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1、什么是艾滋病病毒（HIV） HIVHIV属于逆转录病毒科，慢病毒亚科，属于逆转录病毒科，慢病毒亚科，单链双拷贝单链双拷贝RNARNA病毒。病毒。 病毒颗粒：呈病毒颗粒：呈2020面体立体对称球形，表面体立体对称球形，表面有刺突状结构的糖蛋白，分为包膜和面有刺突状结构的糖蛋白，分为包膜和核心两部分核心两部分艾滋病的传播途径 经血液传播：输血、静脉吸毒等。经血液传播：输血、静脉吸毒等。 经性传播：异性、同性、双性。经性传播：异性、同性、双性。 垂直传播：母婴经胎盘传播。垂直传播：母婴经胎盘传播。艾滋病的检测方法 快速检测：胶体金快速检测：胶体金/ /硒、明胶凝集、唾液检测卡等。硒、明胶凝集、唾液检

2、测卡等。 敏感性约相当于中度敏感的敏感性约相当于中度敏感的ELISAELISA，适用于应急检测、，适用于应急检测、门诊急诊个体检测。门诊急诊个体检测。 优点：优点：简单、快速。简单、快速。 缺点：缺点：不稳定、假阴不稳定、假阴/ /阳性阳性 常用筛查实验：常用筛查实验：酶联免疫（酶联免疫（ELISAELISA）、化学发光等。、化学发光等。 确证检测：免疫印迹实验（确证检测：免疫印迹实验（WBWB） 其他检测方法：核酸检测等其他检测方法：核酸检测等 什么是ELISA方法 是以是以酶酶标记的抗体或抗原为主要试剂，利用标记的抗体或抗原为主要试剂，利用抗原抗体反应抗原抗体反应进行的检测方法进行的检测方

3、法, ,是标记免疫是标记免疫技术的一种。技术的一种。目前使用的目前使用的ELISAELISA试剂多为第三代及第四代试剂多为第三代及第四代ELISAELISA试剂试剂。第四代试剂第四代试剂是最近发展起来的是最近发展起来的HIVHIV抗原抗体联合测定试剂，可同时检测抗原抗体联合测定试剂，可同时检测P24P24抗原抗原和抗和抗HIV-1/2HIV-1/2抗体抗体。与。与第三代抗第三代抗HIV-1/2HIV-1/2试剂相比，检出时间提前了试剂相比，检出时间提前了4 4- -9.19.1天，其天，其优点在于能同时检测抗原、抗体，降低血源优点在于能同时检测抗原、抗体，降低血源筛查的残余危险度。筛查的残余危

4、险度。什么是ELISA方法什么是ELISA方法什么是ELISA方法 ELISAELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3 3种必要的试剂：种必要的试剂： 固相的抗原或抗体，固相的抗原或抗体， 酶标记的抗原或抗体，酶标记的抗原或抗体， 酶作用的底物，根据试剂的来源和标本的性状以及检测的条件，可设计出各酶作用的底物，根据试剂的来源和标本的性状以及检测的条件，可设计出各种不同的检测方法。种不同的检测方法。 ELISAELISA的成品试剂盒中包含以下各组分：的成品试剂盒中包含以下各组分： (1)(1)已包被抗原或抗体的固相载体已

5、包被抗原或抗体的固相载体(96(96孔板孔板);); (2) (2)酶标记的抗原或抗体酶标记的抗原或抗体( (结合物结合物);); (3) (3)酶的底物（缓冲液和底物液或称酶的底物（缓冲液和底物液或称A/BA/B液）液）; ; (4) (4)阴性对照品和阳性对照品阴性对照品和阳性对照品( (定性测定中定性测定中) ) (5) (5)有些试剂盒中还有标本的稀释液有些试剂盒中还有标本的稀释液; ; (6) (6)洗涤液（基本为通用的浓缩磷酸盐溶液）洗涤液（基本为通用的浓缩磷酸盐溶液）; ; (7) (7)酶反应终止液（一般为弱硫酸液）酶反应终止液（一般为弱硫酸液） 什么是ELISA方法必须是经国

6、家食品药品监督管理局注册批准、批批检验合格、在有效期内必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检验合格、在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。什么是ELISA方法1 HIV1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。2 2 以以监测为目的监测为目的的检测是为了解不同人群的检测是为了解不同人群HIVHIV感染率及其变化趋势而感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。3 3 以以诊断为目的诊断为目的的

7、检测是为了确定个体的检测是为了确定个体HIVHIV感染状况而进行的检测，感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。等。4 4 以血液以血液筛查为目的筛查为目的的检测是为了防止输血传播的检测是为了防止输血传播HIVHIV而进行的检测，而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。包括献血员筛查和原料血浆筛查。HIV抗体检测的目的样品初筛试验筛查试剂阳性反应阴性反应复检试验原有试剂+另一不同原理（ 或厂家） 试剂或另外两种不同原理（ 或厂家） 试剂均阳性反应一阴一阳均阴性反应确证试验报告阴性 HI

8、VHIV抗体筛查检测流程HIV检测试验流程最常用的样品是最常用的样品是血液血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。什么是血清：抽取静脉血，置于普通试管内，室温下自然放置什么是血清：抽取静脉血，置于普通试管内，室温下自然放置1 1 2h2h，待血液凝固、血，待血液凝固、血块收缩后再用块收缩后再用3000r/min3000r/min离心离心15min15min，吸出血清备用。，吸出血清备用。什么是血桨：抗凝静脉血，抽取静脉血后，置于加有什么是血桨：抗凝静脉血，抽取静脉血后，置于加有EDTAEDTA或肝素等抗凝剂的试管，颠或

9、肝素等抗凝剂的试管，颠倒混匀数次，可用于倒混匀数次，可用于CD4CD4细胞检测。离心分离出的上清液为血桨。细胞检测。离心分离出的上清液为血桨。血浆与血清的区别是上清液中存在纤维蛋白，容易产生假阳性。因此尽量上送血清样品。血浆与血清的区别是上清液中存在纤维蛋白，容易产生假阳性。因此尽量上送血清样品。采样注意：采血时自我防护，使用安全针具，戴双层手套用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于- -2020以下，短期（以下，短期（1 1周）内进行检测的样品可存放周）内进行检测的样品可存放于于2-82-8。用于用于CDCD4 4+ +/CD/CD8 8+ +T T淋巴

10、细胞测定的样品不能长期保淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过存，样品采集时间超过48h48h则不可检测则不可检测。采样 血液样本应及时检测，一般血液样本应及时检测，一般1010个工作日内必须出个工作日内必须出具报告。具报告。 各筛查实验室必须对样品进行各筛查实验室必须对样品进行ELISAELISA或化学发光法或化学发光法检测。检测。不能只进行快速检测。不能只进行快速检测。 对于筛查阴性的样品出具对于筛查阴性的样品出具： “HIVHIV抗体阴性（抗体阴性（）”报告报告此为唯一正确格式检测及报告实验室间传递的样品应为血清或血浆，实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊除特殊情况外一般不

11、运送全血。情况外一般不运送全血。应采用三级包装系统（应采用三级包装系统（WHOWHO提出）提出）NO.1 NO.1 带螺帽的冻存管，要求防渗漏。带螺帽的冻存管，要求防渗漏。 标注：标注：姓名、种类以及采集时间。姓名、种类以及采集时间。 疑似阳性样品的处理试管的周围应垫有缓冲吸水材料（泡沫塑料等）。NO.2 NO.2 ：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，带盖子。（金属盒，硬塑料盒）一层容器，带盖子。（金属盒，硬塑料盒）NO.3NO.3：生物运输箱。外贴警示标签。：生物运输箱。外贴警示标签。 疑似阳性样品的处理随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置

12、，并由1名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员的手写签字。血清和血浆样品应在血清和血浆样品应在2 2 88条件下由专人运送。条件下由专人运送。用于用于CDCD4 4+ +/CD/CD8 8+ +T T淋巴细胞测定的样品应在室温下淋巴细胞测定的样品应在室温下1818 2525运送。运送。疑似阳性样品的处理运送必须有阳性标本转运登记表：送样人以及接收人都要有签字。实验室需要重视的问题：cutoff值的计算 临界值（临界值（cutoffcutoff值）是界定样品阴阳性的标值）是界定样品阴阳性的标准，不同的试剂有不同的设定方法。准，不同的试剂有不同的设定方法。 以珠海丽珠为例：以珠海丽珠为例： c

13、utoff cutoff值值=NC1+0.15=NC1+0.15。 （阴性对照（阴性对照0.080.08，按，按0.080.08计算）计算） 因此在因此在NC10.08NC10.08时，时，cutoffcutoff值值=0.230=0.230. .S/COS/CO值的计算：值的计算： S/CO S/CO值值= =样品样品ODOD值值/cutoff/cutoff值值 S/CO S/CO值值1 1为阳性，反之为阴性为阳性，反之为阴性。 实验室需要重视的问题：cutoff值的计算HIV检测一般不设灰度值，遇到临界的情况需重新检测并咨询上级检测单位。 外部质控目的：外部质控目的： 为了监控检测的重复性

14、和稳定性，为了监控检测的重复性和稳定性， 试剂盒批间或孔间差异。试剂盒批间或孔间差异。 包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界值（值（cutoffcutoff值）的值）的2 2 3 3倍为宜倍为宜。实验室需要重视的问题：实验室需要重视的问题：外部质控的设定外部质控的设定 外质控品可通过购买获得，不能使用试剂外质控品可通过购买获得，不能使用试剂盒中的阴盒中的阴/ /阳性对照配制。阳性对照配制。 按一周实验用量分装、分类、标记、封口、按一周实验用量分装、分类、标记、封口、-20-20冻

15、存于非自动除霜冰箱中。冻存于非自动除霜冰箱中。 不可反复冻融，一旦融化后应该存放不可反复冻融，一旦融化后应该存放2 2 88，一周内用完。，一周内用完。实验室需要重视的问题：实验室需要重视的问题：外部质控的设定外部质控的设定60/110l阳性血清60/110l阴性血清60/110l阴性血清60/110l阴性血清60/110l阴性血清60/110l阴性血清60/110l阴性血清质控品梯度稀释方法质控品梯度稀释方法将梯度稀释后的样品同普通样品一样进行OD值测定60/110l混合液 对于检测量小的单位，可以使用对于检测量小的单位，可以使用“即刻法即刻法”进行质量控制。进行质量控制。 对于检测量大的单

16、位，可以使用常对于检测量大的单位，可以使用常规方法（规方法（L-JL-J法）进行质量控制。法）进行质量控制。实验室需要重视的问题：质控方法的种类实验室需要重视的问题：质控方法的种类 “即刻法即刻法”质控是在对同一批外部质控是在对同一批外部质控血清（质控血清（Q Q）进行连续测定）进行连续测定3 3次后，次后，即可对第即可对第3 3次检验结果进行质控。次检验结果进行质控。一直到一直到2020次后更换为次后更换为“L-JL-J法质控法质控”为止。为止。 具体计算方法如下：具体计算方法如下：即刻法质控即刻法质控 将质控血清的测定值从小到大将质控血清的测定值从小到大 排列：排列： x1x1，x2x2，

17、x3x3xnxn (x1 (x1为最小值，为最小值，xnxn为最大值为最大值) )。计算平均值计算平均值 和标准差和标准差s s。x即刻法质控即刻法质控计算计算SISI上限值上限值 和和SISI下限值。下限值。将将SISI上限、上限、SISI下限与下限与“SISI值表值表”中的数字比中的数字比较。较。 即刻法质控即刻法质控即刻法质控即刻法质控 （4 4）当）当SISI上限值和上限值和SISI下限值下限值n2s n3s n3s时说明该值已在时说明该值已在3s3s范围之外，属范围之外，属“失控失控”。每增加一个测定值都要重新计算平均值和标准差，重复以上各项计算。即刻法质控即刻法质控 （7 7）数值

18、处于）数值处于“告警告警”和和“失控失控”状态应舍去，需重新测定该质控血清状态应舍去，需重新测定该质控血清和病人样品。和病人样品。 （8 8）舍去的只是失控的这次数值，）舍去的只是失控的这次数值，其它测定值仍可继续使用。其它测定值仍可继续使用。即刻法质控即刻法质控最常用的质控图是最常用的质控图是Levey-JenningsLevey-Jennings质控图，质控图，通过图形分析可提供一段时间内实验室质通过图形分析可提供一段时间内实验室质量控制的总体情况。量控制的总体情况。Levey-Jennings质控质控质控图参数包括：质控图参数包括： 算数平均值：算数平均值： 标准差标准差: : 是描述样

19、品与均数之间离散是描述样品与均数之间离散 程度的一个指标。程度的一个指标。 S S 变异系数：用来衡量检测的重复性。变异系数：用来衡量检测的重复性。CVCV经由经由“即刻法即刻法”质控后得到了质控后得到了2020个个Q Q的数据的数据作为基础数据计算得出各项参数值。作为基础数据计算得出各项参数值。xL-J法质控法质控 绘制质控图绘制质控图: :包含一条中心横线（均值线）包含一条中心横线（均值线） 和其上、下各两条平行的控制线（均值和其上、下各两条平行的控制线（均值1SD1SD和均值和均值 2SD2SD），并按时间顺序点入本），并按时间顺序点入本实验室每次试验实验室每次试验Q Q的测定值。的测定

20、值。L-J法质控法质控将平均值和标准差分别在质控框架图将平均值和标准差分别在质控框架图中标示出来。以中标示出来。以S/COS/CO值作纵座标值作纵座标(Y(Y轴轴) )，每一次试验时间点作为横座标，每一次试验时间点作为横座标(x(x轴轴) )，绘制质控图。，绘制质控图。L-J法质控法质控从第从第2121次的次的Q Q值起，将每次质控血清的值起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。检验进入质控状态。L-J法质控法质控前20次数据属于即刻法，在L-J法中成为基础数据不标入图中 告警（告警（2S2S）：当外部对照的）：当外部对照的S/CO

21、S/CO值超出值超出2s2s范围时，系统处于告警状态，应予注意，是范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。否可以继续检测需要进一步观察。 失控（失控（3S3S）：当外部对照的）：当外部对照的S/COS/CO值超出值超出3s3s范围时，系统处于失控状态，本次实验结果范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受。不能被接受。 可能是系统误差、随机误差或外部对照滴度可能是系统误差、随机误差或外部对照滴度下降造成。下降造成。 超出超出2s2s或或3s3s的数据不应删除的数据不应删除L-J法质控法质控 位移：连续几次（位移：连续几次（3 3 5 5次）外部对照次）外部对照

22、S/COS/CO值都落在均值的一侧则称为位移，提示实值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。验条件发生了较大的变化。 趋势：连续几次（趋势：连续几次（5 5 7 7次）外部对照次）外部对照S/COS/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。由参数的缓慢改变引起。L-J法质控法质控更换了新的试剂盒孵育时间和温度不准确更换新的检验人员更换了新的仪器设备（加样器、洗板机、酶标仪等）出现下列情况时，应暂停检测查找原因出现下列情况时，应暂停检测查找原因 出现一次出现一次3s3s范围的变化范围的变化 连续两次出现同一方向连续两次

23、出现同一方向2s2s范围的变化范围的变化 连续四次出现同一方向的连续四次出现同一方向的1s1s范围的变化范围的变化 连续连续1010次结果都在次结果都在1s1s范围内，但落在范围内，但落在 均值线的同一侧。均值线的同一侧。L-J法质控法质控 实验室应建立质控图分析及失控情况实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。处理程序。 当出现失控时必须找出问题原因，并当出现失控时必须找出问题原因，并找出解除故障的方法，消除原因，防找出解除故障的方法，消除原因，防止将来出现同样的问题。止将来出现同样的问题。L-J法质控法质控 建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒，更换

24、不同厂家的试剂盒后，必须重新盒，更换不同厂家的试剂盒后，必须重新配制质控品并重新进行新的质控，绘制新配制质控品并重新进行新的质控，绘制新的质控图。并在质控图上注明使用日期。的质控图。并在质控图上注明使用日期。 L-J法质控法质控 发现质控结果失控，应填写报告单，上发现质控结果失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告。出检测报告。 质控图上必须有质控图上必须有操作者操作者以及以及审核者审核者的的手写手写签名签名。L-J法质控法质控使用新批次的外部对照质控物时，必使用新批次的外部对照质控物时，必须重新绘制质控图。变异系数须重新绘制质控图。

25、变异系数(cv)(cv)小于小于2020，表示外部对照处于稳定状，表示外部对照处于稳定状态。态。L-J法质控法质控 实验室操作人员在实验室内必须穿戴规范的防护用品，隔离衣、实验室操作人员在实验室内必须穿戴规范的防护用品，隔离衣、口罩、帽子等。口罩、帽子等。 HIVHIV病毒对酒精等化学消毒剂敏感，实验室内应备有酒精喷壶等病毒对酒精等化学消毒剂敏感，实验室内应备有酒精喷壶等设备。设备。 实验室废弃物必须用高压蒸汽灭菌后，装入黄色垃圾袋中，并实验室废弃物必须用高压蒸汽灭菌后，装入黄色垃圾袋中，并贴上警示标签后。由专人负责转运。贴上警示标签后。由专人负责转运。并并填写废弃物转运登记。填写废弃物转运登

26、记。实验室需要重视的问题： 生物安全及废弃物处理 仪器鉴定是确保整个实验顺利进行的重要仪器鉴定是确保整个实验顺利进行的重要条件之一，是必须具备的。条件之一，是必须具备的。 仪器鉴定要提前进行，以防止仪器使用中仪器鉴定要提前进行，以防止仪器使用中出现鉴定过期现象。出现鉴定过期现象。 仪器的鉴定管理最好有专人负责管理。仪器的鉴定管理最好有专人负责管理。实验室需要重视的问题：仪器检定实验室需要重视的问题：仪器检定 济南市规定每月济南市规定每月5 5日之前报上个月的报表。日之前报上个月的报表。 每个月的报表的纸质版记录都需要保存。每个月的报表的纸质版记录都需要保存。 阳性结果上报必须以收到确认阳性报告

27、的时间阳性结果上报必须以收到确认阳性报告的时间为准，不可擅自上报。为准，不可擅自上报。 工作量为工作量为“0 0”也要上报。也要上报。实验室需要重视的问题：实验室月报济南市HIV确证实验室介绍：外观 艾滋病检测实验室艾滋病检测实验室需要相对独立的实需要相对独立的实验房间。验房间。 实验室门口必须贴实验室门口必须贴有黄色的生物安全有黄色的生物安全警示标志。警示标志。 在实验室的清洁区域放置在实验室的清洁区域放置打印机以及各种登记用的打印机以及各种登记用的文档。文档。 在清洁区内及时完成各种在清洁区内及时完成各种实验记录的书写工作。实验记录的书写工作。济南市HIV确证实验室介绍：布局 在实验室的污

28、染区内完在实验室的污染区内完成各项实验。成各项实验。 实验必须在生物安全柜实验必须在生物安全柜内进行。内进行。 实验人员必须穿着防护实验人员必须穿着防护服，带口罩、帽子、双服，带口罩、帽子、双层手套。层手套。济南市HIV确证实验室介绍：试验操作 实验室内放置温湿度实验室内放置温湿度仪，监控环境温度在仪，监控环境温度在18-2518-25。 酶标仪放置在污染区，酶标仪放置在污染区，与清洁区的打印机相与清洁区的打印机相连接。连接。济南市HIV确证实验室介绍：布局 实验室的所有资料需要分年度装订。实验室的所有资料需要分年度装订。 必须线装或胶状。不能只是放置于文件盒中。必须线装或胶状。不能只是放置于

29、文件盒中。 资料要妥善保存资料要妥善保存1515年，由专人管理，放置于上锁的年，由专人管理，放置于上锁的文件橱中。文件橱中。济南市HIV确证实验室介绍：档案管理 济南市艾滋病公用邮箱： 654321 济南市CDC病毒所邮箱： 济南市HIV筛查实验室QQ群号：128954939 加入时需注明：单位名称+姓 济南市hiv筛查实验室飞信群号：38749095各种关于艾滋病方面的文件、表格都在公用邮箱内。实验室需要重视的问题：cutoff值的计算 临界值（临界值（cutoffcutoff值）是界定样品阴阳性的标值）是界定样品阴阳性的标准，不同的试剂有不同的设定方法。准，不同的试剂有不同的设定方法。 以

30、珠海丽珠为例：以珠海丽珠为例： cutoff cutoff值值=NC1+0.15=NC1+0.15。 （阴性对照（阴性对照0.080.08，按，按0.080.08计算）计算） 因此在因此在NC10.08NC10.08时，时，cutoffcutoff值值=0.230=0.230. . 外部质控目的：外部质控目的： 为了监控检测的重复性和稳定性，为了监控检测的重复性和稳定性， 试剂盒批间或孔间差异。试剂盒批间或孔间差异。 包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界值（值（cutoffcutoff值）的值）的2 2 3 3倍为宜倍为宜。实验室需要重视的问题：实验室需要重视的问题：外部质控的设定外部质控的设定