培养基母液的配置

1、培养基母液与培养基的配置摘要：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。关键词：培养基母液 常用培养基 植物激素 1. 常用培养基种类，培养基母液的各种成分的量以及配置过程1.1常用培养基：MS培养基MS培养基是目前使用最普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于

2、胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。B5培养基与其他培养基相比，它的主要特点是含有较低的铵，而铵这一营养成分可能对有些培养基有抑制生长的作用。当愈伤组织和悬浮培养中对B5培养基与MS培养基进行对比培养试验时，发现有些植物的愈伤组织和细胞培养物在MS培养基上生长得好， 有些在B5培养基上生长得更适宜。N6培养基

3、为水稻的花药培养设计，成分简单，硝酸铵含量高，不含钼，用于花药（谷物）培养。LS培养基基本与MS培养基相同，LS成分相对少了。White培养基为培养番茄根尖培养设计，无机盐浓度低，属于低盐培养基。适用于生根培养，成熟胚胎培养，后作了改良，多用于本草植物。1.2几种常用培养基母液的各种成分的量以及配置过程培养基母液的各种成分包括大量元素、微量元素、Fe盐、有机成分、肌醇、激素等。1.2.1大量元素母液的配制（10X，1000ml）成分使用浓度（mg/L)配置1000ml培养基称取量（g)MS培养基 硝酸钾KNO3190019硝酸铵NH4NO3165016.5磷酸二氢钾 KH2PO4 1701.7

4、硫酸镁MgSO4.7H2O3703.7氯化钙CaCl2.2H2O4404.4B5培养基 KNO3250025 CaCl22H2O 1501.5 MgSO47H2O 2502.5(NH4)2SO4 1341.34N6培养基 硝酸钾(KN03)283028.3 硫酸铵(NH4SO4)4634.63 氯化钙(CaCl22HzO) 1661.66 硫酸镁(MgSO47H20)1851.85 磷酸二氢钾(KH2PO4)40041.2.2微量元素母液的配置（100X,500ml)成分使用浓度（mg/L)配置500ml培养基称取量（g)MS培养基 碘化钾KI0.830.0415 硼酸H3BO36.20.31

5、 硫酸锰MnSO4.4H2O22.31.12 硫酸锌ZnSO4.7 H2O 8.60.415 钼酸钠Na2MoO4.2 H2O0.250.0125 硫酸铜CuSO4.5 H2O0.0250.00125 氯化钴CoCl2.620.0250.00125B5培养基 KI 0.750.0375H3B043.00.15MnSO4.4H2O100.5ZnSO4.7H2O201Na2MOO4.2H2O0.250.0125Cocl2.6H2O0.0250.00125CuSO4.5H2O0.0250.00125N6培养基 硫酸锰(MnS044H20)4.40.22硫酸锌(ZnSO47H20)1.60.08硼酸(

6、H2BO3)0.80.04 碘化钾(KI)1.60.081.2.3Fe盐母液的配置（100X,200ml）成分使用浓度（mg/l)配置200ml培养基称取量（g)MS培养基、B5培养基 乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA 37.30.746硫酸亚铁FeSO24.7H2O27.80.556N6培养基 乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA 37.250.745硫酸亚铁FeSO24.7H2O27.850.5571.2.4有机成分母液的配置（100X，200ml，不含肌醇）成分使用浓度（mg/l)配置200ml培养基称取量（g)MS培养基甘氨酸20.04盐酸硫胺素 VB10.10.002盐酸吡哆醇 VB60

7、.50.01烟酸 VB5或VPP0.50.01蔗糖300006B5培养基烟酸 VB5或VPP1.00.02盐酸吡哆醇 VB61.00.02盐酸硫胺100.2N6培养基烟酸 VB5或VPP0.50.01甘氨酸20.04盐酸硫胺素1.00.02盐酸吡哆素0.50.011.2.5肌醇母液配置（100X,200ml)培养基使用浓度（mg/l)配置200ml培养基称取量（g)MS培养基1002B5培养基1002N6培养基不含肌醇1.2.6激素母液的配置名称使用浓度(mg/ml)溶剂母液体积（ml)配置母液称取量（mg）6-BA0.2先用95%乙醇溶解，再加水定容10020NAA0.2先用95%乙醇溶解，

8、再加水定容100202-4D0.2先用95%乙醇溶解，再加水定容10020KT0.1先用1mol/lNaOH溶解，再加水定容100102. 以配置胡萝卜诱导培养基为例叙述培养的成分、用量和配置过程。2.1胡萝卜诱导培养基配方：MS培养基+6-NA0.2+NAA0.05+糖30g/l+琼脂7g/l 培养基200ml,PH5.6-5.8。2.2用量计算：MS培养基 ，由上面各种母液的浓度，考虑母液倍数，得出下表：成分每200ml吸取量（ml)大量元素20微量元素2铁盐2有机成分2肌醇2已知6-BA浓度为0.2mg/ml，因此要令200ml中6-BA浓度为0.2mg/l，则计算得要吸取6-BA的量为

9、：200ml*0.0002mg/ml/0.2mg/ml=0.2ml,同理可计算出NAA应吸取0.025ml,称取糖6g，琼脂1.4g。加水至差不多200ml，在微波炉中煮沸，稍微冷却后调PH至5.8，最后定容至200ml，用锡箔纸封好，灭菌。3. 注意事项3.1配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42-、Mg2+和H2PO4-等离子错开混

10、合，速度宜慢，边搅拌边混合。CaCl22H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl22H2O时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl22H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。3.2使用电子分析天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用吸耳球将天平内的脏物清理干净。3.3在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2-EDTA鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出。为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。3.4由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成伤害，