第26章酶促反应法测定生物化学物质

1、温州医科大学检验学院温州医科大学检验学院 沈财成沈财成第二十六章第二十六章酶促反应法测定生物化学物质酶促反应法测定生物化学物质第2页教学目标与要求教学目标与要求 掌握掌握酶促反应法测定生物化学物质定义、分类及其应酶促反应法测定生物化学物质定义、分类及其应用原理；用原理；UAUA、BILBIL、尿素、肌酐、葡萄糖、糖化、尿素、肌酐、葡萄糖、糖化血清蛋白、血清蛋白、TGTG、TCHTCH、HDL-CHDL-C、LDL-CLDL-C、TBATBA酶促反应法测定的原理及其优缺点与注意事项。酶促反应法测定的原理及其优缺点与注意事项。 熟悉熟悉酶促反应法测定其它生物化学物质的原理及其优酶促反应法测定其它生

2、物化学物质的原理及其优缺点与注意事项。缺点与注意事项。 了解了解上述酶促反应法测定生物化学物质的方法学评价，上述酶促反应法测定生物化学物质的方法学评价，以及其方法的历史演变。以及其方法的历史演变。第3页 主要内容主要内容 酶反应前后光吸收变化测定法酶反应前后光吸收变化测定法脱氢酶指示系统测定法脱氢酶指示系统测定法过氧化物酶指示系统测定法过氧化物酶指示系统测定法酶循环测定法酶循环测定法 酶激活和酶抑制测定法酶激活和酶抑制测定法第3页第一节第一节 酶反应前后光吸收变化测定法酶反应前后光吸收变化测定法一、血清尿酸测定一、血清尿酸测定1利用吸光度的利用吸光度的差值计算差值计算物质的物质的含量含量二、血

3、清胆红素测定二、血清胆红素测定第4页第5页第5页尿酸（尿酸（UAUA）的酶法测定的酶法测定包括包括尿酸氧化酶法尿酸氧化酶法、尿酸酶紫外法尿酸酶紫外法、尿酸氧化尿酸氧化酶传感器检测法酶传感器检测法等。由于各种方法受试剂、仪等。由于各种方法受试剂、仪器等不同的影响，各方法之间的检测结果偏差器等不同的影响，各方法之间的检测结果偏差较大，结果之间缺乏可比性。目前，临床上主较大，结果之间缺乏可比性。目前，临床上主要采用要采用尿酸氧化酶法尿酸氧化酶法和和酶紫外法酶紫外法测定。测定。一、一、血清尿酸血清尿酸（UAUA）测定）测定尿酸氧化酶法尿酸氧化酶法根据血清尿酸在尿酸酶的作用下生成尿囊素及根据血清尿酸在尿

4、酸酶的作用下生成尿囊素及H H2 2O O2 2，生成的生成的H H2 2O O2 2与与4 4AAAA和和TOOSTOOS在在PODPOD的作用下最终生成紫的作用下最终生成紫红色的醌亚胺，其颜色深浅与尿酸含量成正比。红色的醌亚胺，其颜色深浅与尿酸含量成正比。OHTOOSAAOHOHCOOOHPOD222222224 紫红色醌亚胺尿囊素尿酸尿酸酶第6页第7页第7页尿酸紫外法尿酸紫外法利用尿酸在利用尿酸在282-292nm282-292nm处有特异吸收峰，在尿酸酶作用处有特异吸收峰，在尿酸酶作用下，生成产物在此波长范围无吸收峰，因此，在此波下，生成产物在此波长范围无吸收峰，因此，在此波长下测量酶

5、作用前后的吸光度之差，便可计算血清尿长下测量酶作用前后的吸光度之差，便可计算血清尿酸的含量，该法为目前临床实验室的最佳方法。酸的含量，该法为目前临床实验室的最佳方法。第8页本方法需要高质量石英比色皿，在使用紫外分光光度计本方法需要高质量石英比色皿，在使用紫外分光光度计前需对其波长进行校正，还要注意控制反应条件即温度、前需对其波长进行校正，还要注意控制反应条件即温度、时间及溶液的时间及溶液的pHpH值等；值等；第8页自动生化分析仪通常不具备自动生化分析仪通常不具备290nm290nm左右的检测波长，因而左右的检测波长，因而该法在临床实验室基本没有采用。该法在临床实验室基本没有采用。尿酸酶紫外法的

6、特异性和抗干扰性好，标本用量少，无尿酸酶紫外法的特异性和抗干扰性好，标本用量少，无需制备无蛋白滤液，而且方法简便快速；需制备无蛋白滤液，而且方法简便快速；血清尿血清尿酸（酸（UAUA）测定测定方法性能评价方法性能评价二、血清胆红素测定二、血清胆红素测定胆红素氧化酶法胆红素氧化酶法 胆红素呈黄色，在胆红素呈黄色，在450nm450nm处有最大吸收峰，胆红素氧化酶催处有最大吸收峰，胆红素氧化酶催化胆红素氧化形成胆绿素，随着胆红素被氧化，胆红素在化胆红素氧化形成胆绿素，随着胆红素被氧化，胆红素在450nm450nm处吸光度下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。在处吸光度下降，下降程度与胆红素被氧化的

7、量相关。在pHpH为为8.08.0的条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因而检测的条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因而检测450nm450nm吸光度的下降值反映的是总胆红素的含量。吸光度的下降值反映的是总胆红素的含量。第10页第10页该法解决了长期以来用重氮反应法测定胆红素条件该法解决了长期以来用重氮反应法测定胆红素条件的不同，包括试剂种类和浓度不同以及反应时间不同的不同，包括试剂种类和浓度不同以及反应时间不同而造成测定值变异大的问题；而造成测定值变异大的问题；第10页特别是对于特别是对于CBCB，由于，由于 BOD BOD仅对血清仅对血清CB CB 进行选择性氧进行选择性氧化

8、化, , 而不对而不对-胆红素和胆红素和UB UB 发生氧化反应发生氧化反应, , 因此反应因此反应具有较好的特异性。具有较好的特异性。酶法特异性高，重复性较好；酶法特异性高，重复性较好；血清胆红素测定血清胆红素测定方法性能评价方法性能评价第11页第二节第二节 脱氢酶指示系统测定法脱氢酶指示系统测定法一、单酶反应直接测定法：一、单酶反应直接测定法：（一）血液乳酸与丙酮酸测定（一）血液乳酸与丙酮酸测定（二）血浆（二）血浆羟丁酸测定羟丁酸测定（三）血氨测定（三）血氨测定1脱氢酶脱氢酶指示系统指示系统二、酶偶联脱氢酶指示系统二、酶偶联脱氢酶指示系统 测定法：测定法：（一）尿素测定（一）尿素测定（二）

9、肌酐测定（二）肌酐测定（三）血浆碳酸氢根测定（三）血浆碳酸氢根测定第12页第12页根据根据340nm340nm处吸光度的变化，计算以处吸光度的变化，计算以NADNAD（H H）或）或NADPNADP（H H）为辅酶的）为辅酶的酶促反应中待测物的浓度酶促反应中待测物的浓度氧化时待测物脱下的氢交给了氧化型辅酶，使其转变为还原型辅酶；氧化时待测物脱下的氢交给了氧化型辅酶，使其转变为还原型辅酶；还原时待测物需要的氢由还原型辅酶提供，使其转化为氧化型辅酶还原时待测物需要的氢由还原型辅酶提供，使其转化为氧化型辅酶生化物质在脱氢酶的催化下发生氧化还原反应生化物质在脱氢酶的催化下发生氧化还原反应概述概述第13

10、页第13页一、单酶反应一、单酶反应直接测定法直接测定法待测物可直接发生脱氢酶促反应，并产待测物可直接发生脱氢酶促反应，并产生可检测的信号。生可检测的信号。第14页第14页血液乳酸测定的方法有血液乳酸测定的方法有乳酸氧化酶法乳酸氧化酶法、酶电极酶电极法法和和乳酸脱氢酶法乳酸脱氢酶法。血液丙酮酸的酶法测定主要包括乳酸脱氢酶法血液丙酮酸的酶法测定主要包括乳酸脱氢酶法和丙酮酸氧化酶法。和丙酮酸氧化酶法。临床血液乳酸与丙酮酸测定大多采用临床血液乳酸与丙酮酸测定大多采用乳酸脱乳酸脱氢酶法氢酶法。血液乳酸与丙酮酸血液乳酸与丙酮酸测定方法概述测定方法概述 第15页第15页脱氢酶法测定乳酸脱氢酶法测定乳酸根据乳

11、酸在乳酸脱氢酶（根据乳酸在乳酸脱氢酶（LDLD）催化下脱氢生成丙酮酸，氧化）催化下脱氢生成丙酮酸，氧化型型NAD+NAD+接受氢转变成还原型接受氢转变成还原型NADHNADH。加入硫酸肼可捕获产物丙。加入硫酸肼可捕获产物丙酮酸促成反应完成。生成的酮酸促成反应完成。生成的NADHNADH与乳酸为等量摩尔，于与乳酸为等量摩尔，于340nm340nm波长测定波长测定NADHNADH的吸光度，可计算出血液中的乳酸含量。的吸光度，可计算出血液中的乳酸含量。第16页第16页脱氢酶法测定丙酮酸脱氢酶法测定丙酮酸是乳酸测定的逆反应，丙酮酸在是乳酸测定的逆反应，丙酮酸在LDLD的催化下，接受的催化下，接受NAD

12、HNADH递递给的氢，还原为乳酸并生成给的氢，还原为乳酸并生成NAD+NAD+。根据。根据NADHNADH吸光度的下降吸光度的下降值可测定样品中的丙酮酸。值可测定样品中的丙酮酸。本方法使用的偏磷酸易被氢离子催化成正磷酸而失去沉淀本方法使用的偏磷酸易被氢离子催化成正磷酸而失去沉淀蛋白的作用，偏磷酸溶液在蛋白的作用，偏磷酸溶液在4 4时仅能稳定时仅能稳定1 1周；周；丙酮酸标准应用液会发生聚合反应，其聚合体的酶促反应速丙酮酸标准应用液会发生聚合反应，其聚合体的酶促反应速率与非聚合体不同，故丙酮酸标准应用液必须新鲜配制；率与非聚合体不同，故丙酮酸标准应用液必须新鲜配制；血中丙酮酸极不稳定，血液抽出后

13、血中丙酮酸极不稳定，血液抽出后1min1min就会减低，如用偏磷就会减低，如用偏磷酸沉淀蛋白后放酸沉淀蛋白后放4 4时可稳定时可稳定8d8d；酮体易受饮食影响，剧烈运动时乳酸可在短时间内明显增加酮体易受饮食影响，剧烈运动时乳酸可在短时间内明显增加，因此，抽血前患者应保持空腹和完全静息至少，因此，抽血前患者应保持空腹和完全静息至少2h2h；第17页第17页抗凝剂用肝素抗凝剂用肝素- -氟化钠较好。氟化钠较好。脱氢酶法测定乳酸和丙酮酸脱氢酶法测定乳酸和丙酮酸方法性能评价方法性能评价第18页第18页血浆血浆-羟丁酸的测定方法有羟丁酸的测定方法有酸氧化比色法酸氧化比色法、气相色谱法气相色谱法、酶法酶法

14、和和毛细管等速电泳法毛细管等速电泳法等等脱氢酶法脱氢酶法是血浆是血浆-羟丁酸测定的常用方法。羟丁酸测定的常用方法。血浆血浆羟丁酸测定羟丁酸测定方法概述方法概述 第19页第19页脱氢酶法测定血浆脱氢酶法测定血浆羟丁酸羟丁酸-羟丁酸在羟丁酸在- -羟丁酸脱氢酶的催化下，被氧化生成乙酰乙酸，羟丁酸脱氢酶的催化下，被氧化生成乙酰乙酸，同时同时NAD+NAD+被还原为被还原为NADHNADH，在，在pH8.5pH8.5时测定时测定340nm340nm波长下波长下NADHNADH吸光度吸光度上升的速率，就可以计算出血浆中上升的速率，就可以计算出血浆中- -羟丁酸的浓度。羟丁酸的浓度。第20页 由于易受饮食

15、影响，原则上应空腹取血，由于易受饮食影响，原则上应空腹取血，-羟丁羟丁酸避免在室温放置，酸避免在室温放置，4 4可以稳定可以稳定30d30d。第20页脱氢酶法测定血浆脱氢酶法测定血浆羟丁酸羟丁酸方法性能评价方法性能评价 试剂中如含有草酸，可以抑制内源性试剂中如含有草酸，可以抑制内源性LDLD对乳酸的对乳酸的氧化反应。氧化反应。第21页第21页血氨测定方法概述血氨测定方法概述 血氨的测定主要有两类方法：血氨的测定主要有两类方法：两步法，先从血浆中分离出氨，再进行测定，如离子交换树两步法，先从血浆中分离出氨，再进行测定，如离子交换树脂法；脂法；一步法，即不需要分离就可以直接测定，如酶法和离子选择一

16、步法，即不需要分离就可以直接测定，如酶法和离子选择电极法。电极法。 离子交换树脂法离子交换树脂法是血氨测定的参考方法；是血氨测定的参考方法；氨电极法氨电极法由于氨气由于氨气敏电极选择性较高，所以方法特异性好，准确度高，但耐用性差敏电极选择性较高，所以方法特异性好，准确度高，但耐用性差，且电极的稳定性受温度、渗透压、中介液等多种因素影响。，且电极的稳定性受温度、渗透压、中介液等多种因素影响。目前，目前，酶法酶法由于方法简单、特异性高而被广泛应用。由于方法简单、特异性高而被广泛应用。第22页第22页谷氨酸脱氢酶法测定血氨谷氨酸脱氢酶法测定血氨 在谷氨酸脱氢酶在谷氨酸脱氢酶(GLDH)(GLDH)作

17、用下，血浆中氨与作用下，血浆中氨与- -酮戊二酸和酮戊二酸和NADPHNADPH反应，生成谷氨酸和反应，生成谷氨酸和NADP+NADP+，NADPHNADPH在在340nm340nm吸光度的下降程度与反应体系中氨的浓度呈吸光度的下降程度与反应体系中氨的浓度呈正比关系。正比关系。第23页 该法在该法在pH7.0pH7.0以上时，以上时，ADPADP是是GLDHGLDH的稳定剂和激活剂，的稳定剂和激活剂，能加速反应；用能加速反应；用NADPHNADPH取代原来的取代原来的NADHNADH，既可缩短反应时，既可缩短反应时间，又能防止假阳性（因为血浆中有许多以间，又能防止假阳性（因为血浆中有许多以NA

18、DHNADH为辅酶的为辅酶的脱氢酶，用脱氢酶，用NADHNADH时易产生负反应）；时易产生负反应）；第23页该法特异性强、快速，是较为理想的氨分析方法；该法特异性强、快速，是较为理想的氨分析方法；谷氨酸脱氢酶法测定血氨谷氨酸脱氢酶法测定血氨方法性能评价方法性能评价床旁取血后应立即分离血清并尽快进行测定，防止外床旁取血后应立即分离血清并尽快进行测定，防止外源性氨的污染。源性氨的污染。第24页第24页二、酶偶联脱氢酶二、酶偶联脱氢酶指示系统测定法指示系统测定法待当待测物不可直接发生脱氢酶促反应时，可通待当待测物不可直接发生脱氢酶促反应时，可通过一个或多个辅助酶反应，使其产物可发生脱氢过一个或多个辅

19、助酶反应，使其产物可发生脱氢酶反应，并产生可检测的信号。酶反应，并产生可检测的信号。第25页第25页尿素测定方法概述尿素测定方法概述 尿素的测定方法可分为尿素的测定方法可分为化学比色法化学比色法和和尿素酶法尿素酶法两大类。两大类。 尿素酶法尿素酶法简单、快速、准确、特异性简单、快速、准确、特异性强，易于自动化。强，易于自动化。第26页酶偶联脱氢酶法测定酶偶联脱氢酶法测定尿素尿素尿素酶催化尿素分解产生氨，氨在谷氨酸脱氢酶（尿素酶催化尿素分解产生氨，氨在谷氨酸脱氢酶（GLDHGLDH）的作用下使的作用下使NADHNADH氧化为氧化为NAD+NAD+，然后在，然后在340nm340nm下测定吸光度下

20、测定吸光度的降低值，用标准对照速率法即可计算出血清尿素的含量的降低值，用标准对照速率法即可计算出血清尿素的含量第27页但该法存在内源性氨和外源性氨，以及内源性脱氢酶和还但该法存在内源性氨和外源性氨，以及内源性脱氢酶和还原型辅酶的干扰，需采用含原型辅酶的干扰，需采用含LDLD抑制剂（如高浓度丙酮酸）抑制剂（如高浓度丙酮酸）的双试剂法来测定，否则测定结果偏高。的双试剂法来测定，否则测定结果偏高。第27页酶偶联脱氢酶法测定酶偶联脱氢酶法测定尿素方法性能评价尿素方法性能评价尿素酶偶联脱氢酶法测定血清尿素方法简便、快速，尿素酶偶联脱氢酶法测定血清尿素方法简便、快速，适用于临床常规分析适用于临床常规分析第

21、28页第28页肌酐测定方法概述肌酐测定方法概述肌酐酶法测定主要有肌酐酶法测定主要有肌酐亚氨酸水解酶偶肌酐亚氨酸水解酶偶联谷氨酸脱氢酶法联谷氨酸脱氢酶法和和酶偶联肌氨酸氧化酶酶偶联肌氨酸氧化酶法法两种。两种。第29页脱氢酶法测定肌酐脱氢酶法测定肌酐肌酐在肌酐亚氨基水解酶肌酐在肌酐亚氨基水解酶(CRDI)(CRDI)的作用下水解为的作用下水解为N-N-甲基甲基- -乙内酰脲和乙内酰脲和NH4+NH4+，NH4+NH4+与与NADPHNADPH和和-酮戊二酸在酮戊二酸在GLDHGLDH的作用下，生成的作用下，生成L-L-谷氨酸和谷氨酸和NADP+NADP+，记录记录340 nm340 nm处吸光度的

22、下降，进而计算出标本中肌酐的浓度。处吸光度的下降，进而计算出标本中肌酐的浓度。第30页第30页该方法的主要缺点是试剂不够稳定，且肌酐酶来源该方法的主要缺点是试剂不够稳定，且肌酐酶来源困难，使得试剂盒价格昂贵，影响其在临床实验室的困难，使得试剂盒价格昂贵，影响其在临床实验室的普遍使用。普遍使用。肌酐脱氢酶法与参考方法高效液相色谱法具有良好的相关肌酐脱氢酶法与参考方法高效液相色谱法具有良好的相关性，精密度好、准确度高、线性范围宽，不受黄疸、乳糜血性，精密度好、准确度高、线性范围宽，不受黄疸、乳糜血、溶血和临床常用治疗药物及体内代谢物的干扰，结果更趋、溶血和临床常用治疗药物及体内代谢物的干扰，结果更

23、趋于真值，易于自动化分析，可用于血液及尿液的检测。于真值，易于自动化分析，可用于血液及尿液的检测。肌酐脱氢酶法性能评价肌酐脱氢酶法性能评价相比之下，肌氨酸氧化酶法具有灵敏度高，线性范相比之下，肌氨酸氧化酶法具有灵敏度高，线性范围宽，试剂稳定性好等优点。围宽，试剂稳定性好等优点。第31页第31页血浆碳酸氢根血浆碳酸氢根测定方法概述测定方法概述血浆血浆HCOHCO3 3- -测定方法主要有测定方法主要有离子选择电极法离子选择电极法、滴定法滴定法和和酶速率法酶速率法等。等。酶速率法酶速率法为为HCOHCO3 3- -直直接参与化学反应，操作简单，反应特异，接参与化学反应，操作简单，反应特异，更适合临

24、床常规检测。更适合临床常规检测。第32页酶法测定血浆碳酸氢根酶法测定血浆碳酸氢根血浆中的血浆中的HCOHCO3 3- -在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPCPEPC）催化下，与磷）催化下，与磷酸烯醇式丙酮酸（酸烯醇式丙酮酸（PEPPEP）反应，生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸和）反应，生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸和苹果酸脱氢酶（苹果酸脱氢酶（MDHMDH）反应，生成苹果酸，同时将）反应，生成苹果酸，同时将NADHNADH氧化成氧化成NADNAD+ +；在；在340nm340nm波长处吸光度的降低与样品中波长处吸光度的降低与样品中HCOHCO3 3- -含量成正比。含量成正比

25、。第33页第33页 在准备试剂和收集标本时，应严格密封，以最大限度在准备试剂和收集标本时，应严格密封，以最大限度地减少干扰如标本中地减少干扰如标本中COCO2 2的挥发；的挥发；酶法测定血浆碳酸氢根酶法测定血浆碳酸氢根性能评价性能评价试剂浑浊或试剂空白吸光度小于试剂浑浊或试剂空白吸光度小于1.01.0时都不能使用；时都不能使用；内源性丙酮酸和内源性丙酮酸和LDLD对反应产生干扰，此干扰可由草氨酸对反应产生干扰，此干扰可由草氨酸钠消除。钠消除。第34页第34页四、血清总胆固醇四、血清总胆固醇三、血清三酰甘油三、血清三酰甘油一、葡萄糖一、葡萄糖第三节第三节 过氧化物酶指示系统测定法过氧化物酶指示系

26、统测定法过氧化物酶过氧化物酶指示系统指示系统测定法测定法二、糖化血清蛋白二、糖化血清蛋白五、血清五、血清HDL-CHDL-C和和LDL-CLDL-C第35页第35页TrinderTrinder反应指示终反应指示终点点生化物质在氧化酶的催化下，生成生化物质在氧化酶的催化下，生成H2O2过氧化物酶指示系统是临床生化物质过氧化物酶指示系统是临床生化物质最常用的测定方法最常用的测定方法概述概述第36页第36页葡萄糖葡萄糖测定方法概述测定方法概述葡萄糖的检测方法较多，可归纳为葡萄糖的检测方法较多，可归纳为氧化还氧化还原法原法（无机化学法）、（无机化学法）、缩合法缩合法（有机化学（有机化学法）和法）和酶法

27、酶法（生物化学法）三类。（生物化学法）三类。酶法酶法包括包括葡萄糖氧化酶（葡萄糖氧化酶（GOD-PODGOD-POD）法）法、己糖激酶（己糖激酶（HKHK）法）法、葡萄糖脱氢酶法葡萄糖脱氢酶法和和葡葡萄糖氧化酶萄糖氧化酶- -氧速率（氧速率（GOD-PORGOD-POR）法。法。第37页葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖葡萄糖根据根据GODGOD可以高特异性的催化葡萄糖氧化成为葡萄糖酸并同时产生可以高特异性的催化葡萄糖氧化成为葡萄糖酸并同时产生H H2 2O O2 2，生成的，生成的H H2 2O O2 2参与参与TrinderTrinder反应，生成醌亚胺色素，在反应，生成醌亚胺色素

28、，在505nm505nm波长波长下比色检测，生成的吸光度与葡萄糖浓度成正比。下比色检测，生成的吸光度与葡萄糖浓度成正比。第38页第38页 GODGOD仅高特异的催化仅高特异的催化-D-D-葡萄糖，而葡萄糖中葡萄糖，而葡萄糖中型约占型约占36%36%，因此葡萄糖的完全氧化需要使，因此葡萄糖的完全氧化需要使型变旋型变旋为为型；型；葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖性能评价葡萄糖性能评价 现在的试剂大多含有变旋酶，可促进现在的试剂大多含有变旋酶，可促进型向型向型的转变，延长孵育时间也可以达到自发变旋。型的转变，延长孵育时间也可以达到自发变旋。第39页第39页糖化血清蛋白糖化血清蛋白测定方法概

29、述测定方法概述 血清清蛋白在高血糖情况下会发生糖基化，主要是清蛋白肽血清清蛋白在高血糖情况下会发生糖基化，主要是清蛋白肽链链189189位的赖氨酸与葡萄糖结合形成的高分子酮胺结构，该结构位的赖氨酸与葡萄糖结合形成的高分子酮胺结构，该结构类似于果糖胺，因此糖化血清蛋白（类似于果糖胺，因此糖化血清蛋白（GSPGSP）的测定也称为果糖胺）的测定也称为果糖胺的测定。的测定。 GSP GSP的常用测定方法有的常用测定方法有硝基四氮唑蓝（硝基四氮唑蓝（NBTNBT）化学比色法）化学比色法和和酮酮胺氧化酶（胺氧化酶（KAOKAO）法）法。 NBT NBT法基于酮胺结构可以在碱性环境中与法基于酮胺结构可以在碱

30、性环境中与NBTNBT反应生成蓝紫色反应生成蓝紫色的化合物。与的化合物。与NBTNBT法相比，法相比，KAOKAO法的精密度和准确度更高。法的精密度和准确度更高。第40页酮胺氧化酶法测定酮胺氧化酶法测定糖化血清蛋白糖化血清蛋白GSPGSP在蛋白酶在蛋白酶K K的作用下可形成糖化蛋白片段，的作用下可形成糖化蛋白片段，该片段在该片段在KAOKAO的作用下分解为氨基酸、葡萄糖和的作用下分解为氨基酸、葡萄糖和H H2 2O O2 2，生成的，生成的H2O2H2O2即可用即可用TrinderTrinder反应测定。反应测定。第41页第41页 KAOKAO法稳定，特异性强，具有酶法的基本优点；法稳定，特异

31、性强，具有酶法的基本优点；酮胺氧化酶法测定糖化酮胺氧化酶法测定糖化血清蛋白性能评价血清蛋白性能评价 样本在样本在4 4可保存可保存3 3周，周，-20-20保存保存5 5周。当病人血周。当病人血浆蛋白低于浆蛋白低于35g/L35g/L时，时，GSPGSP偏低。偏低。第42页第42页血清三酰甘油血清三酰甘油测定方法概述测定方法概述 血清三酰甘油（血清三酰甘油（TGTG）测定方法有）测定方法有物理化学法物理化学法（同（同位素稀释位素稀释- -质谱法）、质谱法）、化学法化学法和和酶法酶法三类。三类。 酶法是目前临床测定血清酶法是目前临床测定血清TGTG的常规方法。常用的的常规方法。常用的酶法有酶法有

32、甘油磷酸脱氢酶（甘油磷酸脱氢酶（GDHGDH）法）法和和GDHGDH偶联偶联NBTNBT的比色的比色法法，以及，以及甘油磷酸氧化酶偶联甘油磷酸氧化酶偶联TrinderTrinder反应法反应法。第43页甘油磷酸氧化酶法测定甘油磷酸氧化酶法测定血清三酰甘油血清三酰甘油血清血清TGTG可被可被LPLLPL水解为水解为甘油和脂肪酸，生成的甘油和脂肪酸，生成的甘油被甘油激酶（甘油被甘油激酶（GKGK）及及ATPATP磷酸化后形成磷酸化后形成3-3-磷酸甘油，磷酸甘油氧磷酸甘油，磷酸甘油氧化酶（化酶（GPOGPO）氧化）氧化3-3-磷磷酸甘油产生酸甘油产生H H2 2O O2 2，生成，生成的的H H2

33、 2O O2 2参与参与TrinderTrinder反应反应而被测定。而被测定。第44页第44页与与GDHGDH法相比，该方法易受到还原性物质的干扰，法相比，该方法易受到还原性物质的干扰，但是由于方法稳定，测定简单，仍然是目前主要采用但是由于方法稳定，测定简单，仍然是目前主要采用的检测方法。的检测方法。由于乳糜微粒含有大量的由于乳糜微粒含有大量的TGTG，可影响检测结果，因，可影响检测结果，因此需空腹此需空腹12h12h以上采血；以上采血；该法可采用血清或血浆标本，若采用血浆，应将该法可采用血清或血浆标本，若采用血浆，应将结果乘以标准系数结果乘以标准系数1.031.03，并在报告单上注明，并在

34、报告单上注明；该法通常被称为该法通常被称为GPO-PAPGPO-PAP法，结果比法，结果比GDHGDH法约低法约低3% 3% ；甘油磷酸氧化酶法测定甘油磷酸氧化酶法测定血清三酰甘油性能评价血清三酰甘油性能评价第45页第45页血清总胆固醇血清总胆固醇测定方法概述测定方法概述 血清总胆固醇（血清总胆固醇（TCTC）测定方法种类繁）测定方法种类繁多，主要有多，主要有放射性核素稀释放射性核素稀释- -质谱法质谱法、化学化学法法和和酶法酶法。 酶法的主要方法为酶法的主要方法为胆固醇氧化酶（胆固醇氧化酶（COD-COD-PAPPAP）法）法。第46页胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇胆

35、固醇根据根据GODGOD可以高特异性的催化葡萄糖氧化成为葡可以高特异性的催化葡萄糖氧化成为葡萄糖酸并同时产生萄糖酸并同时产生H H2 2O O2 2，生成的，生成的H H2 2O O2 2参与参与TrinderTrinder反应，生成醌亚胺色素，在反应，生成醌亚胺色素，在505nm505nm波长波长下比色检测，生成的吸光度与葡萄糖浓度成正下比色检测，生成的吸光度与葡萄糖浓度成正比。比。第47页第47页样本若未及时检测，置样本若未及时检测，置2 2-8-8冷藏可稳定冷藏可稳定1 1个月，个月，- -2020冷冻可稳定冷冻可稳定1 1年。年。因此若采用血浆做为检测标本，应将结果乘以标准系因此若采用

36、血浆做为检测标本，应将结果乘以标准系数数1.031.03，并在报告单上注明；，并在报告单上注明；同血清同血清TGTG检测一样，血浆的结果比血清约低检测一样，血浆的结果比血清约低3% 3% ；COD-PAPCOD-PAP法标本用量小，结果可靠；法标本用量小，结果可靠；胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇性能评价性能评价第48页第48页血清血清HDL-CHDL-C和和LDL-CLDL-C测定方法概述测定方法概述 国外国外将常规测定将常规测定HDL-CHDL-C的方法分为的方法分为3 3代：第代：第1 1代为代为化学沉淀化学沉淀法法；第；第2 2代为代为硫酸葡聚糖硫酸葡聚糖-

37、 -镁（镁（DS-Mg2+DS-Mg2+）分离法）分离法；第；第3 3代为代为匀匀相测定法相测定法。国内国内的检测方法也可分为的检测方法也可分为3 3代：第代：第1 1代为代为电泳法电泳法；第第2 2代为代为化学沉淀法化学沉淀法，19951995年中华医学会检验分会曾在国内年中华医学会检验分会曾在国内推荐推荐磷钨酸磷钨酸- -镁（镁（PTA-Mg2+PTA-Mg2+）法）法作为作为HDL-CHDL-C测定的常规方法；测定的常规方法；第第3 3代为目前广泛使用的匀代为目前广泛使用的匀相测定法相测定法。 血清血清LDL-CLDL-C的测定相对比较复杂，方法有的测定相对比较复杂，方法有Friedew

38、aldFriedewald公公式法式法、PlanellaPlanella公式法公式法；聚乙烯硫酸盐（聚乙烯硫酸盐（PVSPVS）沉淀法）沉淀法是目是目前中华医学会推荐的前中华医学会推荐的LDL-CLDL-C测定方法；美国测定方法；美国CDCCDC测定测定LDL-CLDL-C的的参考方法为参考方法为超速离心法（超速离心法（- -脂蛋白定量法）脂蛋白定量法）。第49页匀相法测定匀相法测定HDL-CHDL-C利用一系列反应先将利用一系列反应先将CMCM、VLDLVLDL、LDLLDL或其反应产物清除，然或其反应产物清除，然后加入一种特殊的选择性表面活性剂，使后加入一种特殊的选择性表面活性剂，使HDL

39、HDL颗粒形成可溶颗粒形成可溶状态，其释放的胆固醇和胆固醇酯与状态，其释放的胆固醇和胆固醇酯与CEHCEH及及CODCOD反应，生成反应，生成的的H H2 2O O2 2用用TrinderTrinder反应测定。反应测定。第50页匀相法测定匀相法测定HDL-CHDL-C同同HDL-CHDL-C一样，血清中除一样，血清中除LDL-CLDL-C外，外，HDLHDL、CMCM和和VLDLVLDL等在某些表等在某些表面活性剂的作用下，可改变其脂蛋白结构并解离，释放出来面活性剂的作用下，可改变其脂蛋白结构并解离，释放出来的微粒化胆固醇分子与胆固醇酶试剂反应后生成的微粒化胆固醇分子与胆固醇酶试剂反应后生成

40、H2O2H2O2，因此，因此也需要进行前处理后，剩下完整也需要进行前处理后，剩下完整LDLLDL的颗粒进行下一步反应。的颗粒进行下一步反应。第51页第51页匀相法测定血清中的匀相法测定血清中的HDL-CHDL-C和和LDL-CLDL-C的最主要区别在于第一步反应时的最主要区别在于第一步反应时加入的反应促进剂不同，其目的都是使除了待测物质以外的其他干扰加入的反应促进剂不同，其目的都是使除了待测物质以外的其他干扰物质被清除掉，从而使测定结果仅仅反映的是待测物质的含量；物质被清除掉，从而使测定结果仅仅反映的是待测物质的含量；匀相法测定匀相法测定HDL-CHDL-C和和LDL-CLDL-C性能评价性能

41、评价该法具有较好的精密度和线性范围，干扰物质较少，而且样品用量该法具有较好的精密度和线性范围，干扰物质较少，而且样品用量少且无需预处理，自动化程度高，结果精确度、准确度高，因而近来少且无需预处理，自动化程度高，结果精确度、准确度高，因而近来在临床上得到了越来越广泛的应用；在临床上得到了越来越广泛的应用；缺点是成本相对较高。缺点是成本相对较高。第52页第四节第四节 酶循环测定法酶循环测定法第52页三、血清同型半胱氨酸三、血清同型半胱氨酸二、血清胆汁酸二、血清胆汁酸一、血清甘油一、血清甘油四、血浆四、血浆NH4NH4+ +酶循环酶循环测定法测定法第53页概述概述 酶循环法是一种可以大大提高待测物测

42、定灵敏度，减酶循环法是一种可以大大提高待测物测定灵敏度，减少共存物质干扰，达到高灵敏度和高特异度测定要求的一少共存物质干扰，达到高灵敏度和高特异度测定要求的一类技术。类技术。 根据试剂酶的结合方式和辅酶的用法，可以将酶循环根据试剂酶的结合方式和辅酶的用法，可以将酶循环法分为法分为底物循环法底物循环法和和辅酶循环法辅酶循环法。根据反应方式的不同又。根据反应方式的不同又可将底物循环法分为可将底物循环法分为氧化酶脱氢酶反应法氧化酶脱氢酶反应法和和脱氢酶辅酶反脱氢酶辅酶反应法应法等。等。第54页产物循环产物循环- -氧化酶氧化酶- -脱氢酶脱氢酶系统测定血清甘油系统测定血清甘油甘油和甘油和ATPATP

43、在甘油激酶（在甘油激酶（GKGK）催化下形成甘油）催化下形成甘油-3-3-磷酸（磷酸（G-3-PG-3-P），后者可被磷酸甘油氧化酶（），后者可被磷酸甘油氧化酶（GPOGPO）氧化为磷酸二羟苯酮（）氧化为磷酸二羟苯酮（DHAPDHAP），而甘油），而甘油-3-3-磷酸脱氢酶（磷酸脱氢酶（G-3-PDG-3-PD）又可将）又可将DHAPDHAP还原回还原回G-3-PG-3-P，在此过程中伴有，在此过程中伴有NADHNADH向向NAD+NAD+的转化，反应反复循环。的转化，反应反复循环。第55页第55页 在反复循环中在反复循环中G-3-PG-3-P和和DHAPDHAP的量不变，而产物的量不变，而产

44、物H H2 2O O2 2则则随着每次循环不断递增，同时随着每次循环不断递增，同时NADHNADH不断递减。在规定时不断递减。在规定时间间t t内，内， H H2 2O O2 2累计的量决定于累计的量决定于t t和每分钟循环次数，因此和每分钟循环次数，因此其灵敏度大大超过一般的酶法分析；其灵敏度大大超过一般的酶法分析；产物循环产物循环- -氧化酶氧化酶- -脱氢酶脱氢酶系统测定血清甘油性能评价系统测定血清甘油性能评价 检测的指示系统有：检测的指示系统有：1 1、用连续检测法测定、用连续检测法测定NADHNADH（340nm340nm）的变化速率。）的变化速率。2 2、产物、产物H H2 2O

45、O2 2可偶联可偶联PODPOD，通过，通过TrinderTrinder反应比色测定。反应比色测定。第56页第56页血清胆汁酸测定血清胆汁酸测定方法概述方法概述 血清总胆汁酸（血清总胆汁酸（TBATBA）的测定方法包括）的测定方法包括层层析法析法、放免法和酶法放免法和酶法等。酶法又可分为等。酶法又可分为酶荧酶荧光法光法、酶比色法酶比色法和和酶循环法酶循环法。目前推荐的方法是目前推荐的方法是酶循环法酶循环法，该法灵敏度，该法灵敏度高、特异性好，已得到广泛应用。高、特异性好，已得到广泛应用。第57页底物循环底物循环- -脱氢酶脱氢酶- -辅酶系统辅酶系统测定血清胆汁酸测定血清胆汁酸3-3-羟基类固

46、醇脱氢酶（羟基类固醇脱氢酶（3-HSD3-HSD）可催化胆汁酸和）可催化胆汁酸和3-3-酮类固醇之间的反应，正反应对辅酶酮类固醇之间的反应，正反应对辅酶硫代氧化型辅酶硫代氧化型辅酶（thio-NAD+thio-NAD+）的亲和力远远大于辅酶）的亲和力远远大于辅酶（NAD+NAD+），而逆反应对还原型辅），而逆反应对还原型辅酶酶（NADHNADH）的亲和力大于硫代还原型辅酶）的亲和力大于硫代还原型辅酶（thio-NADHthio-NADH），当反应系统中有足够的），当反应系统中有足够的thio-NAD+thio-NAD+和和NADHNADH时，少量胆汁酸生成少量的时，少量胆汁酸生成少量的3-3-

47、酮类固醇，并在两者之间构成循环，不断产酮类固醇，并在两者之间构成循环，不断产生黄色的硫代还原型辅酶生黄色的硫代还原型辅酶（thio-NADHthio-NADH），反应速度与待测物胆汁酸浓度呈正比。），反应速度与待测物胆汁酸浓度呈正比。第58页第58页 由于胆汁酸在体内的浓度只有微摩尔水平，因此由于胆汁酸在体内的浓度只有微摩尔水平，因此常规方法难以测定，采用此循环反应，其灵敏度可常规方法难以测定，采用此循环反应，其灵敏度可增加数十倍，只要增加数十倍，只要NADHNADH足够多，时间越长产物越多，足够多，时间越长产物越多，直到系统中某一反应物耗尽为止。直到系统中某一反应物耗尽为止。底物循环底物循环

48、- -脱氢酶脱氢酶- -辅酶系统辅酶系统测定血清胆汁酸性能评价测定血清胆汁酸性能评价 循环酶法测定血清胆汁酸检测的是循环酶法测定血清胆汁酸检测的是395415nm395415nm波波长时反应中氧化型长时反应中氧化型thio-NAD+thio-NAD+转化为还原型转化为还原型thio-thio-NADHNADH的增加速度。的增加速度。第59页第59页血清同型半胱氨酸测定血清同型半胱氨酸测定方法概述方法概述 测定同型半胱氨酸的方法包括测定同型半胱氨酸的方法包括氨基酸分析仪法氨基酸分析仪法、荧荧光偏振免疫分析光偏振免疫分析（FPIAFPIA）、）、酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法、HPLCHPLC法法和

49、和酶学分析法酶学分析法。其中。其中HPLCHPLC法是最常用的方法，但是需要特法是最常用的方法，但是需要特殊设备。殊设备。 循环酶法是利用酶的底物特性，放大靶物质（被测循环酶法是利用酶的底物特性，放大靶物质（被测物）的检测方法，此法仅循环靶物质，具有快速、简便物）的检测方法，此法仅循环靶物质，具有快速、简便、灵敏度高，易于自动化等特点。、灵敏度高，易于自动化等特点。第60页底物循环底物循环- -脱氢酶脱氢酶- -辅酶系统辅酶系统测定血清同型半胱氨酸测定血清同型半胱氨酸在三在三- -乙乙- -羧乙基膦（羧乙基膦（TCEPTCEP）作用下，结合型）作用下，结合型HcyHcy转化为游离型转化为游离型

50、HcyHcy，游离型，游离型HcyHcy与与s-s-腺苷腺苷甲硫氨酸（甲硫氨酸（SAMSAM）在）在HcyHcy甲基转移酶催化下，形成蛋氨酸（甲基转移酶催化下，形成蛋氨酸（MetMet）和）和S-S-腺苷同型半胱氨酸腺苷同型半胱氨酸（SAHSAH），），SAHSAH被被SAHSAH水解酶水解成腺苷和水解酶水解成腺苷和HcyHcy，形成的，形成的HcyHcy可以循环加入反应，从而放大可以循环加入反应，从而放大检测信号，腺苷（检测信号，腺苷（AdoAdo）水解为次黄嘌呤（）水解为次黄嘌呤（inosineinosine）和氨，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下）和氨，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使，使NADHN

51、ADH转化为转化为NAD+NAD+，样本中的，样本中的HcyHcy的浓度与的浓度与NADHNADH的变化成正比。的变化成正比。第61页第61页 酶循环法是目前临床测定血清酶循环法是目前临床测定血清HcyHcy最新的一种化学最新的一种化学方法，与以前免疫化学法、电泳法、色谱法等相比，方法，与以前免疫化学法、电泳法、色谱法等相比，具有操作简单，可自动化等优点；具有操作简单，可自动化等优点；底物循环底物循环- -脱氢酶脱氢酶- -辅酶系统测定辅酶系统测定血清同型半胱氨酸性能评价血清同型半胱氨酸性能评价 随着对同型半胱氨酸临床研究的深入，其定量测定随着对同型半胱氨酸临床研究的深入，其定量测定意义越来越

52、受到重视，因此本实验的检测方法及试剂意义越来越受到重视，因此本实验的检测方法及试剂具有很高的推广及应用价值。具有很高的推广及应用价值。第62页氨循环氨循环- -合成酶合成酶- -脱氢酶系统脱氢酶系统测定血浆测定血浆NHNH4 4+ +靶物质靶物质NHNH4 4+ +和脱氨和脱氨-NAD-NAD在在NADNAD合成酶和合成酶和MgMg2 2+ +存在下可被催存在下可被催化生成亮氨酸和化生成亮氨酸和NADNAD+ +，亮氨酸经亮氨酸脱氢酶催化形成，亮氨酸经亮氨酸脱氢酶催化形成为氧化异己酸和为氧化异己酸和NHNH4 4+ +，同时将，同时将NADNAD+ +转化为转化为NADHNADH，生成的，生成

53、的NHNH4 4+ + 进入循环往复反应，在进入循环往复反应，在340nm340nm处测定处测定NADNAD+ + 形成形成NADHNADH吸光度的增加即可计算出吸光度的增加即可计算出NHNH4 4+ +的含量。的含量。第63页第63页 该法测定血浆该法测定血浆NH4+NH4+具有快速、特异性高、微量的特点；具有快速、特异性高、微量的特点；氨循环氨循环- -合成酶合成酶- -脱氢酶系统脱氢酶系统测定血浆测定血浆NHNH4 4+ +性能评价性能评价 在技术上酶法不需预先分离氨，没有碱水解步骤，在技术上酶法不需预先分离氨，没有碱水解步骤，减少了阳性偏差。减少了阳性偏差。第64页第五节第五节 酶激活

54、和酶抑制测定法酶激活和酶抑制测定法一、无机离子测定：一、无机离子测定：（一）丙酮酸激酶法测定钾离子（一）丙酮酸激酶法测定钾离子（二）（二）-半乳糖苷酶法测定钠离子半乳糖苷酶法测定钠离子（三）淀粉酶法测定氯离子（三）淀粉酶法测定氯离子（四）异柠檬酸脱氢酶法测定镁离子（四）异柠檬酸脱氢酶法测定镁离子1酶激活和酶激活和酶抑制酶抑制测定法测定法二、微量元素测定：二、微量元素测定：（一）超氧化物歧化酶法测定铜离子（一）超氧化物歧化酶法测定铜离子（二）碳酸酐酶法测定锌离子（二）碳酸酐酶法测定锌离子 三、有机磷测定三、有机磷测定第65页概述概述第65页 1酶激酶激活剂活剂MgMg2 2+ +ZnZn2 2+

55、 +K K+ +ClCl- -第66页第66页第66页Add TitleClick to edit title styleClick to edit title styleClick to edit title styleClick to edit title styleClick to edit title styleClick to edit title style无机离子、微量元素无机离子、微量元素可使该酶重新具有活性可使该酶重新具有活性利用一些物质抑制酶的活性利用一些物质抑制酶的活性酶激活酶激活酶抑制酶抑制根据酶活性被抑制的程度来测定其抑制物浓根据酶活性被抑制的程度来测定其抑制物浓度，

56、称为度，称为酶抑制剂法酶抑制剂法，如有机磷的测定。，如有机磷的测定。第67页第67页丙酮酸激酶法测定钾离子丙酮酸激酶法测定钾离子磷酸烯醇式丙酮酸和磷酸烯醇式丙酮酸和 ADPADP在丙酮酸激酶（在丙酮酸激酶（PKPK）的催化下）的催化下，可生成丙酮酸和，可生成丙酮酸和ATPATP，丙酮酸又与，丙酮酸又与LDHLDH系统偶联，经系统偶联，经LDHLDH催化生成乳酸的同时，催化生成乳酸的同时，NADHNADH氧化成氧化成NADNAD，钾离子的，钾离子的存在可使存在可使PKPK活性显著增强，故活性显著增强，故NADHNADH在在340nm340nm吸光度的变吸光度的变化可间接反映血清钾离子的浓度。化可

57、间接反映血清钾离子的浓度。第68页第68页第68页-半乳糖苷酶法测定钠离子半乳糖苷酶法测定钠离子邻硝基苯邻硝基苯-D-D-半乳糖（半乳糖（ONPGONPG）在钠依赖性）在钠依赖性-半乳半乳糖苷酶作用下生成半乳糖和邻硝基苯酚，后者的生成糖苷酶作用下生成半乳糖和邻硝基苯酚，后者的生成速率与标本中钠离子的浓度成正比，在速率与标本中钠离子的浓度成正比，在405nm405nm波长处波长处检测邻硝基苯酚的变化可计算出钠离子的含量。检测邻硝基苯酚的变化可计算出钠离子的含量。第69页第69页第69页第69页淀粉酶法测定氯离子淀粉酶法测定氯离子-淀粉酶可催化淀粉酶可催化2-2-氯氯-4-4-硝基苯硝基苯-D-D

58、-麦芽三糖苷麦芽三糖苷（CNP-G3CNP-G3）解离生成）解离生成2-2-氯氯-4-4-硝基硝基- -（CNPCNP）和麦芽三）和麦芽三糖（糖（G3G3），），CNPCNP的最大吸收峰在的最大吸收峰在405nm405nm，连续监测，连续监测405nm405nm吸光度变化可直接反映吸光度变化可直接反映CNPCNP生成量，其与酶活生成量，其与酶活力成正比。氯离子是力成正比。氯离子是-淀粉酶的激动剂，因此反应淀粉酶的激动剂，因此反应速率的变化可反映氯离子的浓度。速率的变化可反映氯离子的浓度。第70页第70页第70页第70页第70页异柠檬酸脱氢酶法测定镁离子异柠檬酸脱氢酶法测定镁离子在适当浓度的两种

59、金属螯合剂在适当浓度的两种金属螯合剂EDTAEDTA和和GEDTAGEDTA（乙二（乙二醇二乙醚二胺四乙酸）中，用镁离子作为激活剂，醇二乙醚二胺四乙酸）中，用镁离子作为激活剂，通过异柠檬酸脱氢酶（通过异柠檬酸脱氢酶（ICDICD）催化异柠檬酸脱氢，）催化异柠檬酸脱氢，使使NADPNADP还原成还原成NADPHNADPH。在同样的条件下，与镁的。在同样的条件下，与镁的标准液比较，即可求得血清镁的含量。标准液比较，即可求得血清镁的含量。第71页第71页 酶激活剂法在检测无机离子时与其他传统测定方法相比具有酶激活剂法在检测无机离子时与其他传统测定方法相比具有较为明显的优势和更为广阔的应用前景，它具有

60、酶法常有的优点较为明显的优势和更为广阔的应用前景，它具有酶法常有的优点且抗干扰能力较强；且抗干扰能力较强；酶激活剂法测定无机离子酶激活剂法测定无机离子性能评价性能评价测定钾离子需要注意的是：当氨离子在有锰或镁离子存在时对测定钾离子需要注意的是：当氨离子在有锰或镁离子存在时对PKPK有显著的激活作用，故需用有显著的激活作用，故需用GDHGDH消除消除NHNH4 4的干扰；的干扰；淀粉酶法测定氯离子时所需底物分子量小、用量少和不需加用淀粉酶法测定氯离子时所需底物分子量小、用量少和不需加用辅助酶，测定成本相对较低，同时其线性范围较宽，特异性与稳辅助酶，测定成本相对较低，同时其线性范围较宽，特异性与稳