红细胞血型检测ppt课件

1、第二章 红细胞血型检测江中医学高等专科学校江中医学高等专科学校11级检验班级检验班 01 目录第一节第一节 输血前免疫学检查输血前免疫学检查第二节第二节 盐水介质实验技术盐水介质实验技术第三节第三节 酶处置实验技术酶处置实验技术第四节第四节 抗球蛋白实验技术抗球蛋白实验技术第五节第五节 聚凝胺介质实验技术聚凝胺介质实验技术第六节第六节 微柱凝集实验技术微柱凝集实验技术第七节第七节 吸收放散技术吸收放散技术第八节第八节 凝集实验技术凝集实验技术第九节第九节 红细胞血型分子生物学检测技术红细胞血型分子生物学检测技术学习要求：学习要求： 1.输血前主要包括哪些内容？ 2.受血标本接受时的本卷须知有哪

2、些？ 3.ABO血型和RhD血型鉴定时的本卷须知有哪些？ 4.交叉配血实验的影响要素有哪些？ 5.抗球蛋白实验的临床运用有哪些方面？ 6.红细胞血型分子生物学检测技术主要有哪些？第一节第一节 输血前免疫学检查输血前免疫学检查目的：是输入的血液成分在受血者的体内发扬其有效作用. 在正常情况下，输入的红细胞在受血者体内不溶血，输入的的血浆成分不破坏受血者的红细胞。主要程序：患者的病史和标本等的检查、核对及处置;ABO血型和RhD血型定型；红细胞同种抗体筛查和坚决；交叉配血实验；血小板输注前的抗体检查和配合实验；不规那么抗体的挑选和鉴定；交叉配血结果的报告和发血等。一、受血者标本的处置一、受血者标本

3、的处置一 标本的采集 输血除了需求到达预期的治疗效果外，必需确保输血平安。 血样由临床护士完成，因严厉遵守一次只能为一位受血抽取标本，标本不得从输液管或输液侧筋脉中抽取。二标本的接纳 输血科技师接纳血样标本时，应仔细核对受血者的相关信息，尽能够了解受血者有无输血史、药物史、妊娠史等情况。假设有输血史，这有必要进一步了解最后一次输血的日期，假设3个月内输过血，那么供血者的红细胞没有完全代谢消逝，能够依然存在于血液循环中，导致血型定型实验中出现混合凝集的结果。三标本的要求1. 对输血前检查的血液标本应严厉要求能代表受血者当前的免疫学情况，标本还需经鉴定和标志，保证其准确无误地来自受血者和供血者，应

4、和血液恳求单上的内容一致。2. 防止受血者血液标本稀释和或溶血，假设采集过程中发生溶血那么不能运用。3. 受血者配血实验对的血液标本必需是输血前3天采集的。4. 假设受血者运用右旋糖酐、PVP等治疗，应留意洗涤被检红细胞。5. 每次输血后，受血者和供血者的标本必需保管于28至少7天。二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型 一、原理 根据红细胞膜外表上有无A 抗原或B抗原，将血型分为 A型、B型、AB型、O型4种。A型人血清中含有抗-B抗体，B型人血清中含有抗-A抗体，O型人血清中含有抗-A抗体和抗-B抗体，AB型人血清中不含ABO抗体。正定型：用抗-A及抗-B试剂

5、与被检红细胞反响，检测红细胞 外表能否存在A抗原或B抗原。反定型：用规范A细胞及B细胞与被检血清反响，检测血清中能否存在抗体。由于ABO血型系统抗体多数为IgM类，在室温盐水介质中就能出现明显的凝集反响。二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型 1.ABO定型 最适的反响温度为4，但在室温反响良好，所以常规的ABO定型实验仅在室温进展。(1)定型方法：正、反定型的试管离心方法目前仍被以为是最可信任的ABO定型方法。1)定型试剂：有些ABO血型诊断试剂是以人的血清会聚而制成的，但必需具备以下条件： 第

6、一，高效价(1：128)的IgM抗A或抗B。 第二，具较好的亲和性并不含冷凝集素。 第三，必需具有检测A2，A2B血型的才干。 第四，血清必需经过HIV，HCV，HBV等检查或经病毒灭活。另外一些ABO定型试剂是由来自培育细胞株的单克隆抗体所制成。二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型2)ABO亚型的鉴定： ABO亚型的鉴定通常运用以下试剂：抗A、抗B、抗A1、抗H、抗AIA1红细胞、A2红细胞、B型红细胞和O型红细胞。有些任务者在定型实验中，常规地选择运用抗AB抗血清，以防止错误地把弱反响性A或B型红细胞分类为O型。普通抗AB试剂对Ax型红细胞可添加凝集反响的强

7、度。二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型(一)ABO定型实验中的常见问题：呵斥这种正反定型不一致的缘由主要有：1)技术和管理错误：这是ABO定型中产生异常结果的主要缘由，包括：标本或试剂搞错；器材不洁；试剂污染或失效；离心过度或缺乏；阳性反响产生溶血景象未能识别；漏加试剂；结果记录或判别错误；细胞与血清间比例不适当。2)血清异常：血清蛋白引起缗钱状构成，影响反定型结果。3)红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏的红细胞，在含高蛋白介质的试剂中，可发生凝集。4)异常基因型：ABO亚型的检查中，A、B抗原能够为弱抗原，难以检出。二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO

8、和和RhRh定型定型5)近期输血：实验前曾输入过其它ABO血型不一致的血液，使血液标本成为混合血型的红细胞悬液，定型时显示“混合外观凝集景象。6)嵌合体血型：这种血型者体内有两类血型红细胞群体，定型时可以出现“混合外观凝集景象。7)疾病要素导致抗原减弱：某些白血病患者和难治性贫血患者中，ABO血型系统的抗原性可遭到抑制，检出困难。8)红细胞多凝集景象：红细胞因遗传或获得性的外表异常，发生多凝集景象。9)获得性B：由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B的活性。二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型10)血型特异性物质过高：一些卵巢囊肿病例，血型物质的浓度很高，可

9、中和抗A和抗B定型试剂，要得到正确的正定型结果，必需洗涤红细胞多次。11)近期内进展大量的血浆置换治疗：由于运用大量的非同型的血浆作置换治疗，标本血清中含有所输供体提供的抗A或抗B抗体，呵斥反定型错误。12)异常的血浆蛋白：受检者血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例和高浓度的纤维蛋白原等导致缗钱状构成，呵斥假凝集景象。13)不规那么抗体的存在：受检者血浆中，含有ABO血型抗体以外的不规那么抗体，与试剂红细胞上其他血型抗原系统的抗原起反响。二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型 14)低丙种球蛋白血症：低丙种球蛋白血症(丙种球蛋白量减低)病例，能够会因免疫球蛋白程度下降而

10、使血清定型时不凝集或弱凝集反响。 15)药物等要素：药物、右旋糖醉及静脉注射某些造影剂可引起红细胞凝集或类似凝集。 16)年龄要素：免疫系统尚未健全的婴儿、由母亲被动获得抗体的婴儿，或抗体程度下降的老人，实验时可出现异常的结果。 17)防腐剂要素：患者体内能够含有对防腐剂中的成分或对混悬介质的抗体，导致ABO定型过失。二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型二Rh(D)定型和定型实验中应留意的问题：Rh定型主要鉴定D抗原IgG抗D和IgM抗D。 Rh系统是最为复杂得多一个系统，涉及临床的主要有D、C、c、E、e五个抗原，其中D抗原的免疫原性最强，仅次于A或B抗原。

11、Rh血型鉴定方法有：玻片法、试管法、微量板法、微柱凝胶法等，试管法最为经典。目前大部分医院都运用微柱凝胶卡式血型鉴定，方法简便快捷，准确度较高。二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型(1)导致Rh血型鉴定能够出现假阳性的缘由：1)受检细胞已被免疫球蛋白致敏，或标本血清中含有引起红细胞凝集的因子。2)受检细胞与抗血清孵育的时间过长，含高蛋白的定型试剂会引起缗钱状构成。3)标本抗凝不当，受检过程中出现凝血或小的纤维蛋白凝块，误判为阳性。4)定型血清中含有事先未被检测的其它特异性抗体，呵斥假阳性定型结果

12、。5)多凝集细胞呵斥定型的假阳性。6)鉴定用器材或抗血清被污染，呵斥假阳性。二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型 (2)能够出现假阴性的缘由 1)受检细胞悬液浓度太高，与抗血清比例失调。 2)漏加或错加定型血清。 3)定型血清的运用方法错误，没有按阐明书进展。 4)离心后重悬细胞扣时，摇动用力过度，摇散微弱的凝集。 5)抗血清保管不当，导致失效。二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型 (三) 弱D型(Du型)血型及其鉴定： Du型抗原是RhO(D)的弱抗原，这种抗原通常与大部分盐水抗D试剂不产生直接凝集反响，而与部分的IgG抗D血型

13、用间接抗球蛋白实验反响阳性。因此当我们初次得到Rh阴性结果时，必需进展作Rh阴性确认实验，即用三种不同批号的IgG抗D定型，假设全部阴性方可以为该被检者为Rh阴性，否那么，只需有一批为阳性，那么可以为是Du型。 假设D人群作为献血者按照RhD阳性对待，其血液只能给Rh阳性受血者输注；作为受血者按照RhD阴性对待，只能接受RhD阴性血液。三、不规那么抗体挑选和鉴定三、不规那么抗体挑选和鉴定一、 概念：不规那么抗体是指血清中抗-A、抗-B以外的其他血型抗体，也称不测抗体。不规那么抗体包括同种抗体和本身抗体。 本身抗体：受血者体内产生的抗体，针对本人本身的红细 胞抗原。 同种抗体：不只针对本身抗原，

14、也会同种异型抗原发生反 应。 三、不规那么抗体挑选和鉴定三、不规那么抗体挑选和鉴定二、不规那么抗体的筛查方法二、不规那么抗体的筛查方法 抗体挑选实验的原那么是让受检的血清与知血型抗体挑选实验的原那么是让受检的血清与知血型的试剂红的试剂红 细胞即挑选红细胞起反响，以发如今细胞即挑选红细胞起反响，以发如今37中有反响的抗体中有反响的抗体1. 盐水介质法：主要用于盐水介质法：主要用于IgM类抗体的筛查。类抗体的筛查。 优点是：方法简单、操作简单、本钱低廉。优点是：方法简单、操作简单、本钱低廉。 缺陷是：灵敏度低缺陷是：灵敏度低2. 聚凝胺法聚凝胺法 优点：与水盐介质法比灵敏度有所优点：与水盐介质法比

15、灵敏度有所提高。提高。3. 抗球蛋白实验：缺陷：操作繁琐、任务量大、耗抗球蛋白实验：缺陷：操作繁琐、任务量大、耗时等。时等。4. 酶法：能暴露隐蔽抗原，加强一些稀有抗原检测。酶法：能暴露隐蔽抗原，加强一些稀有抗原检测。但能够但能够 会破坏有些抗原，影响检测。目前临床会破坏有些抗原，影响检测。目前临床是已不用。是已不用。三、不规那么抗体挑选和鉴定三、不规那么抗体挑选和鉴定5. 微柱凝胶卡式检测法三、不规那么抗体的鉴定 抗体挑选实验用的试剂挑选红细胞，通常是2或3个人份的O型红细胞成为一套试剂，每套试剂挑选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N，条件缺乏的实验室不一定具备Lua、

16、V、Cw、Kpa、Jsa 类的抗原。一旦抗体被检出，应作抗体鉴定实验，以确定其特异性。抗体鉴定实验包含以下主要内容：(1)本身细胞检查：察看患者(受者)的血清与患者(受者)本身细胞的反响情况，确定血清内能否有本身抗体或本身抗体和同种抗体二者同时存在。(2)普红细胞：运用试剂细胞中的谱细胞，运用各种抗体检查技术，检测患者的血清，确定其抗体的特异性。三、不规那么抗体挑选和鉴定三、不规那么抗体挑选和鉴定抗体鉴定实验结果的解释及处置：1.与谱细胞反响明显，确定为单一抗体或无法确定为单一抗体，应加以鉴别。2.与谱细胞呈弱反响，结果不明确1分析结果： 能否符合剂量效应 谱细胞能否新颖2改动实验方法： 运用

17、高灵敏度的方法反复实验 添加试剂后反复实验 带抗体加强后反复实验 三、不规那么抗体挑选和鉴定三、不规那么抗体挑选和鉴定3.与一切谱细胞反响，本身细胞阴性1强度不一致：能够存在混合抗体2强度一致：抗体能够为专于O细胞反响的抗体 如： 抗-I、抗-H、抗-HI 能够针对高频抗原的抗体 能够针对谱细胞的抗体4.与一切谱细胞反响，本身细胞阳性1存在本身抗体2同种和本身抗体同时存在3冷凝集：在冷凝集素的作用下存在凝集红细胞三、不规那么抗体挑选和鉴定三、不规那么抗体挑选和鉴定4假凝剂：在干扰因子的作用下一可呵斥红细胞假凝集5酶引起的多凝集6补体的影响6.与谱细胞不反响，本身细胞阳性 能够是本身抗体或C 阳

18、性三、不规那么抗体挑选和鉴定三、不规那么抗体挑选和鉴定四、抗体筛查和鉴定的影响要素四、抗体筛查和鉴定的影响要素1.抗体筛查和鉴定细胞的质量抗体筛查和鉴定细胞的质量 筛查细胞不包括低频率抗原，不能检出低筛查细胞不包括低频率抗原，不能检出低频率抗原。频率抗原。 谱细胞：用于抗体鉴定的试剂红细胞。谱细胞：用于抗体鉴定的试剂红细胞。 在选择不规那么抗体筛查或鉴定细胞时，在选择不规那么抗体筛查或鉴定细胞时，应符合本地应符合本地 区不规那么抗体分布的特点。区不规那么抗体分布的特点。2.实验方法法实验方法法 IgM抗体在抗体在4，凝集强度明显大于室温，凝集强度明显大于室温，37会有减弱会有减弱3.抗体的特异

19、性抗体的特异性 抗体筛查实验为阴性，并不意味着被检血清中一抗体筛查实验为阴性，并不意味着被检血清中一定没有抗体定没有抗体筛查细胞漏检筛查细胞漏检ABO亚型抗体如抗亚型抗体如抗-A 三、不规那么抗体挑选和鉴定三、不规那么抗体挑选和鉴定五五 不规那么抗体鉴定时遇见的的问题不规那么抗体鉴定时遇见的的问题1.1.不规那么抗体筛查阴性，输血后发现溶血不规那么抗体筛查阴性，输血后发现溶血1 1交叉配血假阴性交叉配血假阴性2 2抗球蛋白实验不规那么抗体筛查假阴性抗球蛋白实验不规那么抗体筛查假阴性 试剂保管不当试剂保管不当 洗涤不充分洗涤不充分 实验操作实验操作 红细胞浓度过高红细胞浓度过高呵斥凝集减弱或红呵

20、斥凝集减弱或红 细胞浓细胞浓度过低呵斥凝集不易被察看到度过低呵斥凝集不易被察看到2.2.不规那么抗体筛查阳性，抗体特异性难以鉴定不规那么抗体筛查阳性，抗体特异性难以鉴定1 1抗体筛查假阳性：离心不当试管污染抗体筛查假阳性：离心不当试管污染 硅硅胶管引起的凝集胶管引起的凝集2 2谱细胞单一：应采用谱细胞单一：应采用3 3个以上不同供应商的谱个以上不同供应商的谱细胞系，排查抗体的特异性。细胞系，排查抗体的特异性。 四、交叉配血实验四、交叉配血实验 一要求和内容一要求和内容 交叉配血的要求：交叉配血的要求：四、交叉配血实验四、交叉配血实验 交叉配血实验的内容交叉配血实验的内容四、交叉配血实验四、交叉

21、配血实验 交叉配血的目的交叉配血的目的四、交叉配血实验四、交叉配血实验二结果的解释及处置1.抗体筛查阴性，交叉配血相容：绝大部分标本抗体筛查阴性，交叉配血也是相容的。2.抗体筛查阴性，主侧交叉配合实验阳性1复查血型2主侧凝集类B抗原3血清中能够含有一种ABO抗体，必要时可以做ABO亚型鉴定四、交叉配血实验四、交叉配血实验3.抗体筛查实验阳性，主侧交叉配合实验阳性1本身对照实验阴性：受血者体内有同种不规那么抗体。2本身对照实验阳性：受血者血清内能够有本身抗体或 同时存在不规那么抗体。三影响要素 离子干扰 温度 操作不规范 离心不当 第二节第二节 盐水介质实验技术盐水介质实验技术 盐水介质实验技术

22、常用于血型鉴定、血清中IgM类抗体的筛查和鉴定、盐水介质的交叉配血等。 根本方法 1.平板法 用于ABO血型和RhD抗原的定型 特点：简单、快速，但易污染环境。 2.试管法 为定型实验方法，也可于半定量实验。是输血 前检验最常用的实验方法。 特点：简单、快速、易学，结果准确、可靠。 3.微孔板法 为定性实验方法。第二节第二节 盐水介质实验技术盐水介质实验技术 盐水介质配血方法盐水介质配血方法患患者者献献血血者者主主侧侧次次侧侧第二节第二节 盐水介质实验技术盐水介质实验技术第三节第三节 酶处置实验技术酶处置实验技术原理：在酶的作用下切断带有负电荷的羧基基团的唾液酸，降低Zeta电位，缩短红细胞之

23、间的间隔。加强IgG抗体对红细胞的凝集。常用对的酶：菠萝酶，无花果酶，木瓜酶第三节第三节 酶处置实验技术酶处置实验技术 酶介质配血方法酶介质配血方法第三节第三节 酶处置实验技术酶处置实验技术第三节第三节 酶处置实验技术酶处置实验技术结果的判别结果的判别1阳性对看管凝集，阴性对阳性对看管凝集，阴性对看管凝集，被检管凝集为阳看管凝集，被检管凝集为阳 性，不出现凝集断定为阴性，不出现凝集断定为阴性。性。2阳性对看管不凝集和或阳性对看管不凝集和或阴性对看管凝集，实验失阴性对看管凝集，实验失 败分析缘由，重新实验。败分析缘由，重新实验。第四节抗球蛋白实验技术第四节抗球蛋白实验技术一、根本原理一、根本原理

24、抗球蛋白实验抗球蛋白实验Coombs实验主要实验主要用于检测血清中的不完全抗体如：用于检测血清中的不完全抗体如：IgG、IgA和或补体如：和或补体如：C3、C4。在盐水介质中，不完全抗体只能致敏在盐水介质中，不完全抗体只能致敏红细胞，而不能使红细胞出现可见红细胞，而不能使红细胞出现可见的凝集反响，参与抗球蛋白试剂后，的凝集反响，参与抗球蛋白试剂后，抗球蛋白分子的抗球蛋白分子的Fab片段与红细胞外片段与红细胞外表的受体结合，而产生红细胞凝集，表的受体结合，而产生红细胞凝集，因此采用此方法可以检测出血清中因此采用此方法可以检测出血清中能否存在不完全抗体。能否存在不完全抗体。第四节抗球蛋白实验技术第

25、四节抗球蛋白实验技术抗球蛋白实验原理图抗球蛋白实验原理图第四节抗球蛋白实验技术第四节抗球蛋白实验技术 二、分类及运用二、分类及运用 抗球蛋白实验抗球蛋白实验直接直接间接间接致敏红细胞的不完全抗体、补体致敏红细胞的不完全抗体、补体血清中的不完全抗体血清中的不完全抗体运用运用HDN的诊断、的诊断、AIHADE的诊断、药物诱发型溶血病的诊断的诊断、药物诱发型溶血病的诊断交叉配血及血型鉴定、器官移植、等交叉配血及血型鉴定、器官移植、等第四节抗球蛋白实验技术第四节抗球蛋白实验技术 抗球蛋白配血方法抗球蛋白配血方法第四节抗球蛋白实验技术第四节抗球蛋白实验技术 抗球蛋白方法配血方法抗球蛋白方法配血方法第四节

26、抗球蛋白实验技术第四节抗球蛋白实验技术 三、结果的判别直接抗球蛋白实验：1阳性对看管凝集，阴性对看管不凝集，被检管凝集， 断定为阳性。2阳性对看管凝集，阴性对看管不凝集，被检管不凝 集，须做阴性确认后断定结果。3阳性对看管不凝集和或阴性对看管凝集，结果不 可信不能发出报告，分析缘由后重做实验。第四节抗球蛋白实验技术第四节抗球蛋白实验技术间接抗球蛋白实验：间接抗球蛋白实验：1阳性对看管呈现凝集反响，阴性对阳性对看管呈现凝集反响，阴性对看管不呈现凝集反响，被检管呈现凝集看管不呈现凝集反响，被检管呈现凝集反响为阳性结果，表示被检者血反响为阳性结果，表示被检者血 清中含有抗体。清中含有抗体。2阳性对看

27、管不凝集和或阴性对阳性对看管不凝集和或阴性对看管出现凝集，实验失败，分析缘由重看管出现凝集，实验失败，分析缘由重做实验。做实验。第四节抗球蛋白实验技术第四节抗球蛋白实验技术 四、本卷须知一直接抗球蛋白实验1. 抗球蛋白血清应按阐明书运用最适稀释度，防止出现前带景象而误判为阴性。2. 结果判读时应转动迁延，细胞扣摇散后，如肉眼未见凝集，应将反响物涂于玻片上，在在显微镜下察看确认阴性。3. 被检标本需用EDTA抗凝，防止出现假阳性；标本不宜久置，防止红细胞上已致敏的抗体游离到血浆中，呵斥假阴性或阳性程度降低。4. 红细胞外表存在蛋白质就会与抗球蛋白结合。因此受检红细胞一定要充分洗涤，除去血清蛋白，

28、防止假阴性的产生。5. 如需进一步分析体内致敏红细胞的免疫球蛋白的类型，可以分别以抗IgG、抗C3单价抗球蛋白血清进展实验。第四节抗球蛋白实验技术第四节抗球蛋白实验技术二间接抗球蛋白实验1. 红细胞洗涤过程中不宜中途停顿，每次加生理盐水前要是红细胞完全悬浮；洗涤过程中防止交叉污染；应充分洗涤，防止残留抗体部分中和抗球蛋白试剂而产生假阴性。2. 振摇试管不宜用力过大，防止将松散红细胞凝块摇散，使强阳性结果误判为弱阳性结果，弱阳性结果误判为阴性，对于弱阳性结果察看细胞扣能否出现缺口来判读。3. 离心后应立刻看结果，不宜久置。4. 致敏时间：30-60分钟，不超越90分钟 第四节抗球蛋白实验技术第四

29、节抗球蛋白实验技术 三、抗球蛋白实验的影响要素三、抗球蛋白实验的影响要素一、亲和力一、亲和力 亲和力常数越高，抗原抗体反响致敏阶段的抗体程度越高亲和力常数越高，抗原抗体反响致敏阶段的抗体程度越高二、孵育时间和温度二、孵育时间和温度 37孵育孵育30-60分钟分钟三、离子强度三、离子强度 在单纯的离子强度溶液中，可加强抗体的结协作用，孵育在单纯的离子强度溶液中，可加强抗体的结协作用，孵育 时间将缩短到时间将缩短到1530分钟分钟四、抗原、抗体的比例四、抗原、抗体的比例 2滴血清对滴血清对1滴滴25的红细胞悬液的红细胞悬液五、洗涤五、洗涤 应尽量去除上清液，降低未结合的免球蛋白。应尽量去除上清液，

30、降低未结合的免球蛋白。六、体外补体致敏六、体外补体致敏七、红细胞本身凝集七、红细胞本身凝集第五节第五节 聚凝胺介质实验技术聚凝胺介质实验技术 聚凝胺实验技术是一种快速、简便检测红细胞不完全抗体的方法，可用来检测IgG抗体，但IgG抗体的抗-K抗体除外。一、实验原理 凝聚胺polymatching法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清浆中的抗体与红细胞相应抗原结合，再参与带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞外表的负电荷，缩短细胞间距，构成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。参与中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而

31、分散，而由抗体介导的特异性凝集那么不会分散第五节第五节 聚凝胺介质实验技术聚凝胺介质实验技术 聚凝胺聚凝胺(Polybrene)(Polybrene)配血方法配血方法第五节第五节 聚凝胺介质实验技术聚凝胺介质实验技术 聚凝胺聚凝胺(Polybrene)(Polybrene)配血方法配血方法第五节第五节 聚凝胺介质实验技术聚凝胺介质实验技术二、 运用范围 血型鉴定、抗体筛查及交叉配血实验三、特点 灵敏、速度快、准确、操作要求高。四、本卷须知1. 不能用含有枸橼酸钠和肝素抗凝标本2. 用聚凝胺实验技术交叉配血，出现不配合时，要用抗球蛋白实验重做，结果不一致时，以抗球蛋白实验为主。3.聚凝胺只能是正

32、常红细胞发生凝集，对缺乏唾液酸的细胞 如：T细胞及B细胞无作用。第六节第六节 微柱凝集实验技术微柱凝集实验技术一、实验原理 凝胶具有分子筛效应和亲和效应，在微柱凝胶介质中红细胞抗原与相应的抗体结合，利用凝胶的空间位阻经低速离心，凝集的红细胞悬浮在凝胶的上层，而未和抗体结合的红细胞那么沉于凝胶的底部管底尖部。第六节第六节 微柱凝集实验技术微柱凝集实验技术一、微柱凝胶实验原理一、微柱凝胶实验原理操作及结果的断定操作及结果的断定第六节第六节 微柱凝集实验技术微柱凝集实验技术二、运用1.抗球蛋白实验 直接抗球蛋白实验和 间接抗球蛋白实验。2.ABO血型鉴定 可做单纯粹定型，也可同时做正反定型。3.其他

33、血型系统检测 如Rh其他抗原CcEe定型三、特征及优点 1.简便 2.准确 结果明晰明确 ，可反复性强。 3.敏感 4.结果保管时间长 5.标本用量少 6.规范化 7.平安第六节第六节 微柱凝集实验技术微柱凝集实验技术四、微柱凝集实验中能够存在的问题四、微柱凝集实验中能够存在的问题1. 抗凝剂缺乏或不含抗凝剂的血浆标本常出现假阳抗凝剂缺乏或不含抗凝剂的血浆标本常出现假阳性。性。2. 实验室温度较低时，易出现假阳性结果。实验室温度较低时，易出现假阳性结果。3. 抗原、抗体过少、过弱；抗原、抗体比例不当时抗原、抗体过少、过弱；抗原、抗体比例不当时易出现假阴性。易出现假阴性。4. 离心力过大时，容易

34、使弱阳性成为阴性格局。离心力过大时，容易使弱阳性成为阴性格局。5.溶血反响：反响液是低渗溶液溶血反响：反响液是低渗溶液 温度过冷或过热温度过冷或过热 红细胞或抗体被污染红细胞或抗体被污染 其他可使红细胞破坏的理化要素其他可使红细胞破坏的理化要素第六节第六节 微柱凝集实验技术微柱凝集实验技术五、局限性与开展前景 微柱凝集抗人球蛋白实验及微柱胶免疫检测技术的本质是血凝实验，这实际上位制备抗原抗体包被的红细胞为指示红细胞，以间接血凝实验来检测红细胞抗原抗体以外的其他血液红细胞、中路标志、病原微生物，以及人体中其他可溶性抗体，如对药物抗体、本身抗体的检测等提供了比传统血凝检验更为敏感、准确、简单易行的

35、方法。 微柱凝集实验技术奖在临床各个领域有更为宽广的开展。第七节第七节 吸收放射实验吸收放射实验一、概念1.吸收实验:抗原与抗体的结合是特异性的，因此具有抗体活性的血清参与相应抗原后，抗体的活性下降或消逝，这种作用称为吸收实验。2.放散实验是抗原与抗体的结合是可逆的，在物理条件改动时，抗体又会从抗原抗体复合物上分别下来，将抗体由抗原抗体复合物上分别下来的实验称为放散实验第七节第七节 吸收放射实验吸收放射实验一相关的概念一相关的概念 抗体可与相应的抗原在适当条件下可发生凝集或致敏，这种结合抗体可与相应的抗原在适当条件下可发生凝集或致敏，这种结合是可逆的，如改动某些实验条件，抗体可从红细胞解离下来

36、，然后检是可逆的，如改动某些实验条件，抗体可从红细胞解离下来，然后检测解离下来的抗体。这种实验称为吸收放散实验。测解离下来的抗体。这种实验称为吸收放散实验。冷本身抗体冷本身抗体 ：实际上讲凡是：实际上讲凡是37与本身红细胞不反响，而只需在低于与本身红细胞不反响，而只需在低于37环境下才干和本身红细胞反响的抗体均可称为冷本身抗体。实践环境下才干和本身红细胞反响的抗体均可称为冷本身抗体。实践上，冷本身抗体大多数只能在很低的温度下上，冷本身抗体大多数只能在很低的温度下(例如例如4)与本身细胞反与本身细胞反响。响。温本身抗体：温本身抗体是指在温本身抗体：温本身抗体是指在37条件下能和本身红细胞反响的抗

37、条件下能和本身红细胞反响的抗体。当患者血清中含有温本身抗体时，患者普通均有些贫血或溶血病体。当患者血清中含有温本身抗体时，患者普通均有些贫血或溶血病症。温本身抗体可分为两类症。温本身抗体可分为两类:大多数情况下为大多数情况下为lgG类温本身抗体，极少类温本身抗体，极少数情况下也会存在数情况下也会存在IgM性质的温本身抗体。性质的温本身抗体。第七节第七节 吸收放射实验吸收放射实验二吸收实验 冷抗体在4反响最强，通常用冷吸收技术本身抗体用本身红细胞吸收；同种抗体用对应红细胞吸收。 IgM抗体通常在4条件下比22或37更容易吸收，且容易完全吸收。 IgG抗体通常在37 的吸收效果最好，但难以完全吸收

38、。1.冷抗体吸收实验 运用范围：本身冷抗体的吸收其他冷抗体的吸收2.温抗体吸收实验 运用范围：本身冷抗体的吸收其他冷抗体的吸收第七节第七节 吸收放射实验吸收放射实验三放散实验 放散实验是把结合到红细胞膜上的抗体解离下来，用于其他目的。经过放散实验得到的含有或不含有抗体的溶液称为放散液。放散的目的：得到红细胞上致敏的抗体或没有抗体吸附的红细胞，前者得到的是本身抗体，用于本身吸收；后者得到的是红细胞，用于血型鉴定和交叉配血。放散的方法：热放散技术、乙醚放散技术、磷酸氯喹放散技术、冻融放散技术、柠檬酸放散技术、二甲苯放散技术等。第七节第七节 吸收放射实验吸收放射实验1.热放散技术运用范围 ABO抗体

39、的放散新生儿溶血病实验本卷须知 温度过高，抗体能够变性；温度过低，容易使 抗体从红细胞上解离不完全2.乙醚放散技术乙醚为有机溶剂，可以破坏红细胞膜，解离IgG抗体，该方法制备的放散液，抗体回收率高。适用范围 主要用于红细胞上的各种IgG抗体的分散。3.磷酸氯喹放散技术主要用于得到没有任何抗体附着的红细胞。此方法不能将补体从红细 胞膜上解离下来。第七节第七节 吸收放射实验吸收放射实验4.冻融放散技术适用范围 ABO抗体的放散，如新生儿溶血病的相关检测实验。5.柠檬酸放散技术适用范围 用于解离红细胞膜上致敏的IgG抗体对红细胞进展抗原 的鉴定，但Kell系统的鉴定除外。本卷须知 该方法可破坏Kell系统抗原，特别是K抗原，因此本方法 放散后的细胞不能进展Kll系统定型实验。第七节第七节 吸收放射实验吸收放射实验四吸收放散实验的运用 证明存在于红细胞上的假设抗原分别、鉴定混合液体除去血清中不需求的抗体浓缩低效价抗体核实抗体特异性利用吸收放散技术鉴定引起新生溶血病和免疫性输血反响的抗体研讨鉴别免疫性溶血性贫血的抗体第八节第八节 凝集抑制实验凝集抑制实验 一、概述： 抗体能与有相应抗原的红细胞发生特异性凝集，体液中的可溶性抗原物质能与该抗