(三)网织红细胞计数ppt课件

1、 实验三网织红细胞计数实验三网织红细胞计数一、实验原理一、实验原理 网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后染色后RNA中负电荷基团与带正电荷的中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合，凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝有色基团结合，凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状构造，可在显黑色的点状、丝状或网状构造，可在显微镜下识别。计数微镜下识别。计数1000个红细胞中一切个红细胞中一切的网织红细胞数直接报告其百分比，或的网织红细胞数直接报告其百分比，或红细胞计数结果报告其绝对值。红细胞计数结果报告其绝对值。 网织红细胞

2、网织红细胞Ret 是晚幼红细胞脱核后到成熟红细是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞，是尚未完全成熟的胞间的过渡细胞，是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内残存有嗜碱性的红细胞，其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱性物质与染料凝聚物质。嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，成蓝色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线衔接成网，故而得名。线衔接成网，故而得名。分型：丝球型、网型、破网型、点分型：丝球型、网型、破网型、点粒型。粒型。、型型网织红细胞计数方法n1、普通光学显微镜法：活体染色后推片镜检n2、网织细胞计数仪法：荧光染色后用流式细胞术计数二、试剂器材1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精水溶

3、液 2、器材 毛细血管采血器具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20 mm较目镜内径稍小的圆形硬纸片正中央开一边长为3mm的菱形或正方形小孔，置目镜光阑处，用于缩视野法计数三、操作步骤1. 染色：于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液染色：于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴，滴，任其自然凉干后备用，取末梢血或抗凝血一滴，于任其自然凉干后备用，取末梢血或抗凝血一滴，于已枯燥的染料上，用推片角混匀后，将两玻片盖合已枯燥的染料上，用推片角混匀后，将两玻片盖合玻片法；试管法取染液玻片法；试管法取染液2滴入试管，加血滴入试管，加血2滴滴混匀，封锁好，待混匀，封锁

4、好，待15分钟以上时间，分钟以上时间，2. 推片：取混合液推片：取混合液1小滴于载玻片的一端，推制成薄小滴于载玻片的一端，推制成薄而均匀的血膜，而均匀的血膜，3. 低倍镜阅读，选取红细胞分布均匀网织红细胞染低倍镜阅读，选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分体尾交界处，滴香柏油转换至油色较好的部分体尾交界处，滴香柏油转换至油镜，在镜，在Miller窥盘下计数小方格中的窥盘下计数小方格中的RBC数和大方数和大方格中的网织红细胞数或数出整个视野中的格中的网织红细胞数或数出整个视野中的RBC总数和其中的网织红细胞数，换一视野同法计数至总数和其中的网织红细胞数，换一视野同法计数至几个视野几个视野RB

5、C总数总数1000为止。为止。Miller窥盘 A31B将将MillerMiller窥盘放在显窥盘放在显微镜目镜中微镜目镜中, ,经过窥盘经过窥盘中大小方格间的中大小方格间的9 9比比1 1比例关系计算比例关系计算RBCRBC数和数和RetRet数。数。四、计算 1.Miller窥盘法：网织红细胞Retic百分率(%)= 大方格内Retic总数/小方格内RBC总数9100% 2.直接计数法：网织红细胞Retic百分率(%)= 多个视野内Retic总数/多个视野内RBC总数100%五、本卷须知1.用酒精染液时，应待玻璃片上的酒精挥发枯燥用酒精染液时，应待玻璃片上的酒精挥发枯燥后，才干加血液，染色

6、时运用推片角不停搅动，后，才干加血液，染色时运用推片角不停搅动，使染料和血液混合，防止凝固。使染料和血液混合，防止凝固。2.染色时间一定要充足，混合后不能立刻推片，染色时间一定要充足，混合后不能立刻推片，室温低时染色时间应适当延伸，应覆以另一玻室温低时染色时间应适当延伸，应覆以另一玻片防止蒸发。片防止蒸发。3.染液与血液比例以染液与血液比例以1：1为宜，贫血适当加血量。为宜，贫血适当加血量。4.涂片厚薄均匀适宜，弓形挪动，多个区域计数涂片厚薄均匀适宜，弓形挪动，多个区域计数5.试剂应定期重配，以免蜕变沉淀。试剂应定期重配，以免蜕变沉淀。6.与变性珠蛋白小体鉴别与变性珠蛋白小体鉴别六、参考值成人

7、：成人：0.005-0.0150.5%-1.5%新生儿：新生儿：0.02-0.062%-6%儿童：儿童：0.005-0.0750.5%-7.5%成人绝对值成人绝对值24-84 109/L 七、临床意义七、临床意义1评价骨髓增生才干，判别贫血类型评价骨髓增生才干，判别贫血类型 再障时，明显降低。绝对值低于再障时，明显降低。绝对值低于5109/L可可做为急性再障的辅助诊断目的。做为急性再障的辅助诊断目的。失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明显高于正常。显高于正常。营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可坚持营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可坚持正常、轻度升高或降低

8、。正常、轻度升高或降低。2评价疗效网织红细胞反响：IDA或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗23d后，网织红细胞计数值开场上升，710d到达最高(10%左右)；两周以后逐渐降至正常程度，红细胞、血红蛋白开场升高。骨髓移植、EPO治疗后：假设骨髓开场恢复造血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。3 3放、化疗监测放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期抑制，早期HFRHFR和和MFRMFR降低，然后才检测到降低，然后才检测到网织红细胞的降低。而停顿放、化疗，骨网织红细胞的降低。而停顿放、化疗，骨髓功能恢复后，又见上述目的依次上升。髓功能

9、恢复后，又见上述目的依次上升。可指点临床医师适时调整治疗方案，防止可指点临床医师适时调整治疗方案，防止呵斥严重的骨髓抑制。呵斥严重的骨髓抑制。 RPI=RPI=病人网织红细胞病人网织红细胞% %/2 /2 * * 病人病人HCT/HCT/正常人正常人HCTHCT男男0.450.45，女，女0.400.40 临床运用：临床运用： 3 3提示溶血性贫血或急性失血性贫血；提示溶血性贫血或急性失血性贫血；网织红生成指数网织红生成指数Reticulocyte Reticulocyte production index,RPIproduction index,RPI八、思索题 一溶血性贫血患者，红细胞计数2.6x1012/L，血细胞比容0.29，网织红细胞计数相对值为35%，如何报告网织红细胞检测结果？n外周血网织红细胞计数百分数和绝对值是一反映骨髓红系增生活性的常用目的。许多学者先后提出运用FCM和不同的RNA特异性荧光染料自动计数网织红细胞的方法，如派假设宁Y、AO、溴化乙啶、thiazole orange等。 目前最普遍运用的是 thiazoieorange 染色法，这种特异性RNA 的激发波488nm丈量的特点，与人工计数法相比，它不但能得到网织红细胞的百