸既能为微生物的生长提供物质，还能提供。（4）通过图中微生物的分解作用，不仅增加了人类对质原料中能量的利用途径，还促进了系统中的物质在与之间不断地循环往返。23低度的果酒、果醋不但好喝，还具有一定的养生功能。下图是两位同学制果酒和果醋时使用的装置。同学甲用 A（带盖的瓶子）装置制葡萄酒，在瓶中加入适量葡萄汁，发酵温度在 1825，每隔 12h 左右将瓶盖拧松一次（注意不是打开瓶盖），之后再将瓶盖拧紧。当发酵产生后，再将瓶盖打一层纱布，温度在 3035，进行制果醋的发酵。开，同学B 装置，温度与甲相同，不同的是制果酒阶段除充气口用夹

42、紧外，排气的橡胶管也用，并且每隔 12h 左右放出多余的气体。制果醋阶段适时向充气口充气。经过 20天左右，两位同学先后完成了的发酵制作。据此回答有关问题：（1） 酵母菌与醋酸杆菌在结构上的最大区别是后者。从制酒和制醋两阶段对装置的处理方式，酵母菌和醋酸杆菌的异化作用类型分别是。（2） 同学甲在制酒阶段，每隔 12h 左右就要将瓶盖拧松一次，但又不打开，这样做的目的是。用反应式表示出A 和B 装置酿酒过程刚开始时发生的主要化学变化： （3）B 装置中排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样做的是。（4）制葡萄酒时要将温度在 1825，而制葡萄醋时要将温度在 3035，是。葡萄汁为酵母菌、

43、醋酸杆菌等微生物的生长提供的营养成分是。第 25 页 共 59 页（5）制作过程一般不需额外添加酵母菌和醋酸杆菌即可完成。为了提高果酒品质也可在果汁中加入人工培养的酵母菌。酵母菌能在含有青霉素的培养基中生长而细菌不能，据此可以利用培养基分离获得较为纯净的酵母菌菌种。24回答下列关于腐乳制作的问题：（1） 腐乳是豆腐经微生物发酵后制成的食品。多种微生物参与了该发酵过程，其中起主要作用的微生物是，其产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解为和；其产生的能将豆腐中的脂肪水解为和。（2） 发酵完成后需加盐腌制，加盐还可以抑制生长。（3） 腐乳制作的后期可加入由酒和多种香辛料配置而成的卤汤。卤汤具有一定的防腐

44、作用外，还能使腐乳具有独特的。23回答下列关于微生物和酶的问题。高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图 15 所示。（1） 过程称为，过程是为了。（2） 号培养基称为(按功能分)；该培养基中除了加入淀粉外，还需加入另一种重要的营养成分。A琼脂B葡萄糖C硝酸铵D碳酸氢钠（3）一般对配制的培养基采用高压灭菌，其中“高压”是为了。在高温淀粉酶运用到工业生产前，需对该酶的最佳温度范围进定。图 16 中的曲线表示酶在各种温度下酶活性相对最高酶活性的百分比。将酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其残余酶活性，由此得到的

45、数据为酶的热稳定性数据，即图 16 中的曲线。（4）根据图中的数据，A40一 50 C60一 70该酶使用的最佳温度范围是。B50一 60 D70-80（5）据图下列叙述错误的是。A该酶只能在最佳温度范围内测出活性B曲线35数据点是在 80时测得的C曲线表明 80是该酶活性最高的温度D曲线表明该酶的热稳定性在 70之后急剧下降第 26 页 共 59 页典型例题参考1A12B2D13A3A14D4B15D5B6C16D17B7B18C8C19B9C20C10B11B21（1）pH、氧气，繁殖速度快（易培养）（2） 灭菌，诱导（3） 浓度准确（4） 鉴定突变（5）在适宜条件下放置几天，观察是否有微

46、生物生长 （6）灭菌22（1）选择（2）灭菌素（质）时间内产物的增加量（生成速率）或底物的减少量(速率)（3）酵母菌无氧呼吸/厌氧呼吸能量（4）生物群落（群落）无机环境（非生物环境）22（1）无成形细胞核兼性厌氧型、需氧型（2）放出 CO2（制酒阶段的后期，酵母菌无氧呼吸会产生大量气体，如不及时放出会把瓶子或瓶盖不打开瓶盖，是防止氧气和有害杂菌进入。）；（3） 排出 CO2，防止杂菌污染（4） 酵母菌和醋酸菌发酵的最适温度不同（1825是酵母菌生长和发酵的合适温度，3035是醋酸菌的生长和发酵的合适温度）；碳源、氮源、水、无机盐和生长因子（5） 选择；（含青霉素的选择）23（1）毛霉肽（2）

47、微生物（3） 味道氨基酸脂肪酶甘油脂肪酸24（1）稀释单个菌落的筛选（或筛选）（2）选择培养基C（3）杀死培养基中的细菌芽孢（4）C（5）A第 27 页共 59 页第四节实验设计与分析一、说明对生物学研究中的科学思想和一般方法的要求1生物学发现的启迪（科学思想）2. 具备验证简单的生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理。3. 具有对一些生物学问题进行初步探究的能力（1）包括作出假设和预期、确认变量、设计可行的实验方案，利用合理的实验装置，收集、分析数据、作出合理的。（2）包括运用观察、试验与4实验评价能力、假说演绎、建立模型与系统分析等科学研究方法。能对一些简单的实验方案作

48、出恰当的评价和修订二、例题讲解例 1：胰高血糖素对小白鼠和人具有相同的生理作用。请利用提供的实验材料和用具，设计实验证明胰高血糖素具有升高血糖的生理作用。实验材料和用具：正常健康的实验小白鼠 2 只，生理盐水，用生理盐水配制的适宜浓度的胰高血糖素溶液，注射器，试管，烧杯等。（特）试剂，实验目的：实验原理：实验步骤：（1）（2）（3）（4）实验结果预期：实验结论：例 2：胰高血糖素对于人具有升高血糖的生理作用，对小白鼠是否具有相同的生理作用？请利用提供的实验材料和用具，（实验材料和用具同例 1 ），设计实验研究胰高血糖素对小白鼠的生理作用。实验目的：第 28 页 共 59 页实验原理：实验步骤与

49、例 1 相同吗？实验结果预期：实验结论：例 3：请利用下列材料和用具，设计实验，证明唾液淀粉酶是蛋白质，并验结果。实验材料和用具：唾液淀粉酶溶液、标准蛋白质溶液、2 支试管、双缩脲试剂实验步骤：实实验结果预期：实验结论：例 4：请利用下列材料和用具，设计实验，证明唾液淀粉酶是蛋白质，并实验结果实验材料和用具：唾液淀粉酶溶液、淀粉溶液、蛋白酶溶液、试管若干支、碘液、37恒温箱、蒸馏水等实验步骤：实验结果预期：实验结论：第 29 页 共 59 页三、实验设计问题的一般思路1. 明确实验目的：（知道该做什么，如何进行分组）2. 明确实验原理：（知道怎么做） 根据实验原理选择实验材料和用具也可以根据提供的材料和用具推测实验原理题干中提示相应的实验原理3. 确定实验步骤：取材（预处理）