第1章补充酶类药物及其生产工艺ppt课件

1、常见的酶类药物及治疗作用常见酶类药物1 1、L-L-天门冬酰胺酶工艺道路天门冬酰胺酶工艺道路L-天门冬酰胺酶工艺阐明天门冬酰胺酶工艺阐明 菌种培育菌种培育 大肠杆菌大肠杆菌37培育培育24h普通牛肉普通牛肉培育基培育基; 种子培育种子培育 16玉米浆，接种量玉米浆，接种量 1 1.5，37，通气搅拌培育，通气搅拌培育 48h;发酵罐培育发酵罐培育 玉米浆培育基，接种量玉米浆培育基，接种量 8，37通气搅拌培育通气搅拌培育 6 8h，离心分别发酵液，离心分别发酵液，得菌体，加得菌体，加2倍量丙酮搅拌，压滤，滤饼过筛，倍量丙酮搅拌，压滤，滤饼过筛，自然风干成菌体干粉自然风干成菌体干粉;提取、沉淀、

2、热处置每千克菌体干粉参与提取、沉淀、热处置每千克菌体干粉参与0.01 mol/LpH8的硼酸缓冲液的硼酸缓冲液10L37搅拌搅拌1.5h，308mol/L醋酸调理醋酸调理pH4.24.4，压，压滤，滤液参与滤，滤液参与2倍体积的丙酮，放置倍体积的丙酮，放置34h过滤，过滤，搜集沉淀，自然风干，得干粗酶。搜集沉淀，自然风干，得干粗酶。取粗制酶，参与取粗制酶，参与03甘氨酸，调理甘氨酸，调理pH8.8搅拌搅拌1.5h离心，上清液离心，上清液6030min热处置。上清液热处置。上清液加加 2倍体积的丙酮，析出沉淀，离心，搜集酶倍体积的丙酮，析出沉淀，离心，搜集酶沉淀，沉淀，0.01mol/L，pH8

3、磷酸缓冲液溶解，离磷酸缓冲液溶解，离心得上清酶溶液。心得上清酶溶液。精制、冻干精制、冻干 调理调理pH8.8离心弃去沉淀，离心弃去沉淀，清液再调清液再调 pH7.7参与参与50聚乙二醇，浓度聚乙二醇，浓度到达到达 16。2 5放置放置 4 5天，离心得天，离心得沉淀。蒸馏水溶解加沉淀。蒸馏水溶解加 4倍量的丙酮沉淀，同倍量的丙酮沉淀，同法反复法反复 1次，次，pH6.4,0.05mol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液溶解，溶解，50聚乙二醇处置聚乙二醇处置 1次，即得无热原次，即得无热原的的 L一天门冬酸胺酶。溶于一天门冬酸胺酶。溶于 0.8mol/L磷酸磷酸缓冲液，在无菌条件下用缓冲液，在无菌条件下

4、用 6号垂熔漏斗过滤，号垂熔漏斗过滤，分装，冷冻枯燥制得注射用分装，冷冻枯燥制得注射用 L一天门冬酸一天门冬酸胺酶废品，每胺酶废品，每I支支 1万或万或 2万单位。万单位。二、细胞色素二、细胞色素C消费工艺消费工艺临床上主要用于组织缺氧的急救和辅助治疗药物，临床上主要用于组织缺氧的急救和辅助治疗药物，适用于治疗脑、心肌缺氧和其它因缺氧引起的一切适用于治疗脑、心肌缺氧和其它因缺氧引起的一切病症。病症。工艺过程绞碎、提取、压滤 取新颖或冷冻猪心，去血块、脂肪和肌健等，绞肉机中绞碎。称取心肌碎肉，加1.5倍量蒸馏水搅拌均匀，用硫酸调pH4左右，常温搅拌提取压滤，滤液用氨水调理pH6.2，离心得提取液

5、。心渣再加等量蒸馏水同上法反复提取1次，合并两次提取液。中和、吸附、洗脱提取液加氨水中和至pH7.5，在冰箱中静止沉淀杂蛋白，汲取上层清液，每升提取液参与10g人造沸石，搅拌吸附40min，静置倾去上层清液。搜集吸附细胞色素 C的人造沸石，用蒸馏水和氯化钠溶液反复洗涤，然后装柱，用 25硫酸氨溶液洗脱，得洗脱液。盐析、浓缩、透析 洗脱液参与固体硫酸镀到达 45饱和度，使杂蛋白析出，过滤。搜集透明滤液，渐渐参与 20三氯醋酸，边加边搅拌使细胞色素 C沉淀析出，离心搜集沉淀。再将沉淀溶于蒸馏水，装入透析袋中，透析至无硫酸根为止，过滤得细胞色素C粗品溶液。 吸附、洗脱、透析粗品溶液经过处置好的 Amberite IRC50NH4树脂柱吸附，然后将树脂移入大烧杯中，水洗至廓清为止，再分别上柱，用06mol/L磷酸氢二钠与0.4mol /L氯化钠混合液洗脱，洗脱液用蒸馏水透析去氯离子，得细胞色素C精品溶液。 制剂取含相当于1.5g的细胞色素C精品液，加200mg亚硫酸氢钠，搅拌溶