Eppendorfplus移液枪校准方法要点

1、Eppendorf plus 移液枪校准方法1、准备超纯水、万分之一天平（如果校正0.52.5ul 量程的，至少要十万分之一的天平）、温湿度计、恒温室，还需准备一个小口容器，防止水分挥发。2、按移液器总量程的100% 、 50% 、 10% 分别进行第三和第四步。3、吸头要反复吸取超纯水三次后，吸取固定容积的超纯水，推入放置在天平上的小口容器中，待数据稳定读取天平数值，同时记录温度。重复10 次。4、将测量的数据用iso8655 中的计算公式计算获得对应温度下的体积，取平均值。5、根据三个测量点的偏差，用移液器专用的校正扳手通过移液器的校正窗进行调整。6、重复3、 4 步，直至偏差在ISO86

2、55 的要求内为止。ISO 8655-1-2002 活塞式容量测量仪器.第1 部分 :术语、一般要求和用户使用建议ISO 8655-2-2002 活塞式容量测量仪器. 第 2 部分 : 活塞式吸量管ISO 8655-6-2002 活塞式容量测量仪器. 第 6 部分 : 确定测量误差的重量分析法 三、校准方法及步骤操作环境：温度应控制在15-30 ，恒定在±0.5，相对湿度50%-80% ，要保持较高的空气湿度以减少水分蒸发对结果造成的影响。建议使用防蒸发装置。测试应在独立无通风的房间内进行，并配备温度和湿度显示。所需设备：1 、分析天平一台。确保室内空气流动平缓，应避免天平正对空调出

3、风口。根据所测试的移液器的容量来选择适合的天平：移液器容量范围天平可读性天平的重复性和线性测量不准确度1 l10 l0.001mg0.002mg 0.002mg10100 l0.01mg0.02mg 0.02mg>100 l0.1mg0.2mg 0.2mg2、纯水、三蒸水或去离子水，需达到ISO 3696 三级水的标准。3、独立工作间，配备防震、防尘、远离热源、无阳光直射的操作台。4、温度计、湿度计。校准操作：为确保校准的准确性，采用三点移液十次，具体步骤如下：1 、同温处理，将移液器、吸头、天平、测试用水、操作台等校准用具放置在同一工作间内，至少四小时。2、在正式操作前，先预洗吸头，吸

4、排测试用水5 次。3、用最大体积、50%最大体积和最小体积（或10%最大体积），各移液10 次，记录每次移液的质量。4、计算每组数据的平均值，代入计算公式，计算出不准确度与不精确度。5、对比可允许的最大误差限度，根据实际需要确定进行调整。附：相关计算公式质量体积转换公式 1 ： V=（w+e） × Z式中： V= 体积（l）w= 质量（ mg ）e= 蒸发损失（mg ）Z 转换因子以上公式参考ISO 8655 标准。蒸发损失对测量小体积液体影响较大，因此应将蒸发损失计算在内。方法：在称过重的容器中注入定量清水，按下秒表观察30 秒，读出损失量，然后算出每秒的损失量。（若30s 内质量

5、损失3mg ，则损失量为3mg ÷30s=0.1mg/s ）。记录移液时间，将移液时间乘以每秒损失量，算出实际蒸发损失量，代入上述公式计算实际体积。若使用防蒸发装置，通常可以忽略蒸发损失量。不同温度、压力下水的质量和体积不同，具体转换因子Z 值请查看附录1 。公式 2： V20 =m × K（t）式中：V20= 标准温度20下实际体积（l）m= 质量（ mg ）K（t） 值以上公式参考JJG 646-2006 移液器检定规程。根据天平测试蒸馏水的质量，以及检测时温度所对应的K（t） 值， 即可计算出标准温度下蒸馏水的实际体积。具体K（t）值请查看附表2。计算式时，请根据实际

6、需要，选择公式进行计算。不准确度（系统误差）不准确度是指实际移取体积和显示体积的差异。A=- V 0式中： A= 不准确度= 平均值V0 = 标称容量A%=100% × A/V 0不精确度（随机误差）不精确度指每次实际移取体积与实际体积平均值的差异，其变化是不可预计的测量误差的一部分。它可以表示为标准差S 或变异系数CV：式中：S = 标准偏差 = 平均值 n = 测量次数Vi = 单次测量数值CV=100% × S附表 1 ：转换因子Z（ l/mg） 数值表（无菌水）温度气压（KPa ）1KPa=10hPa（）80859095100101.310515.001.00171

7、.00181.00191.00191.00201.00201.002015.501.00181.00191.00191.00201.00201.00201.002116.001.00191.00201.00201.00211.00211.00211.002216.501.00201.00201.00211.00211.00221.00221.002217.001.00211.00211.00221.00221.00231.00231.002317.501.00221.00221.00231.00231.00241.00241.002418.001.00221.00231.00231.00241

8、.00251.00251.002518.501.00231.00241.00241.00251.00251.00261.002619.001.00241.00251.00251.00261.00261.00271.002719.501.00251.00261.00261.00271.00271.00281.002820.001.00261.00271.00271.00281.00281.00291.002920.501.00271.00281.00281.00291.00291.00301.003021.001.00281.00291.00291.00301.00311.00311.00312

9、1.501.00301.00301.00311.00311.00321.00321.003222.001.00311.00311.00321.00321.00331.00331.003322.501.00321.00321.00331.00331.00341.00341.003423.001.00331.00331.00341.00341.00351.00351.003623.501.00341.00351.00351.00361.00361.00361.003724.001.00351.00361.00361.00371.00371.00381.003824.501.00371.00371.

10、00381.00381.00391.00391.003925.001.00381.00381.00391.00391.00401.00401.004025.501.00391.00401.00401.00411.00411.00411.004226.001.00401.00411.00411.00421.00421.00431.004326.501.00421.00421.00431.00431.00441.00441.004427.001.00431.00441.00441.00451.00451.00451.004627.501.00451.00451.00461.00461.00471.

11、00471.004728.001.00461.00461.00471.00471.00481.00481.004828.501.00471.00481.00481.00491.00491.00501.005029.001.00491.00491.00501.00501.00511.00511.005129.501.00501.00511.00511.00521.00521.00521.005330.001.00521.00521.00531.00531.00541.00541.0054附表 2： K( t)值表( =0.00045/ )水温K(t)水温K(t)水温K(t)cm 3/gcm 3/

12、gcm 3/g15.01.00421318.41.00326121.81.00243615.11.00418318.51.00323521.91.00241415.21.00415318.61.00320922.01.00239115.31.00412318.71.00318422.11.00236915.41.00409418.81.00315822.21.00234715.51.00406418.91.00313222.31.00232515.61.00403519.01.00310722.41.00230315.71.00400619.11.00308222.51.00228115.81

13、.00397719.21.00305622.61.00225915.91.00394819.31.00303122.71.00223816.01.00391919.41.00300622.81.00221616.11.00389019.51.00298122.91.00219516.21.00386219.61.00295623.01.00217316.31.00383319.71.00293123.11.00215216.41.00380519.81.00290723.21.00213116.51.00377719.91.00288223.31.00211016.61.00374920.01

14、.00285823.41.00208916.71.00372120.11.00283423.51.00206816.81.00369320.21.00280923.61.00204716.91.00366520.31.00278523.71.00202617.01.00363720.41.00276123.81.00200617.11.00361020.51.00273723.91.00198517.21.00358220.61.00271424.01.00196517.31.00355520.71.00269024.11.00194517.41.00352820.81.00266624.21

15、.00192417.51.00350120.91.00264324.31.00190417.61.00347421.01.00261924.41.00188417.71.00344721.11.00259624.51.00186417.81.00342021.21.00257324.61.00184517.91.00339321.31.00255024.71.00182518.01.00336721.41.00252724.81.00180518.11.00334021.51.00250424.91.00178618.21.00331421.61.00248125.01.00176618.31

16、.00328821.71.002459附表 3：移液器容量允许误差和测量重复性简表JJG-646ISO 8655检定点系统误差 （容量允差）随机误差 （重复性）标称容量系统误差 （容量允差）随机误差 （重复性）l±（% ）（%）l±（%）（% ）0.120.010.00.220.010.00.520.010.0112.06.015.05.0212.06.024.02.058.04.052.51.5108.04.0101.20.8204.02.0201.00.5254.02.0403.01.5503.01.5501.00.41002.01.01000.80.31252.01.

17、01502.01.02001.51.02000.80.32501.51.03001.51.05001.00.55000.80.310001.00.510000.80.312501.00.520000.80.325000.50.250000.60.250000.80.3100000.60.2100000.60.3注：标称容量为制造商在移液器上标注的可使用的最大容量，如量程范围是50-1200 l，其标称容量为1200 l。 JJG-646 中，同一个检定点在不同的量程范围，容量允差、重复性要求一致，即无论是1-10 l 的移液器还是10-100 l 的移液器，10l 这一检定点容量允差都为 8%

18、 ，重复性都为4% 。 ISO 8655 中，所有有效量程点的容量允差、重复性都与标称容量的一致，即10-100 l 的移液器，10l、 20l、 50l、 100l，其容量允差要求都为0.8%，重复性都为0.3% 。四、维护保养1 清洁和消毒为确保移液器的准确度和精确度，应根据具体使用情况进行定期保养。尤其在移取腐蚀性溶剂后，应该对移液器进行清洁。通过简单的清洁和保养，可适当地延长移液器的使用寿命。注意：在清洁或消毒前，请务必将电池取出。 外部清洗方法：根据使用情况，可以用沾有70% 乙醇或60 异丙醇的湿棉布拭擦移液器表面，去除外部污垢，再用双蒸水拭擦一遍，然后晾干。每天开始工作前，检查移

19、液器外表是否有灰尘或污垢，尤其是吸头连杆部分。 内部清洗清洁步骤：1 、按照步骤拆卸需要清洁的部件。2、外套柄、吸头连杆用沾有70% 乙醇或 60 异丙醇的湿棉布拭擦，再用双蒸水淋洗，然后晾干。3、一般情况，O 型圈、活塞无需清洁。如沾有固体颗状物，请用干净的干棉布轻轻拭去即可。4、给O 型圈、活塞上润滑脂，只需涂上薄薄一层即可。5、按步骤组装好移液器。 消毒移液器清洁干净后，在121 ,1bar 下，消毒20 分钟。消毒后在室温下冷却至少 2 个小时后方可使用。部分手动移液器可整支消毒，电动移液器只可以下端消毒，请根据产品的具体情况进行消毒。整支在紫外线下进行消毒灭菌，无需拆卸。2 日常维护

20、 针对不同性质的液体，有不同的清洗和保养方法，见下表：处理液体预防方法清洗和保养方法水溶液和缓冲液拆卸移液器下端，用双蒸水冲洗受污染的部件，在60 以下干燥或者自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂无机酸或碱= 使用带有滤芯的吸头移液结束后，将移液器下端拆下，并放在通风处。必要时可用双蒸水冲洗受污染的部件，在 60 以下干燥或者自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂传染性 液体= 使用带有滤芯的吸头= 正向移液将移液器下端拆下，放在实验室常规的消毒剂中浸泡30分钟，随后用双蒸水清洗，对受污染的部件进行121 、1bar 、 20 分钟高压灭菌细胞培 养物= 使用带有滤芯的吸头将移液器下端拆下，放在实验室常

21、规的消毒剂中浸泡30分钟，随后用双蒸水清洗，对受污染的部件进行121 、1bar 、 20 分钟高压灭菌有机溶剂= 快速移液移液结束后，将移液器下端拆下，并放在通风处。必要时可用双蒸水冲洗受污染的部件，在 60 以下干燥或者自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂放射性 溶液= 使用带有滤芯的吸头= 正向移液将移液器下端拆下，将受污染部件放在复合溶液或专用的清洁溶液中浸泡30 分钟后，用双蒸水清洗，在60 下烘干或自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂核酸或蛋白质溶液= 使用带有滤芯的吸头= 正向移液核酸：在氨基乙酸或盐酸缓冲液(pH2.0) 中煮沸10 分钟，用双蒸水清洗干净，在60 下烘干或自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂蛋白质：将移液器下端拆下，用去污剂清洗，再用双蒸水淋洗，在60 下烘干或自然晾干故障排除现象原因解决方法活塞运动异常= 活塞安装过紧= 活塞润滑不充分= 活塞表面润滑脂凝固= 活塞表面有异物或损坏= 在活塞、O 型圈和吸头连杆之间有杂质和颗粒=O 型圈损坏拆开下端，重新组装给活塞上润滑脂清除旧润滑脂，上新润滑脂清洁活塞或更换活塞清洁并润滑 O 型圈和吸头连杆更换 O 型圈移液体积不准确 或漏液= 吸头安装不当= 吸头不匹配= 在吸头与吸头连杆之间有杂质颗粒= 吸头损坏= 移液过快= 吸头离开液面过快= 活塞表面有异物或损坏