细胞生物学72718

1、绪论1生物工程:.以生命科学为基础，利用生物体系和工程学原理，生产生物制品和创造新物种的一种综合技术。2.细胞工程：细胞工程是指按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。3.细胞（组织）培养：是指生物细胞和组织在离体条件下的生长和增殖。是细胞工程的最基本技术。4.细胞融合：又称细胞杂交，是指两个或两个以上的细胞融合形成一个细胞的过程。5.胚胎工程：以生殖细胞和胚胎细胞为对象进行的操作，主要技术包括体外受精、胚胎切割、6.干细胞：干细胞（stem cell）是动物体内具有分化潜能，并能自我更新的细胞，分

2、为胚胎干细胞和组织干细胞。7.植物细胞工程的应用快速繁殖、细胞工程育种、离体种质保存、细胞培养生产有用物质8. 细胞核移植利用显微操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂种细胞。第一章1动物细胞培养为什么要用二氧化碳培养箱？调节培养基Ph；维持细胞生长所需渗透压第二，三章1 细胞生长曲线：以培养时间（d）为横坐标、细胞密度为纵坐标所做出的曲线。2生长指数：3贴壁率：已贴壁细胞占接种细胞总数的百分率。4细胞周期：指一个母细胞分裂结束后形成的细胞至下一次再分裂结束形成两个子细胞的时间。5细胞活力测定方法：MTT比色法 CCK-8 法 6细胞常用的染色方法：活体染色台盼蓝染

3、色 1）用Hanks液配制0.1台盼蓝溶液；2）用0.5胰蛋白酶：0.2EDTA1：1混合液消化培养的贴壁细胞；3）加入适量的Hanks液制成细胞悬液；4）每毫升细胞悬液加入10l 0.1台盼蓝溶液，混匀；5）用毛细吸管吸少许混合液置细胞计数板，并在显微镜下计数；6）计数1000个细胞中的活细胞（不着色）和死细胞（染上蓝色）数目。计算活细胞百分比。吖啶橙荧光染色 它可与细胞内的DNA、RNA结合，但发出的荧光颜色也不一样，DNA呈亮绿色，RNA呈橘红色至火红色。7培养细胞常见的污染有那些？简单说明检测方法。细菌污染 肉眼直接观察法，显微镜观察法，培养检查法真菌污染 肉眼直接观察法，显微镜观察法

4、支原体污染 相差显微镜观察，荧光染色法观察，电镜检测，培养检测病毒的污染 细胞的直接观察，动物接种检查，电子显微镜观察，免疫学检查，PCR技术细胞交叉污染 观察细胞的形态，检查细胞的标记第四章1原代培养：将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 2传代培养：3细胞系：是指由原代培养经初步纯化，获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。4细胞株：是指细胞系经进一步的克隆化，得到的由单一细胞组成的群体。5体外培养细胞分那几类？贴壁型 上皮细胞型，成纤维细胞型，

5、游走细胞型，多形型细胞悬浮型6细胞系的生长过程包括那三个阶段 ？各阶段细胞有何特点？原代培养期 为新鲜组织自体内取出并在体外培养生长至第一次传代的时期传代期 成细胞系。衰退期 增殖已很缓慢并逐渐完全停止7影响细胞生长的因素有那些？为什么？8细胞同步化培养主要有那些方法？依据的原理是什么？选择细胞同步化 M期细胞震摇脱落法，离心洗脱法，梯度沉降法诱导细胞同步化法 血清饥饿法（G1），异亮氨酸营养缺乏法（G1），DNA合成抑制剂阻断法（S），秋水仙素阻断法（M）原理：处于细胞周期不同阶段的细胞在形态和生理上都有很大差别，获得同一时期的同步生长的细胞群体可以为研究带来便利。9细胞培养的常用液体水，平

6、衡盐溶液，消化液，消化酶抑制液，pH调整液，抗生素液，谷氨酰胺补充液10取材的分离方法机械分散法，消化分离法11消化培养法第五章1细胞融合：用自然或人工方法、使两个或更多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。2三种融合的优缺点聚乙二醇（PEG）介导的细胞融合优点：融合成本低，勿需特殊设备；融合子产生的异核率较高；融合过程不受物种限制 。缺点：融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒害 。细胞电融合优点：融合率高，可在显微镜下定向诱导细胞融合，可直接挑选杂种细胞缺点：可能会造成不可恢复的细胞损伤病毒诱导融合优点：细胞融合率较高，对各种动物细胞均适宜，容易培养缺点：不稳定，在保存过程中融合活性降低；制备过程

7、比较烦琐；灭活不充分的话，可能感染操作者与亲本细胞3HAT培养基筛选杂交瘤细胞原理ppt上有图，自己看第六章1胚胎工程：以生殖细胞和胚胎细胞为对象进行的操作，利用人工方法影响、改变动物胚胎品质发育和进程的一种生物技术。2体外移植：3体外受精：将哺乳动物卵母细胞从母体取出，在体外进行精卵结合的过程。4精子获能：精子离开精巢后，无使卵受精的能力，它必须经过在附睾中成熟及在雌性生殖道内停留一段时间，才具有使卵受精的能力，这种现象称精子获能。 5顶体反应：精子在同卵子表面接触或与卵膜分泌的物质相遇后，精子的顶体就会发生一系列的变化。6中间体培养法7同期发情： 胚胎移植时，供体胚胎必须与受体子宫内膜发育

8、状态高度同步化，才能获得好效果，这个过程称为同期发情。8胚胎移植：指附植前的早期胚胎很容易由子宫中取出，经过人为处理，可以再送入子宫的过程。9胚胎分割：将一枚胚胎用显微手术的方法分割成二分,四分甚至八分胚，经体内或体外培养，然后移植入受体中，以得到同卵双生或同卵多生后代的技术。10胚胎移植的主要操作过程供体和受体选择 ，超数排卵，同期发情，人工受精，胚胎采集 ，胚胎活力的检测，胚胎移植第七章1干细胞： 干细胞是一种具有自我更新和分化能力的细胞。2胚胎干细胞：指从着床前的内细胞团或原始生殖细胞获得的一种具有多潜能性、可发育成为各种细胞、同时可保持不分化状态而持续生长的克隆细胞系。3胚胎干细胞分类

9、全能性干细胞 多能性干细胞 专能干细胞4干细胞增殖特性干细胞增殖的缓慢性 干细胞增殖系统的自稳定性5干细胞可塑性：一种组织类型的干细胞在适当条件下可以分化为另一种组织类型的细胞，称为干细胞的转分化， 一种干细胞向其前体细胞的逆向转化被称为干细胞的去分化。6胚胎干细胞的鉴定形态学检测；核型分析；碱性磷酸酶（AKP）活性的检测；SSEA-1免疫荧光标记（间接免疫荧光法）；OCT-4转录子表达产物的检测；分化能力的检测7组织工程：指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理状况下哺乳动物组织的结构、功能和生长的机理，研究开发能够修复、维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。 8组织工程的

10、基本方法分离干细胞，体外扩增到一定数量，作为种子细胞，并种植在预先构建好的聚合物上（三维支架 ），在适宜条件下（通过培养系统技术对培养条件进行控制）细胞沿着聚合物骨架迁移、铺展、生长和分化，最终发育形成具有特定形态和功能的工程组织。第八章1核移植概念及类型概念：将供体细胞核移入去核的卵母细胞中,使后者不经精子穿透等有性过程即可被激活、分裂并发育,使得核供体的基因得到完全复制。供体细胞核的来源：胚胎干细胞核移植 胚胎细胞核移植 体细胞核移植核移植目的：生殖性克隆 治疗性克隆供受体种间关系：同种核移植 异种核移植2核移植技术及优缺点将供体细胞核移入去核的卵母细胞中,使后者不经精子穿透等有性过程即可

11、被激活、分裂并发育,使得核供体的基因得到完全复制。优点：同一遗传性状供体核的数量可无限获得；可通过对供体细胞的遗传改造加速家畜品种改良或生产转基因动物。缺点：成功率低 理论研究滞后技术研究 体细胞克隆后代可能出现老化现象 核移植技术环节尚需要不断完善第十一章1植物细胞工程：是一种利用离体培养细胞进行遗传操作，实现植物品种改良的生物技术。2植物细胞工程应用：植物育种 植物快速无性繁殖和脱毒 种质保存 医药和食品工业化生产3植物组织培养：在含有营养物质及植物生长物质的培养基中，培养离体植物组织（器官或细胞）并诱导使其长成完整植株的技术。4植物组织培养类型：愈伤组织培养 器官培养 细胞培养 原生质体

12、培养 5细胞全能性：植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性，在一定条件下如同受精卵一样，具有发育成完整植物体的潜在能力。6细胞分化：细胞后代在形态结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。7细胞脱分化：细胞分化是可逆的，分化的细胞在一定条件下，可以转变为胚性状态，重新获得分裂能力，称为脱分化。8愈伤组织：脱分化的细胞经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性、松散的细胞团，成为愈伤组织。9细胞再分化：即脱分化后的分生细胞在特定的条件下，重新分化为各种类型的细胞，并进一步发育成完整植株。10外植体：由活体植物体上切取下来的，用于组织培养的各种接种材料。包括各种器官、组织、细胞或原生质体等。11再生植株

13、两种途径器官发生方式：外植体（脱分化）愈伤组织（再分化）不定芽（转管）不定根再生植株胚状体(无性胚胎)方式：外植体（脱分化）愈伤组织（再分化）胚状体再生植株12组织培养过程外植体（脱分化）愈伤组织（再分化）组织（形成）器官（构成）植物体第十二章1快速繁殖： 利用离体培养技术，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行离体培养，在短期内获得大量遗传性状一致的个体的方法。2快繁的特点和过程特点：繁殖周期短 繁殖数量大 可以通过消毒，在无菌条件下进行，特别适合一些易感染病毒的植物 不受季节和环境条件的限制过程：无菌母株制备 不定芽的增殖 完整小植株的形成 小植株的驯化和移栽 再生植

14、株的鉴定3继代培养：更换新鲜培养基来繁殖同种类型的材料（愈伤组织、芽）。4脱毒的意义：减少污染，防止公害，保护环境，提高产量和促进活体植物材料的国际交换5脱毒的方法：微茎尖培养法 珠心组织培养法 热处理法 6脱毒的原理：能量竞争 传导抑制 激素抑制 酶缺乏 抑制因子第十三章1单倍体育种：将具有单套染色体的单倍体植物，经人工染色体加倍，使其成为纯和二倍体，从中筛选优良个体，直接繁育成新品种，或具有单一优良性状的个体，作为杂交育种的原始材料。2单倍体育种的几个时期3单倍体在植物育种中的应用：将具有单套染色体的单倍体植物，经人工染色体加倍，使其成为纯合二倍体。从中选出具有优良性状的个体，直接繁育成新

15、品种；或选出具有单一优良性状的个体，作为杂交育种的原始材料。第十四章1胚胎培养： 采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。2胚胎培养的四个部分：成熟胚、幼胚、胚珠培养、子房培养3离体胚发育成植株的三个途径：正常胚胎发育途径 脱分化形成愈伤组织 早熟萌发产生畸形苗 4植物胚胎培养包括哪四种类型？胚培养、胚乳培养、胚珠培养、子房培养5. 胚培养的类型：成熟胚培养 幼胚培养第十五章1体细胞胚：离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物，统称为体细胞胚。2体细胞胚的三种方式：体细胞胚从外植体上直接形成 经过愈伤组织的体细胞胚发生 细胞悬浮培养的体细胞胚胎发生3人工种子：是