急性单核细胞性白血病时 白血病性原始单核细胞呈阴性反应ppt课件

1、l细胞化学染色l 是细胞学和化学相结合而构成的一门科学，它以细胞形状学为根底，结合运用化学反响原理对细胞内的各种化学物质包括酯类、酶、糖、蛋白质、核酸做定位、定量、半定量分析的方法。l1 辅助判别急性白血病类型： 不同细胞系列含化学成分、分布、含量不同，且随细胞成熟化学成分和含量等发生相应的变化，据细胞化学染色结果不同可推断细胞系列l2 辅助血液病的诊断及鉴别诊断：血细胞在病理情况下其化学成分及含量会发生改动，可以辅助疾病诊断l一、过氧化物酶染色l二、糖原染色l三、碱性磷酸酶染色l四、铁染色l五、非特异性脂酶染色 概 述l一、原理l血细胞内的过氧化物酶Peroxidase,Pox分解H2O2，

2、释出初生态氧，使无色联苯胺氧化成蓝色联苯胺后者进一步变成棕黑色化合物，冷静于胞质内。l POXlH2O2(过氧化氢) H2O+Ol -2Hl无色联苯胺 蓝色联苯胺l棕黑色联苯胺l一、粒细胞系统l原始粒细胞大多呈阴性反响，有的可出现少量蓝黑色颗粒，自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均呈阳性反响，随细胞的成熟，阳性反响的程度逐渐加强。中性分叶核粒细胞均呈阳性反响。嗜酸性粒细胞阳性反响的程度最强，其阳性颗粒比中性粒细胞粗大，有折光性，嗜硷性粒细胞呈阴性反响。l二、单核细胞系统l原始单核细胞呈阴性反响，幼单及单核细胞呈弱阳性反响，阳性颗粒少而细小呈弥散分布，有的可呈阴性反响 l三、其他细胞l淋巴细胞、巨核细

3、胞、血小板、幼红细胞、浆细胞、组织细胞均呈阴性反响。l1、协助鉴别急性白血病的类型、协助鉴别急性白血病的类型l急性粒细胞性白血病时，白血病性原始粒细胞可急性粒细胞性白血病时，白血病性原始粒细胞可l呈阳性反响，阳性颗粒普通较多粗大常是局限分呈阳性反响，阳性颗粒普通较多粗大常是局限分l布；急性淋巴细胞性白血病时，原始和幼稚淋巴布；急性淋巴细胞性白血病时，原始和幼稚淋巴l细胞均呈阴性反响，急性单核细胞性白血病时，细胞均呈阴性反响，急性单核细胞性白血病时，l白血病性原始单核细胞呈阴性反响，有时虽少数白血病性原始单核细胞呈阴性反响，有时虽少数l呈阳性反响，但阳性颗粒少而细小，常弥散分布呈阳性反响，但阳性

4、颗粒少而细小，常弥散分布l小型原始粒细胞和原始淋巴细胞不易区别，假设小型原始粒细胞和原始淋巴细胞不易区别，假设l小型原始细胞呈过氧化物酶阳性反响，可确定为小型原始细胞呈过氧化物酶阳性反响，可确定为l小型原始粒细胞白血病。小型原始粒细胞白血病。 l2急性早幼粒细胞白血病与急性单核细胞白血病鉴别，假设白血病细胞呈过氧化物酶强阳性。可确定为早幼粒细胞白血病。l3急性单核细胞白血病有时须与组织细胞白血病鉴别，前者为弱阴性，后者阴性反响。l二、成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的二、成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的 变化变化l1、活性增高：可见于再生妨碍性贫血、活性增高：可见于再生妨碍性贫血、感染、急淋、慢淋。

5、感染、急淋、慢淋。l2、活性减低：可见于急粒、慢粒、急、活性减低：可见于急粒、慢粒、急单、单、MDS，及退化中性粒细胞，及退化中性粒细胞 l一、染色原理l 过碘酸是氧化剂，使含乙二醇CHOH-CHOH的多糖类物质氧化，构成双醛基，醛基与雪夫试剂中的无色品红结合，构成紫红色化合物，附着于含有多糖类的胞浆内。红色的深浅与细胞内能反响的乙二醇基的量成正比。l反响分两步进展l一、醛基的生成l CH2OH CH2OHl H C O O- H C C O-l C OH H C +HIO4 C H H Cl -O C C H -O C C Hl H OH O Ol二、二分子醛基与一分子无色品红雪夫试剂结合

6、构成新的紫红色化合物。l 盐酸 SO3Hl H2N C= =H2N+偏重亚 H2N C NH2l 硫酸钠l NH2 NH2-SO2H l (红色品红) (无色品红)l2分子醛基与1分子无色品红结合,构成新的紫红色化合物:l Hl R C SO2 NH C= =NH2l HOl Rl (紫红色化合物) NHSO2CH l OH l 过碘酸-雪夫反响的原理l1、粒细胞系统l原始粒细胞为阴性反响；自早幼至中性分叶粒细胞均呈阳性反响；随细胞成熟反响逐渐加强。嗜酸性粒细胞颗粒之间的胞浆呈红色，嗜碱性粒细胞为阳性反响 2、红细胞系统 普通幼红细胞与成红细胞均呈阴性反响 3、单核细胞系统 原单 幼单+ 单核

7、+4、淋巴细胞 多数淋巴细胞少数呈+5、巨核细胞、血小板+ 6、其他细胞 浆细胞普通为阴性反响，少数 呈阳性反响，巨噬细胞+ l- 胞浆中无颗粒l+ 浆淡红色 极少颗粒l+ 浆深红色 较少颗粒l+ 浆深红色 颗粒严密l+深红色 颗粒严密无空隙 l1、红血病、红白血病时，幼红细胞呈阳性反响，阳性反响百分比增高，程度也很强，有时个别红细胞也呈阳性反响l2、缺铁性贫血 ,珠蛋白生成妨碍地中海贫血以及MDS 时幼红细胞可呈阳性反响l3、巨幼贫 、溶贫，再障和白血病等疾病有时为阴性反响，有时个别幼红细胞呈阳性反响l4、鉴别白细胞系统疾病l 急性淋巴细胞白血病时，白血病性原始淋巴细胞的阳性反响物质为红色颗

8、粒状或红色块状，底色不红。急性粒细胞白血病时，白血病性原始粒细胞的阳性反响物质呈均匀分布的红色颗粒状或均匀红色，急单时，原始单核细胞的阳性反响物质呈红色颗粒状，弥散分布。l染色原理l1 钙钴法传统法l 血细胞的碱性磷酸酶在PH9.6左右的碱性条件下，将基质液中-甘油磷酸钠水解产生磷酸钠。磷酸钠与硝酸钙发生反响，构成不溶性磷酸钙。磷酸钙与硝酸钴发生反响，构成磷酸钴 ,与硫化胺发生反响，构成不溶性棕黑色的硫化钴沉淀。定位于酶活性之处 。 碱性磷酸酶 -甘油磷酸钠 甘油+PO43- PH9.6PO43-+Ca(NO3)2 Ca3(PO4)2Ca3(PO4)2+Co(NO3)2 Co3 (PO4)2C

9、o3 (PO4)2 +(NH4)2S CoS 黑色 l一0分 胞浆呈淡红色，无任何棕黑色颗 粒l分 胞浆呈均匀浅灰色，无颗粒或有少量细 黑色颗粒。l+ 2分胞浆呈均匀灰黑色，或出现较粗黑色颗粒l+分 胞浆中充溢棕黑色颗粒，但密度较低l+分 胞浆中充溢粗大的棕黑色颗 粒，致使全胞浆深黑色，可遮盖胞核。l末梢血片油镜下计数个中性杆状核及分叶核细胞，分别记录其分级情况，全部阳性反响细胞之和即阳性率。将得出各种积分的百分率乘以积分数，然后相加即为总积分 。l血细胞的碱性磷酸酶在PH9.6左右的碱l性条件下，能水解基质中磷酸萘酚钠底物，释放出萘酚，后者与重氮盐偶联，生成不溶性有色沉淀，定位于细胞质酶活性

10、之处 。NAP增高，见于严重化脓性感染，类白，真性红细胞增多，骨髓纤维化，多发性骨髓瘤、淋巴瘤、妊娠期，急性淋巴细胞白血病，慢性粒细胞白血病急性变。NAP减低，见于慢粒、急粒红白血病、绿色瘤、阵发性睡眠性血红蛋白尿。二、NAP染色对以下疾病的鉴别诊断有一定参考价值。慢粒与类白血病反响鉴别，前者积分为0，后者积分值常在200以上。阵发性睡眠性血蛋白尿与再障鉴别，前者积分低后者积分高。再障患者中性粒细胞愈低，贫血越差，NAP积分越高。病情好转时，NAP积分那么逐渐下降。急性白血病的细胞类型鉴别。急淋增高、急粒下降。白血病前期与再障鉴别。前者降低，后者常稍高。l一、原理：l 细胞外含铁血黄素和幼红细

11、胞内的铁与亚铁氰化钾在酸性条件下发生普鲁士蓝反响。构成蓝色的亚铁氰化铁沉淀，定位于含铁的部位。l4Fe3+3K4Fe(CN)6 Fe4Fe(CN)63+12K+l1、细胞外铁：细胞外铁呈蓝色的颗粒状、细胞外铁：细胞外铁呈蓝色的颗粒状小珠状或团块状，复染后细胞外铁主要小珠状或团块状，复染后细胞外铁主要存在于巨噬细胞的胞质内，有时也可见存在于巨噬细胞的胞质内，有时也可见于巨噬细胞外。于巨噬细胞外。l骨髓小粒无蓝色出现提示骨髓储存铁缺乏l有少数铁颗粒或偶见蓝色铁小珠l有许多颗粒或小珠l有许多铁颗粒小珠和少数蓝色小块l有极多铁颗粒小珠、并有很多小块密集l2、细胞内铁、细胞内铁l铁粒幼红细胞：胞质内出现

12、蓝色颗粒的铁粒幼红细胞：胞质内出现蓝色颗粒的幼红细胞称铁粒幼红细胞幼红细胞称铁粒幼红细胞l环铁粒幼红细胞：幼红细胞质内的蓝色环铁粒幼红细胞：幼红细胞质内的蓝色铁颗粒在铁颗粒在6个以上，并围绕于核周个以上，并围绕于核周1/2以以上为环铁粒幼红细胞上为环铁粒幼红细胞 l铁粒红细胞：成红细胞内出现蓝色颗粒铁粒红细胞：成红细胞内出现蓝色颗粒称铁粒红细胞称铁粒红细胞l细胞外铁+大多为+约/的人为l铁粒幼红细胞阳性率2以型为主，少数型。无环铁粒幼及铁粒红细胞l1、缺铁性贫血时 骨髓细胞外铁明显减低，甚到消逝。铁粒幼细胞的百分率减低，经有效铁剂治疗后，细胞外铁增多。l2、铁粒幼细胞贫血，出现较多环铁粒幼细胞

13、有时可见铁粒红细胞成红细胞内含有铁颗粒细胞外铁也常明显增多，本染色可作为铁粒幼细胞贫血的重要检查方法l3、骨髓增生异常综合症时，铁粒幼红细胞和环铁粒红细胞比例增高。l4、非缺铁性贫血 溶贫、巨幼贫、再障、多次输血后细胞外铁和内铁正常或添加；感染，肝硬化、慢性胃炎、尿毒症、血色病、细胞外铁添加而铁粒幼红细胞可减少。 l血细胞内含有多种酯酶等其同功酶，酯酶属水解酶。具有不同的生理功能这里引见醋酸ASD萘酚酯酶ASD NAE染色和氟化钠抑制实验。 l血细胞内的醋酸ASD萘酚酯酶，将基质中醋酸AS-D萘酚水解，释出ASD萘酚。ASD萘酚与基质液的坚牢蓝BB盐，偶联，构成不溶性蓝色沉淀，定位于胞质内。l 酯酶l醋酸AS-D萘酚 AS-D萘酚+醋酸lASD萘酚+坚牢蓝BB盐 不溶性蓝色沉淀l以一样方法制备2份基质液，其中1份参与足量氟化钠另一份不加氟化钠。将已固定的2张一样标本浸入2种不同基质液中，分别作醋液ASD萘酚酯酶染色。l1、粒细胞系统：原粒细胞阴性或阳性反响，自早幼粒至成熟中性粒细胞均为阳性反响