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文档简介

1、Transwell 细胞培养设计实验一： 探究共培养条件分泌组是否有变化即细胞 A 和细胞 B 在共培养条件下其各自分泌组是否受到影响 （暂且不讨论谁对谁的影响） 。 设计实验：1 .使用 Transwell 培养技术，上层培养细胞 A（细胞数设置为 1*10 八 5个举例）下层培养细胞 B（细胞数设置为 2*10 八 5 个举例）共培养 h 小时，从培养液中提取分泌蛋白（记为蛋白 i）。Transwell12 .相同培养条件（培养基含量，细胞数，培养时间，温度等）设置两个 Transwell:上层培养细胞 A（细胞数设置为 1*10 八 5 个举例）下层不放置细胞，上层不放置细胞，下层培养细

2、胞 B（细胞数设置为 2*10 八 5 个举例）,培养 h 小时，从培养液中提取分泌蛋白（记为蛋白 ii）。3 .质谱分析蛋白 i 和蛋白 ii 的差别，初步分析共培养条件下分泌组是否影Transwell2-(1)Transwell2-响4 .置换细胞 A,细胞 B 培养的上下层条件，相同方法培养细胞，打质谱分析蛋白，分析结果是否与实验一有差别，进一步分析原因。总结：该方法尽可能的同一了共培养和单独培养的差异，即排除了其他影响条件，只对比在共培养和单独培养条件下分泌组的变化，从而为得到可信数据提供了条件，对照分析了在共培养条件下与单独培养条件下分泌组的变化情况。缺点：由于细胞均未标记，即便结果显示共培养和单独培养分泌组确实有变化，仍无法得出两种细胞谁影响谁，由此，可利用标记培养基的方法，继续优化实验。实验二：优化设计，将单独培养的细胞 A 培养基用 Leud-d3 标记，细胞 B用 Lys-C13标记，而对共同培养的 Transwell 不做任何标记。如图所示：Transwell1胞A未标记E未标记细脆ALeud-d3标记Transwell2-Transwell2-同实验一，经过相同条件的培养，提取分泌组，质谱分析（另做 AB 细胞上下层交换的实验），对比单独培养并分别标记与共培养但不标记条件下分泌组的变化，从而得到两种细胞在共培养条件下

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