血小板抗原抗体检测及其在血液病科临床应用

1、血小板抗原抗体检测及其在血液病科临床应用010203血小板抗原血小板抗原血小板抗体与疾病血小板抗体与疾病血小板抗体检测的临床意义和临床应用血小板抗体检测的临床意义和临床应用04临床治疗方案参考临床治疗方案参考血小板简介血小板简介血小板：血小板：D:2-5umD:2-5um V:V:红细胞红细胞* *1/51/5功能：促进止血和加速凝血功能：促进止血和加速凝血正常范围：正常范围：100-300100-30010109 9/L/L骨髓干细胞骨髓干细胞胞质块脱落胞质块脱落来源来源：多功能祖细胞多功能祖细胞巨核祖细胞巨核祖细胞幼巨核细胞幼巨核细胞巨核细胞巨核细胞血小板血小板血小板形态血小板形态静息状态

2、静息状态活化状态活化状态血小板抗原血小板抗原血小板血小板“非特异性非特异性”抗原抗原血小板血小板“特异性特异性”抗原抗原 HPAHPA抗原抗原 HLA-HLA-类抗原类抗原 ABHABH抗原抗原u血小板具有血小板具有HLA-HLA-类抗原（类抗原（HLA-AHLA-A、HLA-BHLA-B抗原和少量抗原和少量HLA-CHLA-C抗原），无抗原），无HLA-HLA-类抗原。故输注血小板要比器类抗原。故输注血小板要比器官移植所需配型简单。官移植所需配型简单。u血小板个体间血小板个体间HLA-HLA-类抗原位点数差别不大。类抗原位点数差别不大。u每个血小板上至少有每个血小板上至少有200002000

3、0个个HLAHLA抗原位点。抗原位点。HLAHLA抗原抗原u部分为血小板的固有蛋白，另一部分从血浆中吸附。部分为血小板的固有蛋白，另一部分从血浆中吸附。u血小板上的血小板上的ABHABH抗原个体之间表达不同，约抗原个体之间表达不同，约5%5%的非的非O O型型个体为个体为A A抗原或抗原或B B抗原的高表达者。抗原的高表达者。u故血小板输血应同型输注；抗体检测应采用故血小板输血应同型输注；抗体检测应采用O O型血小型血小板，以排除板，以排除ABOABO系统抗体的干扰。系统抗体的干扰。GPIbGPIb、GPIIb/IIIaGPIIb/IIIa、 GPIa/IiaGPIa/Iia、CD109CD1

4、09等也携带少等也携带少量量ABHABH抗原抗原ABHABH抗原抗原u主要存在于血小板膜的主要存在于血小板膜的GPGP分子上，也少量存在于血分子上，也少量存在于血管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细胞。管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细胞。u19901990年国际输血协会血小板免疫学工作组提出了年国际输血协会血小板免疫学工作组提出了HPAHPA命名，以发现的时间顺序排列：命名，以发现的时间顺序排列：HPA-1HPA-1、HPA-2HPA-2、HPA-HPA-3 3等系统。等系统。HPAHPA抗原抗原u已确定了已确定了3333个个HPAHPA，其中，其中12 12 个抗原为双等位基因表达（个抗原为

5、双等位基因表达（HPA-HPA-1,-2,-3,-41,-2,-3,-4，-5-5和和-15-15）。其中高频率抗原命名）。其中高频率抗原命名a a，低频率抗原，低频率抗原命名命名b b。其余。其余2121个抗原为低频率抗原，尚未发现对偶抗原，命名个抗原为低频率抗原，尚未发现对偶抗原，命名为为bwbw。u单核苷酸多态性（单核苷酸多态性（SNPSNP）:33:33个个HPAHPA中均已搞清楚基因背景，其中均已搞清楚基因背景，其中中3232个个HPAHPA的多态性型是由一个氨基酸置换所致，而这又是由编的多态性型是由一个氨基酸置换所致，而这又是由编码血小板膜糖蛋白（码血小板膜糖蛋白（GPGP）基因的

6、一个核苷酸的不同所致。）基因的一个核苷酸的不同所致。uHPA-14bwHPA-14bw不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发生在不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发生在 AAG1929-31AAG1929-31。HPAHPA抗原抗原HPAHPA抗原抗原HPAHPA抗原抗原血小板抗原定型血小板抗原定型u血清学定型血清学定型即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原缺点：特异性抗体来源困难缺点：特异性抗体来源困难 -人血清中血小板抗体通常为多特异性人血清中血小板抗体通常为多特异性 -单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1aHPA-1a单抗

7、，单抗， 无其它无其它HPAHPA单抗。单抗。u基因定型基因定型限制性片段长度多态性分析（限制性片段长度多态性分析（RFLPRFLP）序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO)(PCR-SSO)序列特异性引物聚合酶链反应序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)(PCR-SSP)用途：（1 1）健康人群）健康人群HPAHPA基因分型，建立已知基因分型，建立已知HPAHPA基因型的血小板献血员库。基因型的血小板献血员库。（2 2）检测受者）检测受者HPAHPA基因型，以便从血小板献血员库中寻找与其基因型，以便从血小板献血员库中寻找与其HPAHPA基因型相基因

8、型相 匹配的血小板供者。匹配的血小板供者。（3 3）检测患者）检测患者HPAHPA基因型，辅助临床胎儿基因型，辅助临床胎儿/ /新生儿免疫性血小板减少症、输新生儿免疫性血小板减少症、输 血后紫癜及血小板输注无效症等疾病的病因诊断。血后紫癜及血小板输注无效症等疾病的病因诊断。（4 4）对特定区域或种族人群）对特定区域或种族人群HPAHPA基因分型，可为人类遗传学研究提供相关基因分型，可为人类遗传学研究提供相关 资料和证据。资料和证据。1aa2aa3ab4aa5aa6aa7aa8aa9aa10aa11aa12aa13aa14aa15ab16aa17aa血小板抗原定型血小板抗原定型血小板抗体的产生方

9、式血小板抗体的产生方式 以上途径产生的血小板同种抗体与血小板上以上途径产生的血小板同种抗体与血小板上的相应抗原结合，导致血小板被内皮网状系统清除。的相应抗原结合，导致血小板被内皮网状系统清除。怀孕怀孕移植（骨髓、器官）移植（骨髓、器官）药物、自身免疫药物、自身免疫输血小板、红细胞（尤其是没输血小板、红细胞（尤其是没有滤白的红细胞）有滤白的红细胞）血小板抗体与部分相关疾病血小板抗体与部分相关疾病 抗抗 体体分分 类类疾疾 病病HLA / HPA HLA / HPA 抗抗 体体其其 它它 抗抗 体体同同 种种抗抗 体体格兰茨曼血小板功能格兰茨曼血小板功能不全病不全病抗抗GPb/aPb/a抗体抗体同

10、同 种种 异异体体 抗抗 体体新生儿同种异体免疫新生儿同种异体免疫性血小板减少症性血小板减少症HPA1a(78%), HPA5b(19%)HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, Anti-CD36血小板输注无效症血小板输注无效症HLA-I抗体抗体5080% ,HPA1725%(日本人为日本人为HPA-2b), HPA-15, anti-CD36极少数为极少数为ABO抗体抗体血小板输血后紫癜血小板输血后紫癜HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15, anti-CD36少数为抗少数为抗GPIa/IIa抗体抗体被动同种异体免疫被动同种异体

11、免疫性血小板减少症性血小板减少症HPA-1a,HPA-5b移植相关同种异体移植相关同种异体免疫性血小板减少症免疫性血小板减少症HPA-1a,HPA-3,HPA-5b自自 身身抗抗 体体自发性血小板减少症自发性血小板减少症多数位于多数位于GPb/ab/aGPIb/IX/VIb/IX/V，少数位于，少数位于GPIV/V IV/V 和和 GPIa/IIaGPIa/IIa继发于母体自发性继发于母体自发性血小板减少症血小板减少症同上同上药物依药物依赖性抗赖性抗体体奎宁奎宁/奎尼丁抗体奎尼丁抗体所致疾病所致疾病抗原位于抗原位于GPb/ab/a和和GPIb/IXIb/IX肝素抗体所致疾病肝素抗体所致疾病抗原

12、表位是抗原表位是PF4血小板抗体检测常用方法血小板抗体检测常用方法功能性功能性试验试验酶标法酶标法荧光法荧光法固相凝集法固相凝集法应用应用范围范围抗体检测抗体检测交叉配型交叉配型性能性能灵敏度灵敏度低低高高极高极高高高特异性特异性不好不好好好一般一般较好较好反应时间反应时间长长2h2h2h2h1h1h所用仪器所用仪器不定不定酶标仪酶标仪荧光显微镜荧光显微镜或流式细胞仪或流式细胞仪平板离心机平板离心机16th16th版版AABBAABB评价评价未提及未提及特异性鉴定特异性鉴定的可靠方法的可靠方法敏感性高敏感性高特异性不足特异性不足血小板交叉配型应血小板交叉配型应用最为广泛的方法用最为广泛的方法方

13、法方法指标指标血小板抗体检测方法血小板抗体检测方法- -固相凝集法固相凝集法血小板抗体筛检，包括血小板抗体筛检，包括HLAHLA抗体、抗体、HPAHPA抗体及其它血小板反应抗体及其它血小板反应性抗体。辅助血小板相关免疫性疾病的诊断。性抗体。辅助血小板相关免疫性疾病的诊断。血小板交叉配型，为患者筛选相容性的血小板或血小板供者，血小板交叉配型，为患者筛选相容性的血小板或血小板供者，避免血小板输注无效症的发生。避免血小板输注无效症的发生。患者自身抗体检测，包括血小板结合抗体和血清中游离抗体。患者自身抗体检测，包括血小板结合抗体和血清中游离抗体。检测血小板结合抗体可将患者血小板平铺在反应孔后，直检测血

14、小板结合抗体可将患者血小板平铺在反应孔后，直接加入抗人接加入抗人IgGIgG和指示红细胞进行检测。血清中的游离抗和指示红细胞进行检测。血清中的游离抗体可通过患者自身血小板和血清反应来检测。体可通过患者自身血小板和血清反应来检测。用途：用途：血小板抗体检测方法血小板抗体检测方法- -固相凝集法固相凝集法 l1.1.预防血小板输注无效症的发生：通过对患者进行血小板抗体筛查和与预防血小板输注无效症的发生：通过对患者进行血小板抗体筛查和与血小板供者的交叉配型试验，筛选和患者血小板抗原配合性高的血小板供血小板供者的交叉配型试验，筛选和患者血小板抗原配合性高的血小板供者，以提高血小板输注有效率，防止血小板

15、输注无效症的发生。者，以提高血小板输注有效率，防止血小板输注无效症的发生。l2.2.自身免疫性疾病的辅助诊断：检测患者血清和血浆中自身血小板抗体自身免疫性疾病的辅助诊断：检测患者血清和血浆中自身血小板抗体的水平和特异性，可辅助诊断自身免疫性疾病如白血病、再生障碍性贫血的水平和特异性，可辅助诊断自身免疫性疾病如白血病、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合症、血小板减少症、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、特发性、骨髓增生异常综合症、血小板减少症、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、特发性血小板减少性紫癜等。血小板减少性紫癜等。血小板抗体检测的临床意义血小板抗体检测的临床意义 l3.3.药物性抗体的检测：某些药物的存在如肝素、

16、奎宁、奎尼丁、药物性抗体的检测：某些药物的存在如肝素、奎宁、奎尼丁、环磷酞胺、甲氨蝶呤、阿司匹林、水杨酸钠等，选择性的抑制了环磷酞胺、甲氨蝶呤、阿司匹林、水杨酸钠等，选择性的抑制了骨髓巨核细胞造血功能，使血小板的生成减少，同时应用某种药骨髓巨核细胞造血功能，使血小板的生成减少，同时应用某种药物后，产生药物相关抗体，药物抗体复合物附着血小板膜上与补物后，产生药物相关抗体，药物抗体复合物附着血小板膜上与补体结合，使血小板聚集破坏，一些药物进入人体后也可直接破坏体结合，使血小板聚集破坏，一些药物进入人体后也可直接破坏血小板，造成血小板破坏增多，从而引发血小板减少。血小板，造成血小板破坏增多，从而引发

17、血小板减少。血小板抗体检测临床意义血小板抗体检测临床意义 l预防血小板输注无效预防血小板输注无效l自身免疫性疾病的辅助诊断自身免疫性疾病的辅助诊断l药物性抗体检测药物性抗体检测血小板抗体检测临床应用血小板抗体检测临床应用预防血小板输注无效预防血小板输注无效现状现状1.1.很多地区成分血不滤白；很多地区成分血不滤白；2.2.血小板盲输现象非常普遍；血小板盲输现象非常普遍；血液病患者输血小板时进行配型的重要性！血液病患者输血小板时进行配型的重要性！预防血小板输注无效预防血小板输注无效困惑困惑患者抗体阳性，没有配合的血小板怎么办！患者抗体阳性，没有配合的血小板怎么办！预防血小板输注无效预防血小板输注

18、无效反向推动血站配合临床供应配反向推动血站配合临床供应配型相合的血小板型相合的血小板提前告知患者输注风险提前告知患者输注风险针对患者个体状况采取针对性临床干预针对患者个体状况采取针对性临床干预血小板输注无效的危害血小板输注无效的危害 1 1）患者发生免疫反应，加重病情。）患者发生免疫反应，加重病情。 2 2）患者病情得不到改善，病危甚至死亡。）患者病情得不到改善，病危甚至死亡。 3 3）浪费财力、物力、宝贵的血小板资源。）浪费财力、物力、宝贵的血小板资源。 4 4）存在医疗纠纷隐患。）存在医疗纠纷隐患。 5 5）不利于采供血机构和医疗机构业务水平的提高。）不利于采供血机构和医疗机构业务水平的提

19、高。预防血小板输注无效预防血小板输注无效血小板抗体检测的应用：血小板输注无效的预防血小板抗体检测的应用：血小板输注无效的预防血小板抗体检测的应用：血小板输注无效的预防血小板抗体检测的应用：血小板输注无效的预防n血小板输血采用随机供者血小板有效率不超过血小板输血采用随机供者血小板有效率不超过30%30%；n采用交叉配型相容性血小板有效率为采用交叉配型相容性血小板有效率为92%92%，而对于重度血小，而对于重度血小板免疫患者，输注相容性血小板有效率为板免疫患者，输注相容性血小板有效率为70%70%。血小板交叉配型意义血小板交叉配型意义预防血小板输注无效预防血小板输注无效p 对对844844例贫血、

20、白血病、血小板减少及肿瘤等疾病患者进行血小板抗体检例贫血、白血病、血小板减少及肿瘤等疾病患者进行血小板抗体检测。其中有效病例测。其中有效病例766766例，其余例，其余7878例患者病例不祥。检测结果统计如下：例患者病例不祥。检测结果统计如下：病例数病例数男性男性女性女性平均年龄平均年龄血小板抗体阳血小板抗体阳性数性数抗体阳性抗体阳性率率贫血贫血（包括再障和溶血性贫血）（包括再障和溶血性贫血）30314016345.955116.8%白血病白血病99524741.602525.25%血小板减少血小板减少27111642.30933.33%肿瘤肿瘤60213956.3311.67%出血出血904

21、24852.3466.67%骨髓纤维化及骨髓纤维化及骨髓异常综合症骨髓异常综合症1912755.74736.84%其它病症其它病症168798948.12137.74%总计总计76635740947.5411214.62%临床数据：临床数据：预防血小板输注无效预防血小板输注无效海南省人民医院海南省人民医院共检测共检测102102例患者，阳性例患者，阳性1818例，平均阳性率例，平均阳性率17.6%17.6%预防血小板输注无效预防血小板输注无效9 9例抗筛阳性患者，例抗筛阳性患者，8 8例寻找到了相合的血小板，输注效果良例寻找到了相合的血小板，输注效果良好。好。中华临床医师杂志中华临床医师杂志

22、2012/012012/01预防血小板输注无效预防血小板输注无效 57 57例血小板输注无效患者中，血小板抗体阳性患者为例血小板输注无效患者中，血小板抗体阳性患者为2121例（例（3737） 采用固相凝集法对有血小板抗体的采用固相凝集法对有血小板抗体的2121例患者进行输注前交叉例患者进行输注前交叉配型来筛选血小板供者。选择交叉配型阴性或反应最弱的的供者配型来筛选血小板供者。选择交叉配型阴性或反应最弱的的供者血小板给患者输注。血小板给患者输注。2121例患者输注相容性血小板后，所有患者例患者输注相容性血小板后，所有患者1h CCI7.5109，24h CCI4.5109，有效率为，有效率为10

23、0。吉林大学第三医院吉林大学第三医院中国实验诊断学中国实验诊断学 20132013年第年第1 1期期预防血小板输注无效预防血小板输注无效广州血液中心广州血液中心9595例血小板输注患者经固相凝集法检测，血小板抗体例血小板输注患者经固相凝集法检测，血小板抗体阳性阳性3232例，抗体阳性率为例，抗体阳性率为33.7%33.7%。将血小板抗体阳性患者随机分成未配型组和配型组，各将血小板抗体阳性患者随机分成未配型组和配型组，各1616例。例。广东医学院学报广东医学院学报 2012/12012/1预防血小板输注无效预防血小板输注无效进行血小板抗体检测，可以辅助诊断血小板免疫性疾病，如进行血小板抗体检测，

24、可以辅助诊断血小板免疫性疾病，如ITPITP。自身免疫性疾病的辅助诊断自身免疫性疾病的辅助诊断一般认为，一般认为，ITPITP的发病机制包括血小板自身抗体导致的血的发病机制包括血小板自身抗体导致的血小板破坏和清除。小板破坏和清除。检测患者血小板自身结合抗体，了解血小板是否在体内致检测患者血小板自身结合抗体，了解血小板是否在体内致敏，是血小板自身抗体导致敏，是血小板自身抗体导致ITPITP发生的直接证据发生的直接证据检测患者血小板自身游离抗体，了解血浆中的自身抗体是检测患者血小板自身游离抗体，了解血浆中的自身抗体是否能在体外与患者自身血小板结合，是血小板自身抗体导否能在体外与患者自身血小板结合，

25、是血小板自身抗体导致致ITPITP发生的间接证据发生的间接证据自身免疫性疾病的辅助诊断自身免疫性疾病的辅助诊断l血液病患者血小板抗体检测及其与血小板输注疗效的相关血液病患者血小板抗体检测及其与血小板输注疗效的相关性研究性研究l夏世勤夏世勤 苏莉苏莉 刘秋洪刘秋洪 杨眉杨眉 安邦权安邦权 王茂玲王茂玲 于慧芳于慧芳l1 1贵州省人民医院输血科贵州省人民医院输血科 ，2 2遵义医学院检验系，遵义医学院检验系，l结论结论 血小板抗体的产生与血小板输注疗效密切相关，血小板抗体血小板抗体的产生与血小板输注疗效密切相关，血小板抗体是直接影响血小板输注效果是直接影响血小板输注效果 的重要免疫因素之一的重要免

26、疫因素之一 ；血液病患者的；血液病患者的病因与血小板抗体的产生有一定相关性病因与血小板抗体的产生有一定相关性 ； 血小板抗体的产生与患血小板抗体的产生与患者性别无关者性别无关 ； 血小板输注次数与血小板抗体产生密切相关：血小板输注次数与血小板抗体产生密切相关： 血血小板抗体的产生与输注的血小板种类有关，单采组明显低于浓缩组。小板抗体的产生与输注的血小板种类有关，单采组明显低于浓缩组。 医学检验医学检验 2013 2013年年8 8月第月第2O2O卷第卷第2222期期l流式细胞技术检测血小板相关抗体在流式细胞技术检测血小板相关抗体在ITPITP诊断中的应用研究诊断中的应用研究l吴国才，王珍吴国才

27、，王珍( (广东医学院附属医院广东医学院附属医院 血液内科血液内科 ，广东，广东 湛江湛江 524001)524001)l摘要摘要 ：目的：目的 探讨流式细胞技术检测血小板相关抗体在探讨流式细胞技术检测血小板相关抗体在ITPITP诊断中的意义诊断中的意义 。方法。方法 选选择择20122012年年5 5月至月至20132013年年6 6月在我院血液科住院的月在我院血液科住院的3O3O例例ITPITP患者为观察组患者为观察组, ,同期本院健康同期本院健康体检正常者体检正常者3O3O例为对照组，采用流式细胞技术检测两组对象的外周血血小板相关抗例为对照组，采用流式细胞技术检测两组对象的外周血血小板相

28、关抗体体PAIg(PAIgG PAIg(PAIgG 、PAIgM PAIgM 、PAIgA )PAIgA )水平水平 。结果。结果FCMFCM检测观察组患者血小板抗体检测观察组患者血小板抗体 ，PAIgGPAIgG阳性率为阳性率为7O,7O,平均荧光强度为平均荧光强度为(25.154-2.61)(25.154-2.61)，对照组平均荧光强度为，对照组平均荧光强度为 士士0.54),0.54),两组比较有显著性差异两组比较有显著性差异(P O.05);(P O.05);观察组观察组 PAIgM PAIgM 阳性率为阳性率为8O 8O ，平均荧光，平均荧光强度士强度士2.25)2.25)，对照组平

29、均荧光强度为，对照组平均荧光强度为 (5.184-0.58)(5.184-0.58)，两组，两组 比较有显著性差异比较有显著性差异(P (P 0.05)(PT 0.05)。结论。结论 流式流式细胞仪检测血小板相关抗体细胞仪检测血小板相关抗体 在在ITPITP诊断中具有重要的临床意义诊断中具有重要的临床意义 中国实验诊断学中国实验诊断学 2O142O14年年6 6月第月第1818卷第卷第 6 6 期期自身免疫性疾病的辅助诊断自身免疫性疾病的辅助诊断l 许多药物会导致血小板减少，常见的有肝素、奎宁、奎尼许多药物会导致血小板减少，常见的有肝素、奎宁、奎尼丁等，均会诱导产生药物依赖性血小板抗体，从而产

30、生血小丁等，均会诱导产生药物依赖性血小板抗体，从而产生血小板减少症板减少症。l 药物性抗体产生的机制尚不完全明了。目前认识药物性抗体产生的机制尚不完全明了。目前认识的产生机的产生机制主要有：制主要有：l 免疫复合物机制免疫复合物机制：药物与抗体结合形成免疫复合物：药物与抗体结合形成免疫复合物，与血与血 l 小板上的小板上的FcFc受体结合，介导血小板的破坏。受体结合，介导血小板的破坏。l 半抗原机制半抗原机制：药物小分子与血小板膜蛋白结合，形成新的：药物小分子与血小板膜蛋白结合，形成新的 l 抗原，刺激免疫系统产生抗体，从而破坏血小板。抗原，刺激免疫系统产生抗体，从而破坏血小板。药物性抗体检测

31、药物性抗体检测l血液科患者可能产生药物性抗体的用药：血液科患者可能产生药物性抗体的用药：l抗生素类：头孢他啶、头孢曲松、磺胺类、万古霉素抗生素类：头孢他啶、头孢曲松、磺胺类、万古霉素l镇痛剂：芬太尼、布洛芬、对乙酰氨基酚镇痛剂：芬太尼、布洛芬、对乙酰氨基酚l消化系统用药：雷尼替丁、消化系统用药：雷尼替丁、l心血管系统用药：心血管系统用药：ACEIACEI、阻滞剂阻滞剂l抗肿瘤药：奥沙利铂抗肿瘤药：奥沙利铂2. MF Leach. Detection of drug-dependent platelet antibodies by use of solid-phase red cell adhe

32、rence assay. British Journal of haematology,1997,97,755-761.1. Alan D. Michelson Platelets, Third Edition，Chapter 42 药物性抗体检测药物性抗体检测 怀疑患者因应用药物而导致血小板减少症时，应准备相怀疑患者因应用药物而导致血小板减少症时，应准备相应的药物。如果为液体剂型，可以直接使用。如果为固体剂应的药物。如果为液体剂型，可以直接使用。如果为固体剂型，需要将其破碎、溶解于蒸馏水中。型，需要将其破碎、溶解于蒸馏水中。 对于免疫复合物机制，可以将药物直接加入待检标本中；对于免疫复合物机

33、制，可以将药物直接加入待检标本中；对于半抗原机制，可将其加入对于半抗原机制，可将其加入0.5%0.5%缓冲液中。缓冲液中。 检测时加入药物的浓度，应参照相应药物的药代动力学检测时加入药物的浓度，应参照相应药物的药代动力学数据，选用下列三个浓度：数据，选用下列三个浓度： 1. 1.略低于谷浓度略低于谷浓度 2. 2.峰浓度峰浓度 3. 3.峰浓度的峰浓度的5-105-10倍。倍。药物性抗体检测药物性抗体检测对照标本与血小板对照标本与血小板 无药物性血小板减少症的健康人标本，作为本无药物性血小板减少症的健康人标本，作为本实验的对照标本。实验的对照标本。 4-64-6人份混合，人份混合，O O型血小

34、板。该血小板与待检型血小板。该血小板与待检血小板做配型实验，结果应为阴性。血小板做配型实验，结果应为阴性。药物性抗体检测药物性抗体检测 每一个标本使用三条试剂，一条用于免疫复合每一个标本使用三条试剂，一条用于免疫复合物机制，两条用于半抗原机制。物机制，两条用于半抗原机制。浓度1浓度2浓度3浓度1浓度2浓度3PCNC免疫复合物机制半抗原机制 对对 照照 标标 本本 阳阳 性性 对对 照照阴阴 性性 对对 照照检检 测测 标标 本本药物性抗体检测药物性抗体检测操作步骤：操作步骤：免疫复合物机制免疫复合物机制1. 1. 将血小板包被在微孔板上，洗板将血小板包被在微孔板上，洗板3 3次次2. 2. 加入两滴低离子强度溶液加入两滴低离子强度溶液3. 3. 加入两滴已加入不同浓度药物的待检标本（同时加入不添加入两滴已加入不同浓度药物的待检标本（同时加入不添 加药物的待检标本作为对照）加药物的待检标本作为对照）4. 4. 向阳性对照、阴性对照对照孔中分别加入试剂盒中的阳性向阳性对照、阴性对照对照孔中分别加入试剂盒中的阳性 对照、阴性对照对照、阴性对照5. 375. 37气育气育4545分钟分钟6. 6. 洗板洗板5 5次次7. 7. 立即加入抗人立