临床检验基础学知识点

1、临床检验学临床检验医学clinicallaboratorymedicine血液三大尿液常粪便规体液脱落细胞学血型与血库临床检验医学的定义及研究范围临床检验医学的发展史及现状临床检验基础教学的目的学好临床检验基础的要求临床检验基础的发展史古代最早是检测尿液开始的。17世纪的显微镜的发明推动了临床检验的发展。AntonyvanLeeuwenhoek上世纪50年代，库尔特（Coulter）电阻抗原理的提出，使临床检验从手工步入自动化、电脑化，使得检验变得简便、快速、精密度高更。目前，试剂更加批量化、配套化、专业化和多样化检验液更加重视检验方法的标准化和质量控制，实施全面的质量控制和质量管理。试剂和仪

2、器的更新使得检验更便捷：如床边检测(pointofcaretest，POCT），使检测标本更新鲜、交叉污染率低、更接近病人的生理和病理情况。临床检验基础的现状（二）：实施与保证全面质量管理1.分析前：生理变化、饮食因素、药物因素、标本采集与保存等。2.分析中：检测方法、仪器设备性能与质量、试剂质量等。3.分析后：发报告的把关。复核其信息内容如姓名、性别、年龄、住院号、与疾病符合度等。临床检验的特点：1.操作的自动化2.方法的标准化3.技术的现代化4.试剂的商品化5.计量单位的国际化6.质量管理的全程化7.生物安全的严格化8.检验人员的合格化绪论临床检验医学的定义及研究范围临床检验医学的发展史及

3、现状临床检验基础教学的目的学好临床检验基础的要求临检的基础教学目的:1.疾病诊断和鉴别诊断2.疾病疗效监测和预后观察3.疾病预防4.科学研究教学目标：掌握：皮肤采血方法，Hb成分、种类及测定临床意义。熟悉：血液的组成、理化性质和功能，Hb的结构，参考范围。第一章chapter1血液标本采集和血涂片制备bloodcollection and bloodsmearpreparation血液组成离心后(写)血液主要理化性质颜色：动脉血鲜红色静脉血暗红色血浆浅黄色高脂膳食乳白色溶血血浆呈不同程度红色量：成人约占体重的7%9%，平均血量5L左右。pH：7.357.45比密：1.051.06渗透压：290

4、310mosm/Kg·H2O第一节血液标本采集 blood collection血液标本的采集是分析前质量控制的重要环节一、标本采集的一般要求1.检验申请单：患者、临床信息完整2.标本采集和处理具体要求：标本种类标识、采集时间、急诊和危重患者信息、3.标本信息完整性：标本的防腐、保温等。4.标本拒收：根据标本接收的文件不符合者。二、血液标本类型1.全血(whole blood)：静脉、动脉、毛细血管2.血浆(Plasma)：全血加入抗凝剂离心后的上清液。3.血清(serum)：血液凝固后离心所得上清液。4.分离或浓缩的血细胞成分：如血小板、白细胞、单个核细胞等。三、血液标本采集方法（

5、一）皮肤采血（二）静脉采血 （三）动脉采血（一）皮肤采血法适用于血量0.1ml的检验项目如RBC计数、WBC计数、Plt计数、Hb、ESR微量法等的测定等。器材：采血针专用的“采血针”或三棱针，用前应高压灭菌，一人一针。专用采血针 三棱针采血部位（1）手指采血：WHO推荐采取外周血以左手无名指或中指指采血部位尖内侧优点：方便、获较多血量结果比较恒定缺点：与静脉血仍存在某些差异。（2）耳垂采血：优点：痛感轻、方便、适用于反复采集缺点：血循环差受气温影响大、检查结果不恒定、RBC、WBC、Hb、Hct结果均比静脉血高，特别是冬季。（3）其他拇指、拇趾或足跟采血半岁以下婴幼儿皮肤完整处严重烧伤者采血

6、操作1、准备：2、采血部位按摩：3、消毒皮肤：4、针刺：5、擦去第一滴血后吸血：6、压住伤口片刻：注意事项（1）采血部位皮肤完整。（2）无菌技术操作：防采血部位感染，一人一针。（3）采血针刺入皮肤应深浅适中。（4）多项检查时，采血次序为：Plt计数RBC计数、HbWBC计数与分类。（5）取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入堵塞仪器。第二章chapter2血液一般检验blood general examination第一节红细胞检查Red blood cell (erythrocyte)examination红细胞检查内容：RBC是血液中最多的一种血细胞，其检查包括红细胞计数、血红蛋白

7、测定、红细胞形态观察、红细胞平均指数计算、网织红细胞计数、红细胞沉降率等。形态：无核，双凹圆盘形 不染色：呈草黄色RBC的生成及破坏：（见PPT）早幼红细胞 中幼红细胞 干细胞原始红细胞 晚幼红细胞 网织红细胞 成熟红细胞一、红细胞计数（red blood cell count）【原理（principle）】血液用等渗稀释液稀释一定倍数滴入血细胞计数盘显微镜下计数一定范围内的RBC数换算得每升血液中的RBC数。【参考范围（range）】成年女性:（3.55.0）×1012/L成年男性:（4.05.5）×1012/L新生儿：（6.07.0）×1012/L婴儿：（4.

8、04.3）×1012/L儿童：（4.04.5）×1012/L【临床意义（clinical meaning）】一、生理性变化(一)生理性增多1.机体缺氧而使RBC代偿性：新生儿、高原生活、强烈的体力劳动2.成年男性比女性高：男性在67岁时最低，2530岁时达高峰。女性2135岁维持最低水平。3.其他：抽烟、肾上腺素及糖皮质激素的应用等(二)生理性减少1.生长发育造血原料相对不足：从6个月至2岁婴幼儿2.造血功能减退：部分老年人生理性贫血3.血容量增加：妊娠中晚期二、病理性变化(一)病理性增多1.相对增多：血液浓缩2.绝对性增多：继发性增多：如心肺疾病原发性增多：如真性RBC增

9、多症高于6.8×1012/L应采取治疗措施(二)病理性减少1.RBC生成减少：骨髓功能衰竭：AA 造血物质缺乏或利用障碍：IDA、MA2.RBC破坏过多：内在缺陷 外在异常3.RBC丢失过多：低于1.5×1012/L应考虑输血二、血红蛋白测定Hemoglobin measurement(一)Hb分子结构及成分：血红蛋白(hemoglobin，Hb或HGB)是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质，由珠蛋白和亚铁血红素组成。0.347g铁相当于100gHb;每克Hb可携带1.34ml氧。4.其它：还原Hb：Fe2+氧合Hb：与O2结合的HbHb衍生物：HbC

10、O、SHb高铁Hb：Fe3+2014年6月17日59P24(二)Hb的测定：ICSH(International council for standardization haematology)推荐氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN）1.原理:Hb是色素蛋白，在血液中以多种形式存在，利用高铁氰化钾将Hb氧化成高铁血红蛋白（Hi），Hi可与CN结合成氰化高铁血红蛋白，在540nm处有一吸收峰，用分光光度计测定其吸光度，换算成每升血液中血红蛋白的含量。方法学评价（1）氰化高铁血红蛋白测定法优点：操作简单、显色稳定，便于推广。转化液较稳定，易保存。除SHb外各Hb均可测读A后直接计数。HiCN参考品可

11、长期保存，便于质控。缺点：KCN剧毒，易污染环境。不能测SHb，HbCO转化慢。浊度高引起Hb浓度假性增高：高球蛋白血症，脂血，试剂混浊，WBC和Plt高。（2）十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDSHb）测定法SDS能破坏WBC，摩尔消光系数未定。（3）碱羟血红蛋白测定法：HbF不能转化，最大吸收峰在575nm。（4）叠氮高铁Hb测定法：具有与HiCN法相似的优点，但仍存在试剂污染。（5）溴代十六烷基三甲铵血红蛋白测定法：不破坏WBC，精密度、准确性略低。2014年6月17日65P254.参考值新生儿：170200g/L女：110150g/L男：120160g/L70岁以上老年人：男：94122g/

12、L女：87112g/L质量控制（1）血清浊度：（2）器材及试剂质量：（3）技术与操作：（4）废弃物的处理：临床意义与RBC计数相似（1）鉴别贫血类型：IDA：RBCHbMA：RBCHb（2）影响检验结果的因素：血液总容量改变全身血浆容量改变教学目标：掌握：血红蛋白测定的原理、Hb成分、种类及测定临床意义；网织红细胞的形态、计数方法及测定的临床意义。熟悉：血涂片制备与染色、红细胞的形态学改变。了解：Hb测定的方法学评价。血红蛋白测定Hemoglobin measurement(一) Hb分子结构及成分：血红蛋白( hemoglobin，Hb或HGB )是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅

13、基的结合蛋白质，由珠蛋白和亚铁血红素组成。第三节血涂片制备与染色preparation and staining ofblood smears血涂片的制备（一）载玻片和推片：载玻片推片载玻片：清洁、干燥、中性、无油腻。推片：边缘光滑。（二）血涂片制作：良好血涂片：血膜至少长25mm。边缘整齐，两侧、两端留有空隙。头体尾分明：细胞从厚区到薄区逐步均匀分布。血膜末端无粒状、画线或裂隙。 (三)制备血涂片的影响因素推制适当的血膜角度大，速度快太厚，太短推片边缘不光整刷尖用力不均厚薄不匀血量过多、血液粘度高无尾载玻片有油腻血涂片染色染色就是染料透入被染物并存留其内部的过程。1.瑞氏染色法是血液染色最经

14、典和最常用的染色法。2.吉姆萨染色法3.瑞氏吉姆萨复合染色法4.细胞活体染色法5.巴氏染色法6.苏木素-伊红染色法（一）瑞氏染色法（Wright Stain）1. 瑞氏染料成分： 美蓝（又称亚甲蓝 ，methylene blue，M+）通常为氯盐，氯化美蓝(MCl)，阳离子，一种碱性染料。 伊红（eosin E）：通常为钠盐(NaE)，阴离子，一种酸性染料。 Wright染料MCl + NaEME+ NaCl 甲醇（溶剂、固定剂）： MEM+ + E 具有强大的脱水力。可将细胞固定为一定形态；使蛋白沉淀为颗粒状、网状等结构；增强染色效果；染色原理：物理的吸附作用 和化学的亲和作用正常情况染色结

15、果：外观：淡紫红色镜下： RBC呈粉红色，略有碟状感。 WBC浆中颗粒清楚，并显示各种细胞特有的色彩。 细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。RBC嗜碱性颗粒 中性颗粒 嗜酸性颗粒3. PH对细胞染色的影响：PH 正电荷增多 易与伊红结合 染色偏红PH 负电荷增多 易与美蓝结合 偏蓝染色的质量保证染液质量染色时间与染液浓度染色过程染液的冲洗脱色与复染4.方法学评价：瑞氏染色法：优点：对于细胞质成分及中性颗粒等的染色可获得很好的染色效果，缺点：对细胞核的染色不如吉姆萨染色吉姆萨染色：原理：同瑞氏染色。优点：本法对细胞核染色较好，结构更清晰。缺点：胞质和中性颗粒染色较差。瑞-吉复合染色：取长补短。第2

16、章 chapter 2血液一般检查blood general examination第一节红细胞检查Redblloodcellll(erythrocyte)examiinatiion红细胞形态检查Redblloodcellllmorphollogyexamiinatiion正常红细胞形态正常色素性normochromatic异常红细胞形态红细胞大小异常红细胞形态异常红细胞血红蛋白含量异常红细胞结构及排列异常1.RBC大小异常小RBC大RBC巨红细胞RBC大小不均d<6umd >10umd>15 um直径相差一倍以上2.RBC形态异常： 球形RBC椭圆形RBC靶形RBC口形RB

17、C镰形RBC棘形RBC裂片RBC缗钱状RBC泪滴形RBC3.红细胞内血红蛋白含量改变正常色素性normochromatic低色素性高色素性嗜多色性hypochromaticHyperchromaticpolychromaticRBC中出现异常结构：嗜碱点彩RBC染色质小体basophilicstippling cellHowell-Jollys body有核RBC疟原虫卡波环cabot ring nucleated erythrocyteplasmodium六、网织红细胞计数Retiicullocytecount1.定义介于晚幼红和成熟红细胞之间未完全成熟的RBC。胞质内含尚存留多少不等的嗜碱

18、性物质RNA，经活体染色后，嗜碱性物质凝聚成颗粒，其颗粒又可联缀成线而构成网状。原红 早幼 红中 幼红 晚幼红 网织红RBC2. 分级：I型丝球型：仅存于骨髓II 型 网型III型破网型：外周血少量IV型点粒型：多见于外周血3.Ret计数法（1）显微镜计数法【原理】阳离子染料进行活体染色，在显微镜下计数。【试剂】新亚甲蓝N溶液：煌焦油蓝溶液：【参考值】 成人：0.0080.02 或（2575）×109/L新生儿：0.020.06【方法（method）和质量控制 】1混匀1制成薄血涂片染液新鲜2d血液2d染1520min数1000Ret绝对值个RBC中计算出分数= Ret分数×

19、;RBC/L的Ret（2）Ret计数仪法（3）血液分析仪计数法（4）流式细胞仪计数法4. 临床意义（1）Ret增高：表示BM红系生成旺盛 溶血性贫血：可高达0.20以上，急性失血后510天Ret达高峰，2周后恢复正常。 放、化疗后，造血恢复时：Ret 可短暂而迅速增高。 Ret可作为贫血治疗疗效观察指标：抗贫血药物治疗后12天开始高，1周左右达高峰，贫血愈严重， Ret 升高超高，且Ret 先于RBC和Hb增高。 抗贫血药物治疗后，Ret不升高，说明治疗无效或骨髓造血功能有障碍。 骨髓移植后监测造血功能受抑或恢复：移植后21天，如15×109/L，表示无移植并发症。如15×

20、109/L ，且Plt、WBC增高，可能移植失败。Ret减少：表示骨髓造血机能减弱。常见再生障碍性贫血：Ret0.005绝对值15×109/L，为其诊断标准之一。 掌握内容：静脉采血的部位、抗凝剂的使用范围、HCT定义、临床意义, ESR定义、影响因素、临床意义,红细胞三个平均指数的计算及意义。 熟悉内容：静脉采血,抗凝剂,ESR、HCT测定的方法,参考值。了解内容：采血操作对检验结果的影响，血液标本运送、保存与处理。静脉采血法Vein puncture for blood collection凡需血量较多的检查0.2ml如：ESR、Hct、凝血因子的测定等。1.普通静脉采血法2.真

21、空采血法1.普通静脉采血法准备器材部位 体表浅静脉常用：肘部静脉幼儿可用：颈外静脉采血操作和注意事项真空采血法(负压采血法)主要原理是将有胶塞头盖的采血管抽成不同的真空度，利用针头、试管和针筒组合成全封闭的真空采血系统，实现自动定量采血。主要器材 双向采血针 真空采血管穿刺针刺塞针主要器材 双向采血针、真空采血管真空采血法的优点 计量准确 传送方便 封闭无菌 标识醒目 刻度清晰 容易保存等。采血方法 硬接式双向采血针的采血操作 软接式双向采血针的采血操作穿刺针刺塞针四、血液标本抗凝blood specimens anticoagulation抗 凝：用物理或化学的方法除去或抑制血液中的某些凝血

22、因子的活性，以阻止血液凝固。抗凝剂：能够阻止血液凝固的物质。1. 乙二胺四乙酸（EDTA）盐（ethylene diamine tetracetic acid）原理：与血钙离子形成螯合物。用量： 15g/L EDTA水溶液0.4ml：5ml血液适用于：血常规检查、Hct、Plt计数不适用于：凝血象检查和血小板功能试验2.枸橼酸钠（trisodium citrate）原 理：与血中钙离子形成可溶性螯合物用 法：109mmol/L与血1：9或1：4适用于：血栓与止血检验、ESR、输血保养液。不适用于：血细胞计数，Hct(不能干燥)3.肝素（heparin）：原理：加强AT-III灭活丝氨酸蛋白酶，

23、从而具有阻止凝血酶形成用量：1g/L水溶液，0.5ml干燥后可抗凝5ml血液。适用于：RBC脆性试验、Hct及细胞培养等。不适用于：WBC和Plt计数、血涂片检查、凝血象检验。4.草酸盐（oxalate）：原理：草酸根与血液中钙离子生成草酸钙沉淀。用法： 0.1mol/L浓度与血液之比1：9适用于：制备正吸浆。不适用于：对凝血因子V保护功能差，影响PT测定；沉淀物影响自动凝血仪的使用。第一节红细胞检查Redblloodcellll(erythrocyte)examiinatiion四、红细胞比容测定红细胞比容（hematocrit ，Hct或 packedcellvolume， PCV）是指在

24、一定体积全血中RBC所占容积的相对比例，与RBC数量和平均体积有关。（一）检测方法1.离心沉淀法：温氏法、微量血细胞比容法2.血液分析仪法：（二）温氏法的试剂、器材和质量控制长毛细滴管 温氏管血浆层白色乳糜层灰红色层暗红色层含还原HbHct含氧RBC层(三）方法学评价（四）参考值男：0.3800.508女：0.3350.450（五）临床意义1.HCT降低： 各种贫血稀释血症2.HCT增高： 血浆丢失RBC量增加3. 临床补液量的参考：4. 用于计算MCV和 MCHC五、红细胞平均指数1.平均红细胞容积：(mean corpuscular volume，MCV)RBC群体中各个RBC体积的平均值

25、。MCV× 10（fL） 1fL= 10 LRBC/L2. 平均红细胞血红蛋白含量：（mean corpuscular hemoglobin MCH)RBC群体中各个RBC血红蛋白含量的平均值。Hb(g/L)MCH =RBC/L×10 pg1pg= 10g3. 平均红细胞血红蛋白浓度：(mean corpuscular hemoglobin concentration MCHC)平均每升RBC中含有的Hb浓度Hb(g/L)MCHC =Hct4.参考值:MCV(fL)MCH (pg) MCHC(g/L)成人 801002634 32036013岁79104 2532 2803

26、50新生儿86120 27362503702014-6-17335.临床意义贫血的形态学分类MCV(fL)MCH (pg) MCHC(g/L)病因 正常细胞性贫血801002734320360 急HA、AA 单纯小细胞性贫血8027 320360慢性炎症 小细胞低色素性贫血8027320IDA 大细胞性贫血 100 34 320360 MA八、红细胞沉降率测定erythrocyte sedimentationrate ESR（一）定义：指在一定条件下，离体抗全血中的RBC自然下沉的速率。（二）魏氏法的试剂、器材和质量控制ESR1h后1.6ml血0.4ml抗凝剂三、 ESR影响因素血浆或RBC本

27、身发生改变则使血沉发生变化。1.血浆因素：纤维蛋白原球蛋白增高 ESR加快+-胆固醇白蛋白糖蛋白ESR减慢卵磷脂2.红细胞因素： RBC数量 RBC形态ESR快正常数量数量减少ESR慢3.抗凝剂影响实验温度血沉测定值校正值4.温度的影响温度升高，ESR增快5.血沉管因素：血沉管倾斜30，血沉加快30% (四) 参考值 <50岁 男：015mm/h女：020mm/h（五）方法学评价(六)临床意义：对疾病的鉴别和动态观察具有一定的参考价值1. 生理性增快：女比男快妊娠3月50岁妇女月经期2.病理性增快： 组织损伤、坏死和大手术：心肌梗塞和心绞痛鉴别。 恶性肿瘤：良、恶性肿瘤的鉴别。 各种炎症

28、：急性细菌感染、风湿病活动期、结核病活动期等。 高球蛋白血症：MM、SLE、肝硬化、慢性肾炎等。 高胆固醇血症：动脉粥样硬化、糖尿病等。3.ESR减慢:真性红细胞增多症、RBC形态异常、低纤维蛋白原血症等。 白细胞检验White blood cell(WBC) or Leukocyte(LEC)外周血 WBC：RBC 1：(500750)（一）白细胞的组成：WBC单核细胞monocyte 淋巴细胞lymphocyte粒细胞 granulocyte（ 中性粒细胞neutrocyte，NC嗜酸性粒细胞eosinophil，Eos 嗜碱性粒细胞basophil，Bas）（二）WBC起源及分布粒细胞的

29、发育过程如何计数WBC？ 白 细 胞 计 数white blood cellcount测定单位体积的外周血（循环池）中各种白细胞的总数。【检测原理】血液经一定倍数稀释并破坏红细胞计数换算【试剂】白细胞稀释液： 2%冰醋酸冰醋酸：溶解红细胞，同时固定核蛋白10g/L美蓝：数滴 可使核略为着色。2014-6-176【器材（equipment）】1、微量吸管：2、血细胞计数盘：0.1mm【方法和质量控制】11混匀 稀释液血20ul充池 0.38ml计数计算WBC/LN/4×10×106×20N/20×109血涂片WBC密度与WBC的总数的关系WBC血涂片WBC

30、个数/HP(47)×109/L24(79)×109/L46(1012)×109/L 610(1318)×109/L 10124. 减少计数域误差的措施WBC措施3×109/L扩大计数范围、缩小稀释倍数15×109/L增加稀释倍数、适当减少加血量 参考值：成 人： （410）×109/L儿童：（512） ×109/L6个月2岁：（1112）×109/L 新生儿：（1520）×109/L5.方法学评价：显微镜法血液分析仪法二、白细胞分类计数Diifferentiialllleukocytecount

31、，DLC(一)定义及方法：根据白细胞的形态进行分类计数，求得各种白细胞的百分比和绝对值。采血制备良好血涂片染色观察（二）外周血五种常见白细胞的形态中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞单核细胞淋巴细胞细胞 胞体 胞浆 胞核Neu d:1015um 较多细小均匀的杆状、分25叶，染色淡粉红中性颗粒 质小块状染成深紫红色 Eos d:1315um 充满粗大、紧密排列的桔红色嗜酸性颗粒 分两叶，呈八字形也有3 4叶者Bas d:1012um 少量粗大小不均，紫黑色嗜碱性颗粒常被颗粒遮盖，分叶不明显，模糊不清感 CellLymphocyte胞体小d：610um大d：1015um胞浆 透明蓝色， 有少量粗大

32、，但大小不等的紫红色颗粒胞核 粗糙致密，排列均匀，常隐约成块。CellMonocyte胞体d：1420um胞浆淡蓝或灰蓝，毛玻璃样半透明，含有细小、粉尘状紫红色颗粒胞核 大，不规则,染色质细致、疏松如网状(三)WBC分类计数法和质量保证：血涂片制备和染色：低倍镜：油镜：数100200个WBC分类计数，求出各种WBC 所占比值。 若有幼稚或异常WBC应分类鉴定，包括在WBC百分率中。 若有幼稚红细胞，应逐个计数，但不包括在WBC总数中。 有寄生虫和细胞形态有异常改变应报告。（(四) WBC分类计数参考值(成人)：WBC百分率(%)中性杆状核 15分叶核 5070Eos0.55Bas01LC204

33、0MC38（五）白细胞计数与分类的临床意义(1) 生理变化年龄：Neu和Lym两次交叉日间变化：安静、休息活动、进食，早晨下午运动、疼痛和情绪的影响：妊娠与分娩：，NC比值正常。分娩25天内恢复正常，如再次升高，有产后感染的可能性。（2）中性粒细胞病理性增多1).反应性增多 急性感染：最常见原因。a.急性化脓性胆囊炎： WBC20 ×109/Lb.急性胰腺炎： WBC10 ×109/Lc.肠缺血、坏死： WBC10 ×109/L，肠坏死的指标。d.局限性感染：轻度感染：WBC可正常；中度感染：WBC（1020）×109/L ；重度感染： WBC（2030

34、）×109/L严重的组织损伤：大量血细胞破坏和急性内出血：非造血系统恶性肿瘤急性中毒：2异常增生性增多：白血病： 急性：WBC（1050）×109/L ；慢性： WBC（100300）×109/L ；类白： WBC 100 ×109/L 。恶性肿瘤：肝癌、胃癌其他： 骨髓增殖性疾病、类风关、自身免疫性疾病、缺氧等。类白血病反应：机体对某些刺激因素所产生的类似白血病表现的血象反映。数量增多，并可出现幼稚细胞，但红细胞和血小板一般无变化，病因去除后逐渐消失。(3) 中性粒细胞减少某些感染： 伤寒、副伤寒等某些血液病：慢性理化损伤：药物、射线等脾功能亢进：自身

35、免疫性疾病：ITP(六) 异常白细胞形态1.中性粒细胞毒性变化：大小不均中毒颗粒空泡形成杜勒氏体核变性2.棒状小体（Auerbody)中性粒细胞毒性变化中性粒细胞的核象变化核左移(shift to left)：再生性的、退行性的核左移核右移(shift to right)中性粒细胞胞核异常形态：多分叶核中性粒细胞双核中性粒细胞 胞环形杆状核中性粒细胞巨多分叶核中性粒细胞 巨杆状核中性粒细胞淋巴细胞计数1、淋巴细胞数量变化：增多：某些病毒或细菌所致的急性传染病某些慢性感染 ：肾移植术后：LC性白血病：再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症：减少：主要见于接触放射线及应用肾上腺皮质激素。2、淋巴细胞形态学变

36、化： 异型 LC：在传染性单核细胞增多症、病毒性肺炎、流行性出血热、湿疹、过敏性疾病等病毒性感染或过敏原刺激下，可使淋巴细胞增生，并出现某些形态变化。I型 浆细胞型胞浆中含有小空泡或呈泡沬状。II型 单核细胞型胞核不规则似单核。III型 未成熟细胞型染色质细致呈网状排列，可见12个核仁。异形淋巴细胞 受放射线损伤后LC形态变化：卫星核 LC性白血病时形态学变化：课程要求：A.掌握：EOS和PLT计数的原理、方法、临床意义B.熟悉：质量控制、参考值C.了解：EOS和PLT的来源、功能、计数方法学评价 嗜酸性粒细胞(eosinophil)计数 EOS的功能A.趋化、吞噬作用B.抑制Bas和肥大细胞

37、活性物质的合成与释放C.分泌组胺酶破坏组胺，限制超敏反应D.参与寄生虫感染的病理过程 EOS计数方法【原理】用EOS稀释液将血液稀释一定倍数，同时破坏RBC和大部分其它WBC，并将EOS着色，然后滴入细胞计数盘中，计数一定范围内EOS数，即可求得每升血液中EOS数。【计数方法】1.显微镜计数法2.血液分析仪法【试剂】EOS稀释液：伊红-丙酮稀释液 、乙醇-伊红稀释液 、溴甲酚紫稀释液、固绿稀释液 EOS保护剂 (如丙酮、乙醇） 破坏RBC和大部分其它WBC(如碳酸钾、草酸铵或低渗状态) 将EOS着色 (如伊红、溴甲酚紫、固绿)【显微镜计数法操作方法】1混匀1充池计数：10个大方稀释液血20l0

38、.38ml格内的Eos 计算：Eos = N × 20×106/L【质量控制】n 尽量减少人为误差n 保护剂用量n 混匀不宜太过用力；适当延长混匀时间n 计数应在血液稀释后1h内完成n 注意与残留的中性粒细胞区别【参考值】（0.050.5）×109/L【临床意义】1生理变化： 劳动、饥饿、寒冷、精神刺激等Eos减低日间变化ü正常人Eos白天较低，夜间较高上午波动较大，下午比较恒定下丘脑垂体前叶促肾上腺皮质激素肾上腺皮质抑制骨髓释放EOS肾上腺皮质激素EOS减少EOS减少2.病理性变化： EOS增多： 0.5×109/L 寄生虫病：蛔虫、钩虫、绦

39、虫等 过敏性疾病：次于寄生虫病的另一病因，Eos常（12）×109/L如：支气管哮喘、荨麻疹、药物或食物过敏、血管神经性水肿、过敏性肺炎等 某些皮肤病：湿疹、剥脱性皮炎、银屑病等.血液病：慢粒、嗜酸性粒细胞性白血病等.某些恶性肿瘤：胃癌、肺癌、结肠癌、何杰金淋巴瘤. 某些传染病：猩红热(乙型溶血性链球菌). 某些内分泌疾病：脑垂体功能低下及原发性肾上腺皮质功能不全等(2). EOS减少：传染病急性期：伤寒、副伤寒 严重组织损伤：手术后应用肾上腺皮质激素或促肾上腺皮质激素后垂体或肾上腺皮质功能亢进时3. 嗜酸性粒细胞计数的其他应用A. 观察急性传染病的预后：急性感染时，嗜酸性粒细胞减少

40、，恢复时增高。B. 观察手术和烧伤病人的预后：手术后4小时，嗜酸性粒细胞减少，2448小时后增多；大面积烧伤的病人，数小时后嗜酸性粒细胞完全消失。C.测定肾上腺皮质功能：血小板 (platelet) 计数血小板出 血一、概述血小板（一）形态：胞体：圆形、椭圆形或不规则形胞质：淡蓝色或粉红色，中心部位有细小的紫红色颗粒，无核，常35成群聚集成团寿命：714天造血干细胞（二）来源：原始巨核细胞骨髓巨核细胞幼稚巨核细胞颗粒型巨核细胞产血小板巨核细胞裸核巨核细胞血小板（三）功能主要功能：粘附、聚集、释放、参与凝血和血块收缩、维护血管内皮完整等功能。二、计数不明原因的出血排除出血性疾病化疗和放疗病人的检

41、测怀疑骨髓造血系统疾病怀疑血小板破坏增加、消耗过多或反应性增多检测原理方法原理检测原理方法原理普通显微镜直接计数法 破坏红细胞溶血法和不破坏红细胞法 相差显微镜直接计数法相差显微镜下血小板立体感增强血液分析仪法电阻抗法和光散射法流式细胞仪法 免疫法荧光素标记血小板特异性抗体，流式细胞仪计数【原理】血液经一定比例稀释后，滴入计数池，在显微镜下计数一定体积内的血小板数，经换算求出每升血液中血小板的数量。 【试剂】草酸铵溶血法、复方尿素溶血法、高铁氰化钾法、复方碘法等。【操作方法】混匀静置 15min稀释液充池计数1ml血10lPLT/LN×10×100×106N

42、15;109【质量控制】原则：尽量避免PLT被激活、破坏，避免杂质污染。检测前：采血顺利ü 抗凝剂：肝素、EDTA-K2ü 储存温度和时间检测中：器材标准化，清洁干燥充池前充分摇匀，充池后静置15min后计数1h内计数完毕计数时光线要适中；注意与杂质鉴别检测后：PLT计数60×109/L ，应观察血涂片中的PLT分布情况。【参考值】（100300)×109/L【临床意义 】1.生理性变化： 正常人晨间较低，午后略高；春季低、冬季略高；平原居民低，高原居民略高。 妇女月经前低，月经后上升；妊娠中晚期升高，分娩后12天降低。 剧烈活动和饱餐后高、休息后恢复。

43、2.病理性变化：PLT数减低：小于100×109/L（2050)×109/L：轻度出血或手术后出血低于5×109/L：导致严重出血 PLT生成减少：AA、AL、恶性肿瘤放化疗后等 PLT破坏过多：ITP、脾亢 PLT消耗过多： DIC、血栓性血小板减少性紫癜等 PLT分布异常：脾肿大 先天性的PLT减少：PLT减少症、巨大PLT综合征血小板数增多： 400 ×109/L原发性增多：CML；真红反应性增多：急性化脓性感染；急性出血；脾切后异常血小板形态1、大小异常大血小板： d 47m小血小板： d 1.5m2、形态异常：血小板颗粒减少血小板卫星现象血小板

44、“粘附”红细胞3、聚集性和分布异常：非抗凝血外周血涂片中常可见35个聚集成簇，聚集与散在血小板之比为20：1复习题1.显微镜下计数EOS的区域是（ ）EA.一侧计数室，四角四个大方格B. 一侧计数室，对角两个大方格C. 两侧计数室，对角共四个大方格D.两侧计数室，四角共八个大方格E. 两侧计数室，共十个大方格2. 外周血中EOS增高见于（）DA.风疹感染期 B.传染性单核细胞增多症感染期C.百日咳感染期 D.猩红热感染期E.流行性腮腺炎感染期3.可引起EOS数量增高的一组疾病是（ ）DA.钩虫病，急性化脓性胆囊炎B. 急性失血，肺癌C. 荨麻疹，心肌梗死D.支气管哮喘，猩红热E. 严重外伤，肝

45、吸虫病4. 血小板减少是指血小板数量小于（）BA. 80×109/L B. 100×109/LC. 110×109/L D. 120×109/LE. 150×109/L 5. 血小板破坏过多见于（）DA.急性白血病 B. 急性放射病C. 急性溶血后 D. 原发性血小板减少性紫癜E. 血栓性血小板减少性紫癜6. 将20l血液加入0.38ml血小板稀释液中，计数5个中方格血小板数为78个，问每升血液中血小板是多少？判断血小板是增高还是降低了，并简述可能的病理原因？ 7简述嗜酸性粒细胞增高的原因有哪些？ 血型和输血(一)重点难点：血型定义、ABO系统

46、抗原、抗体、血型物质、血型鉴定、交叉配血熟习内容：ABO系统的亚型第一节 血 型血型（blood group）是指血液系统的一种遗传多态性，它是以血型抗原为表现形式的遗传性状，血型由血型基因决定，是血细胞的主要特征之一。血型系统有很多，常见的有ABO血型系统、Rh血型系统，此外还有Kidd血型系统、 MNSs血型系统等。一.ABO血型系统（一）抗原1.ABO抗原的遗传：由ABO、Hh、Sese三个分离位点的基因所控制ABO基因：ABO基因位于9q34，基因座上有A、B、O，A、B基因对于O基因是显性基因。父母各遗传给子代一个基因。有6个基因型，4种表现型ABO基因型表型RBC上抗原血清中抗体血

47、型AO、AAAA抗BABO、BBBB抗ABABABABABOOO抗A、BO8. ABO抗原的生物合成：基因ABO及H基因控制着A、B抗原的形成。O为无效基因；H位点有Hh两个等位基因，h为无效基因。ABH血型抗原决定簇的前身物质是红细胞膜上含4个糖的低聚糖链，由各自的糖基转移酶作用决定抗原物质的形成。9（1）前身物质：4个糖的低聚糖链（2）H物质： 基因H 岩藻糖转移酶H抗原（3）A抗原：The A Antigen基因A酶A：N-乙酰半乳糖氨基转移酶 A抗原（4）B抗原：基因B酶B：半乳糖基转移酶 B抗原（5）h基因：如体内仅有h基因，则不能合成岩藻糖转移酶，所以无H物质，表现型为O型，称为O

48、h型（孟买型）h基因RBC膜上含4个Oh型(孟买型)糖的低聚糖链O基因H物质RBC膜上含4个糖的低聚糖链A基因H基因A抗原H物质基转移酶转移酶B基因B抗原)基转移酶N-乙酰半乳糖胺N-acetyl GlucosamineD-GalactoseAN-乙酰葡萄糖胺H.ABO抗原的发生：（1）56周胎儿RBC可测出ABH抗原出生时还未发育完全。（2）新生儿A、B抗原位点较成人少（3）一般出生后18个月时才充分表现出抗原性。（4）抗原频率也有地区、种族差异。4.分 泌 型：血型物质：组织细胞也能合成分泌可溶性的ABH抗原存在于许多体液中。以唾液中含量最丰富，CSF中无。分 泌 型：体液中含有这种血型物

49、质者为分泌型80%人受控基因是Sese、SeSe非分泌型：无血型物质者约20%人受控基因是sese、se是无效基因。 血型物质的作用：辅助鉴定血型预测胎儿ABO血型：羊水可中和天然抗体，有助于鉴别抗体的性质。5 ABO系统抗体：1.抗A 、抗B抗体：主要是IgM天然抗体：机体没有经过可察觉的Ag刺激就在体内存在的Ab.人血清中存在的Ab能天然地与其自身RBC所缺乏的A、B抗原相对应血型定型的依据。产生：人在出生前尚未产生Ab ，生后几个月才开始形成自已的Ab， 56岁时达高峰，产生Ab的功能一直延续到生命的晚期，但成人后，效价随年龄增长而逐渐。免疫抗体：通过输注异型抗原刺激机体产生的抗体，Ig

50、G6.抗体特性：.抗A、B抗体：O型人血清中；与A型或B型RBC都能凝集。7.ABO系统的亚型：亚型：是指属于同一血型Ag，但Ag结构和性能或Ag位点数有一定差异所引起的变化。A亚型：最多见，有A1 、A2， A3， AX，我国人中A2和A2B型在A与AB型中所占比例1%A2的抗原性弱，定型时很可能误认为O型B亚型： 较A亚型少见，临床意义不大。（五）.ABO血型鉴定（ABO blood typing）【原理（principle）】 正定型：用已知标准抗血清检测RBC上的抗原。 反定型：用已知RBC测血清中的抗体。 【试剂（reagent）】1.标准抗A、抗B、抗AB血清： 制备：青壮年混合血

51、清，无菌分离，5630min灭活 标准：特异性：不含意外Ab，无非特异性凝集。效 价：抗A：1:128以上; 抗B：1:64以上。亲和力：血清0.05ml + 10%RBC0.1ml15S内出现凝集，3min凝块1mm2 。冷凝集素：冷凝集素效价1:4 。2. ABO血型单克隆抗体:特异性：能凝集A1、A2抗原。亲和力：对A1、A2、A2B分别为15s、30s、45s凝效价：大于1：128。稳定性：较血清抗体好。【方法（method）】 1. 玻片法 2. 试管法1. 玻片法： （正定型）【ABO血型的临床意义】1.输血2.新生儿溶血病检查3.器官移植4.其他用途：亲缘鉴定、可疑血迹、精斑、毛

52、等的鉴定及相关疾病的调查等（六）. 交叉配血交叉配血实验是在血型鉴定的基础上，进一步检查受血者和供血者血液中是否含有不相配的抗原和抗体成分的试验。交叉配血试验受血者不产生凝集或溶血时，方主侧可将供血者的血液或血液次成分给受血者输注。供侧血者目的：是在血型鉴定的基础上，进一步检测受血者和供血者血液中是否含有不配合的成分。33实验方法1.盐水介质配血2.聚凝胺介质配血3.微柱凝胶法配血4.酶介质配血菠萝酶，无花果酶，木瓜酶5.抗球蛋白介质配血1.盐水介质交叉配血试验 【原理】主要检查： 供受者血清中中是否存在破坏对方RBC的不规则IgM抗体或补体依赖性RBC抗体。 验证ABO血型鉴定是否正确，防止

53、发生急性溶血反应。【试剂和器材】生理盐水报告方式：1.受血者XXX(X型) 血清 供血者XXX(X型) 红细胞凝集溶血与否2.供血者XXX(X型) 血清 受血者XXX(X型) 红细胞凝集溶血与否3.受血者XXX与供血者XXX配血是否相合。4.实验方法：盐水介质交叉配血法2.低离子聚凝胺介质交叉配血试验【原理】RBC表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集凝聚胺溶解后能产生很多正电荷，可以中和RBC表面带有的负电荷缩短RBC之间距离，使RBC产生非特异性凝聚。利用低离子溶液，降低介质的离子强度，以促进RBC和抗体结合。加入重新悬浮液能中和凝聚胺阳离子的作用，使正常的RBC非特异性凝集散开。而RBC被相应的抗体致敏，则不会散开。3.微柱凝胶介质交叉配血试验 【原理】利用抗原抗体特异性反应的作用通过离心技术利用凝胶的微孔过滤作用，将发生凝集反应的RBC阻滞于凝胶之内，而未凝集的单个RBC则穿过微孔运动至柱底从而区分有无凝集。【结果判断】 阳性结果：主次侧或单侧管内RBC凝集块位于凝胶表面或凝胶中，和(或)出现溶血不相容不可输注反应强度：特异性RBC抗原 抗体复合物位于胶表面强阳性反