鲎试剂灵敏度复核操作规程

1、标题：1. 目的2. 范围3. 职责4. 参考资料5. 定义6. 鲎试剂灵敏度的复核标题：标题：7. 鲎试剂的有效期8. 鲎试剂的保存9. 需复核的情况10. 相关记录正文规范鲎试剂灵敏度复核的操作过程和要求，确保鲎试剂灵敏度复核结果的可靠性。适用于质监处药理室对鲎试剂灵敏度的复核。质监处药理室分析人员负责本规程的实施和完成相关记录。USP版附录85；CP版附录 E 。细菌内毒素检查法：本法系利用从鲎的变形细胞中提取的试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的含量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。鲎试剂：是鲎变形细胞的溶出物经提取而成

2、。鲎试剂灵敏度：在本检查法规定的条件下能检测出内毒素标准溶液或供试品溶液中的最低内毒素浓度，用EU/ml表示。细菌内毒素检查用水(BET水)：系指与灵敏度为0.03EU/ml 或更高灵敏度的鲎试剂在37±1 °C 条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。细菌内毒素标准品：USP细菌内毒素参考标准品(RSE)或已标定的细菌内毒素工作标准品(CSE)。反应终点浓度：是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈现阳性结果的浓度。一、试剂、材料与仪器设备试剂：鲎试剂 批号、灵敏度、规格、生产商。细菌内毒素检查用水(BET水) 批号、规格、生产商。细菌内毒素标准品 批号、效价、生产商。材

3、料及仪器设备：电热恒温水箱 型号、设备编号。电热鼓风干燥箱 型号、 设备编号。漩涡混合器 型号。无热原试管 规格：10´75mm。正文无热原玻璃瓶 规格：25ml。无热原玻璃吸管 规格：1ml、2ml、5ml、10ml。试管架、无热原封口膜、洗耳球、酒精棉球、砂轮片。二、试验准备试验所用的容器、用具都必须经过处理，250°C以上干烤至少1小时，以去除外源性内毒素。试验操作过程应避免微生物的污染。三、内毒素溶液配制细菌内毒素标准品系列溶液配制 取RSE或CSE 1瓶，按照使用说明书加入规定量的细菌内毒素检查用水使溶，并用漩涡混合器间歇混匀30分钟，然后用细菌内毒素检查用水进一

4、步稀释至2.0l、l、 0.5l、 0.25l 四个浓度的内毒素标准溶液，每一步稀释应混匀至少30秒钟。四、试验过程取被复核的鲎试剂原安瓿18支，分别用0.1ml细菌内毒素检查用水复溶。其中16支加入0.1ml细菌内毒素系列标准溶液，每浓度溶液平行做4支；另外2支加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。将安瓿中的溶液轻轻混匀后，用封口膜封闭管口，垂直放入37±1电热恒温水箱中，保温60±2分钟。反应结果记录在鲎试剂灵敏度复核记录中。五、试验结果观察和有效性结果观察 将安瓿从电热恒温水箱中轻轻取出，缓缓倒转180°时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为(+)； 凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性， 记录为()。保温和拿取安瓿过程应避免受到振动造成假阴性结果。有效性 对于细菌内毒素标准品系列溶液，如果最大浓度2.0l管均为阳性，最低浓度0.25l管均为阴性，阴性对照管均为阴性，试验方为有效。六、灵敏度复核结果的计算计算公式为：lc=lg-1(e/4)正文式中e为细菌内毒素标准品反应终点浓度的对数值。合格标准 当0.5llc<1.3l时，方可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏度l为该批鲎试剂的灵敏度。鲎试剂有效期按厂家规定执行。鲎试剂应在210条件下保存。当鲎