双甲脒有关物质气相分析方法验证方案

1、常州华夏农药有限公司双甲月米有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:1/22双甲眯有关物质气相分析方法验证方案方案批准起草人：日期：审核人：日期：部门9f人：日期：QC经理：日期：QA经理：日期：第1页共22页常州华夏农药有限公司双甲月米有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:2/22目录1 .概述31.1 验证目的31.2 验证项目32 .参考资料43 .色谱条件和分析过程43.1 色谱条件43.2 分析过程44 .器材和试剂54.1 器材54.2 试剂65 .验证内容65.1 系统适用性65.2 专属性75.3 检

2、测限、定量限85.4 线性和范围105.5 准确度135.6 精密度165.7 方法耐用性195.8 溶液稳定性216 .结论217 .审核和批准228 .文件变更历史22第2页共22页常州华夏农药有限公司双甲月米有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:3/221 .概述1.1 验证目的通过验证确定该方法适用于双甲月米有关物质的检测。1.2 验证项目本方法属于杂质定量检测方法，所以需要验证的项目有：系统适用性，专属性，系统精密度，检测限和定量限，线性及范围，准确度（回收率），方法耐用性，溶液稳定性。具体参数以及标准参考下表：验证项目接受标准验证结果系统适用

3、性连续6针对照溶液中各个杂质峰面积的RSD值不大于5.0%。杂质a:杂质b:杂质c:杂质d:专属性空白溶剂图谱中目标物出峰位置没有明显干扰；各个杂质之间分离度不小于1.5。检测限、定量限信噪比S/N在3-5范围内对应的杂质浓度为检测限；杂质a:杂质b:杂质c:杂质d:/噪比S/N在10-15范围内对应的杂质浓度为定量限。杂质a:杂质b:杂质c:杂质d:线性及范围杂质对照浓度的60%,80%,100%,120%,140%范围内线性相关系数不小于0.99。杂质a:杂质b:杂质c:杂质d:准确度在杂质对照浓度80%,100%,120%三个浓度点下，平均回收率在80%-120%范围内；各回收率的RSD

4、不10.0%。杂质a:RSD=杂质b:RSD=杂质c:RSD=杂质d:RSD=精密度重复性连续检测6次对照溶液，6针对照图谱中各个杂质峰面积的RSD值/、大于5.0%中间精密度由两个人在不同时间/、同的仪器上对同一批产品分别检测6次，杂质含量12次检测结果的RSD不大于25.0%。方法耐用性色谱条件发生微小变动时，方法仍适用于样品检测，对照图谱中各个杂质之间的分离度不小于1.5;连续6针对照各个杂质峰面积不大于5.0%。第3页共22页常州华夏农药有限公司双甲月米有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:4/22样品溶液放置一段时间后，杂质含量的绝对值在溶液稳

5、定性±0.1%以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质，则认定该时间内样品溶液是稳定的。2.参考资料ICHQ2(R1);EP<467>USP<20424>.3 .色谱条件和分析过程3.1 色谱条件仪器：GC,型号：检测器：UV,波长：nm色谱柱：石英毛细管柱（规格10mx0.53mm）,柱壁涂布5小的聚硅氧烷95%甲基，5%苯基固定相（毛细管柱ChrompackCP-SiL8CB可用）柱温：起始柱温125C,保持在125c5分钟，然后开始以5c每分钟的速度线性上升到270C,然后保持270c15分钟,进一步升温至230C。进样口温度：230°C检测温度

6、：300°C载气：N2流速：12mL/min进样量：1卜L3.2 分析过程溶液配制杂质a（2,4-二甲某苯胺）贮备液:精密称取2,4-二甲基苯胺250mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，浓度为0.1%（W/V）。（注意闭光冷藏保存）。杂质b（2,4-二甲基代苯胺）贮备液:精密称取2,4-二甲基代苯胺200mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，浓度为2.0%（W/V）。（注意闭光冷藏保存）。杂质dN,N'-双（2,4-二甲苯基）甲眯贮备液:精密称取N,N'-双（2,4-二甲苯基）甲月米200mgT10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即

7、得，为2.0%（W/V）。（注意闭光冷藏保存）。溶液A的制备:分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容第4页共22页常州华夏农药有限公司双甲月米有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:5/22量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质a为0.010%(W/V)、杂质b为0.20%(W/V)、杂质d为0.20%(W/V)的溶液。(注：如没有配制杂质b、杂质d贮备液，则溶液A的制备方法为：分别精密称取20mg的杂质b和20mg的杂质d于同一10ml容量瓶中，并将精密量取1ml杂质a贮备液加入其中，加乙酸甲酯定容即可)。溶液B的制备:精密称取30

8、mg的杂质cN-甲基-N'-(2,4-二甲苯基)甲月米溶解于5ml的乙酸甲酯中，加入32mg的三乙胺，用超声波混合2分钟，过滤，用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗，最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.1%左右)。对照溶液的制备:等体积的溶液A和溶液B的混合溶液。供试品溶液的制备：精密称取500mg的双甲月米供试样品于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)O进样程序在色谱条件平衡的条件下，分别进1针空白溶液(乙酸甲酯)，6针对照溶液，2针供试品溶液，1针对照溶液记录色谱图。计算公式杂质a=

9、A；标100%=杂质b=A;；标100%=杂质c=A；标100%=杂质d=A样，。标100%=式中：A样：样品溶液中杂质的峰面积；C标：对照溶液中对应杂质的浓度，;A标：对照溶液中对应杂质的峰面积。系统适用性要求连续6针对照各杂质的峰面积的RSD不大于5.0%4 .器材和试剂4.1器材仪器名称型号编号生产厂家校正后效期气相色谱仪分析天平第5页共22页常州华夏农药有限公司双甲月米有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:6/22物理天平移液管容量瓶4.2试剂名称批号级别厂家后效期/复验期乙酸甲酯三乙胺杂质a（2,4-二甲基苯胺）杂质b（2,4-二甲基彳t苯胺）

10、杂质cN-甲基-N'-（2,4-二甲苯基）甲月米杂质dN,N'-双（2,4-二甲苯基）甲月米5.验证内容5.1 系统适用性5.1.1 目的对由分析设备，试验操作，被分析产品组成的系统进行评估，确定该方法在该系统条件下是可适用的。5.1.2 实际操作：杂质a（2,4-二甲基苯胺）贮备液:精密称取2,4-二甲基苯胺mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，浓度为0.1%（W/V）。杂质b（2,4-二甲基代苯胺）贮备液:精密称取2,4-二甲基代苯胺mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，浓度为2.0%（W/V）。杂质dN,N'-双（2,4-二甲苯基）甲月米贮

11、备液:精密称取N,N'-双（2,4-二甲苯基）甲月米200mgT10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为2.0%（W/V）。溶液A的制备:分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质a为0.010%（W/V）、杂质b为0.20%（W/V）、杂质d为0.20%（W/V）的溶液。溶液B的制备:精密称取mg的杂质cN-甲基-N'-（2,4-二甲苯基）甲月米溶解于5ml的乙酸甲酯中，加入mg的三乙胺，用超声波混合2分钟，过滤，用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗，最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗液的混合体积定容到25ml即

12、可得到溶液B（其中杂质c的含量为0.1%左右）。对照溶液的制备:等体积的溶液A和溶液B的混合溶液。第6页共22页常州华夏农药有限公司双甲月米有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:7/22分别移取空白溶液（乙酸甲酯），供试品空白溶液和对照溶液注入色谱仪中，分别进针1次，1次和6次，记录色谱图，计算连续6针对照图谱中双甲月米峰面积的RSD值5.1.3 接受标准：连续6针对照图谱中各杂质峰面积的RSD值不大于5.0%。5.1.4 验证结果：表1:系统适用性验证结果厅P杂质a峰回积杂质b峰回积杂质c峰回积杂质d峰回积123456平均峰面积RSD(%)结论：5.2

13、 专属性5.2.1 目的:对分析方法准确可靠测定被分析物的能力进行测试。5.2.2 实际操作：杂质a（2.4-二甲基苯胺）贮备液:精密称取2,4-二甲基苯胺mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，浓度为0.1%（W/V）0（注意闭光冷藏保存）。杂质b（2,4-二甲基代苯胺）贮备液:精密称取2,4-二甲基代苯胺mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，浓度为2.0%（W/V）0（注意闭光冷藏保存）。杂质dN,N'-双（2,4-二甲苯基）甲月米贮备液:精密称取N,N'-双（2,4-二甲苯基）甲眯mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为2.0%（

14、W/V）。（注意闭光冷藏保存）。溶液A的制备:分别精密量取杂质a、杂质b、杂质d贮备液各ml于同一10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质a为0.010%（W/V）、杂质b为0.20%（W/V）、杂质d为0.20%（W/V）的溶液。溶液B的制备（杂质c溶液）:精密称取_mg的杂质cN-甲基-N'-（2,4-二甲苯基）甲月米溶解于5ml的乙酸甲酯中，加入mg的三乙胺，用超声波混合2分钟，过滤，用少量的乙酸甲酯对滤纸进行冲洗，最后加入乙酸甲酯溶剂使过滤液和冲洗第7页共22页常州华夏农药有限公司双甲月米有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:8/22

15、液的混合体积定容到25ml即可得到溶液B(其中杂质c的含量为0.1%左右)。供试品溶液的制备：精密称取mg的双甲月米供试样品于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即可，溶液浓度为5.0%(W/V)O混合溶液的制备:分别取溶液A和溶液B适量，与同体积的供试品溶液混合。(V:V:V=1:1:1)分别取空白溶液，杂质a溶液，杂质b溶液，杂质c溶液，杂质d溶液和混合溶液注入气相色谱中，记录色谱图。5.2.3 接受标准：溶液乙酸甲酯对双甲月米的检测没有影响；混合溶液中各峰的分离度不小于1.5;样品溶液中可能存在的降解杂质对双甲月米的检测没有影响。5.2.4 验证结果：表2-1:专属性验证结果-

16、单独溶液中各峰的相对保留时间名称相对保温间1杂质a杂质b杂质c杂质d双甲豚RT(min)表2-2:专属性验证结果-混合溶液中各杂质分离度名称项目杂质a杂质b杂质c杂质d双甲豚相对保留时间(min)与相邻峰的分离度结论:5.3 检测限、定量限5.3.1 目的：确定该方法在一定的条件下最小能够检测到的被分析物的浓度为多少，以及最小能够定量的被分析物的浓度为多少。5.3.2 实际操作：杂质a储备液的配制:精密称取杂质a对照品mg于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后，摇匀。杂质a检测限溶夜:精密移取mL杂质a储备液于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲月米图谱

17、中，信噪比S/N在3-5之间。第8页共22页常州华夏农药有限公司双甲月米有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:9/22杂质a定量限溶液:精密移取mL杂质a储备液于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲月米图谱中，信噪比S/N在10-15之问，一般为检测限浓度的3倍。杂质b储备液的配制:精密称取杂质b对照品mg于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后,摇匀。杂质b检测限溶夜:精密移取mL杂质b储备液于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲月米图谱中，信噪比S/N在3-5之间。杂质b定量限溶液

18、:精密移取mL杂质b储备液于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲月米图谱中，信噪比S/N在10-15之问，一般为检测限浓度的3倍。mg于mL的容量瓶中，加杂质c储备液的配制:精密称取杂质c对照品入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后，摇匀。杂质c检测限溶夜:精密移取mL杂质c储备液于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲月米图而一信噪比S/N在3-5之间。杂质c定量限溶液:精密移取mL杂质c储备液于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲月米图谱中，信噪比S/N在10-15之问，一般为检测限浓度的3倍。杂质d储备液的

19、配制:精密称取杂质d对照品mg于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯溶解稀释至刻度后，摇匀。杂质d检测限溶夜:精密移取mL杂质d储备液于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲月米图谱中，信噪比S/N在3-5之间。杂质d定量限溶液:精密移取mL杂质d储备液于mL的容量瓶中，加入乙酸甲酯稀释到刻度摇匀。逐步稀释到溶液进样后双甲月米图谱中，信噪比S/N在10-15之问，一般为检测限浓度的3倍。取空白溶液（甲酸乙酯）注入气相色谱仪连续检测3次，然后分别取检测限溶液和定量限溶液注入色谱仪，检测限溶液连续进样3次，定量限溶液连续进样5次。5.3.3 验证结果：表3-1:基线信噪比J*

20、六丁P123基线噪声表3-2:检测限杂质名称名称浓度（闺/mL）S/NS/N平均浓度(ppm)杂质a检测限1第9页共22页常州华夏农药有限公司双甲月米有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:10/22杂质b检测限1杂质c检测限杂质d检测限表3-3:定量限杂质名称名称浓度（闺/mL）S/NS/N平均RSD,%浓度(ppm)杂质a检测限杂质b检测限杂质c检测限杂质d检测限5.3.4 和范围5.4.1目的：第10页共22页常州华夏农药有限公司双甲月米有关物质气相分析方法验证方案版本号：MV-SJM-RS-14-001Page:11/22确定设计的范围内，测试结果

21、与被测物浓度呈正比关系的程度。5.4.2实际操作:杂质a（2,4-二甲基苯胺）贮备液:精密称取2,4-二甲基苯胺mg于250ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容，浓度为0.2%（W/V）。杂质b（2,4-二甲基代苯胺）贮备液:精密称取2,4-二甲基代苯胺mg于10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，浓度为4.0%（W/V）Oa、杂质b、杂质d贮备液各1ml于同一10ml容a为0.010%（W/V）、杂质b为0.20%（W/V）、杂质杂质dN,N'-双（2,4-二甲苯基）甲月米贮备液:精密称取N,N'-双（2,4-二甲苯基）甲月米200mgT10ml容量瓶中，加乙酸甲酯定容至10ml摇匀即得，为4.0%（W/V）O溶液A的制备:分别精密量取杂质量瓶中，加乙酸甲酯定容，得到含杂质d为0.40%（W/V）的溶液。溶液B的制备:精密称取_mg的杂质CN-甲基-N'