乳与乳制品非常规理化指标检验维生素AE的检测

1、乳与乳制品非常规理化指标检验维生素AE的检测YLNB5.101 .范围用液相色谱法测定各种婴幼儿配方食品和乳粉中的维生素A、E。2 .方法提要样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，经（用）乙醍萃取后，用高压液相色谱，紫外检测器定量测定。3 .试齐I所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1乙醍：脱醛3.2甲醇：色谱纯3.3异丙醇：色谱纯3.4无水乙醇：色谱纯3.5无水乙醇：分析纯3.6氢氧化钾溶液：质量体积比为500g/L3.7抗坏血酸：100g/L3.8无水硫酸钠：分析纯3.9维生素A、E标准溶液3.9.1维生素A标准贮备液，取适量维生素A醋酸

2、酯同5.2处理。3. 9.2维生素E标准贮备液，含维生素E40Oq/mL的乙醇（3.4）溶液。称取40mg勺a-生育酚，用乙醇（3.4）溶解并定容于100mL容量瓶中。称取40mg勺6-生育酚，用乙醇（3.4）溶解并定容于100mL容量瓶中。称取40mg勺丫-生育酚，用乙醇（3.4）溶解并定容于100mL容量瓶中。3. 9.3维生素A、E标准工作液。量取1mL隹生素A标准贮备液（3.9.1）和2.5mL维生素E标准贮备液（3.9.2）于100m喀量瓶中，用乙醇（3.4）溶解，0.45以n膜过滤，滤液作为标准工作溶液。按照下表中的波长在紫外分光光度计上测定吸收值，并按公式（1）和表中系数计算浓度

3、。标样波长（nnj）系数（S）维生素A(IU/ml)3253.33/1835a-生育酚（以g/ml）294716-生育酚（以g/ml）29891.2Y-生育酚（以29892.8g/ml）公式（1）C（IU/ml或以g/ml）=A'10000S式中：C一标样浓度，IU/ml或以g/mlA一在紫外分光光度计上测得的吸光值S一系数4,仪器及器材常用实验室仪器及：4. 1圆底烧瓶：250mL4. 2分液漏斗：500mL4. 3旋转蒸发仪。4. 4摇床水浴锅。4. 5高压液相色谱仪：具有可变波长的紫外检测器、数据处理系统或记录仪。4. 6紫外分光光度计。5.方法5. 1样品处理精确称取5,000

4、0g样品（液态奶20ml）,置于250mLM口三角瓶中，用水润湿。5. 2测定液的制备5.1.1 皂化：于上述处理的样品中加入50mLz醇溶液（3.5）,充分混匀后加15mLM氧化钾溶液（3.6）,再加入5m抗坏血酸溶液（3.7）,在90c水浴锅中连续回流30min后，立刻冷却到室温。5. 2.2转移：将皂化液定量转移到500m份液漏斗中，用少量水分几次冲洗磨口三角瓶，洗涤液并入分液漏斗中。5. 2.3萃取：于上述分液漏斗中，加入100m"!（3.1）,盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇1min,在振摇过程中，注意释放瓶内压力。静置分层，将水相放入另一500m6液漏斗中。重复上述萃取过

5、程，合并醍液到第一个分液漏斗中。用蒸储水洗该醍液至中性（用pH式纸测定），通过无水硫酸钠过滤干燥，在50c水浴和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至近干（绝不允许蒸干），取下，用氮气吹干，用无水乙醇（3.4）定量转移至50m喀量瓶中，定容，0.45n<膜过滤，滤液作为样品溶液。5. 3测定5. 3.1维生素所口E的测定5. 3.1.1仪器条件色谱柱：Ci8,250mm<4.6mm,OD驻或具等同性能的色谱柱。流动相：甲醇：水（98：2）。流速：1.0mL/min。灵敏度：0.005AU/MV。波长：维生素A,325nmj维生素E,290nm5 .3.1.2注射20以L维生素A、E标样（3.9.3）和20以L样品溶液（5.2.3）,得到标样和样品溶液中维生素A口E的峰面积。6 .结果计算样品中维生素A（IU/100g）AsCsdV.100Asdm样品中维生素E（mg/100g）=AsCsdV100Asdm式中：m-一样品白质量，g;A样品中维生素A或E的峰面积（或峰高）；A5d标样中维生素A或E的峰面积（或峰高）；Csd标样中维生素A或E的浓度，