几种不同DNA聚合酶比较

1、合理选择耐热 DNA 聚合酶是 PCR 成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行 PCR 实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热 DNA 聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。TaqDNA 聚合酶存在于水生嗜热菌（Thermusaquaticus）的嗜热 DNA 聚合酶，可在 74C复制 DNA，在 95C仍具有酶活力。该酶可在离体条件下，以 DNA 为模板，延伸引物，合成双链 DNA。这个酶只有 53DNA聚合酶活性和 5宀 3的外切酶活性，缺少 3宀 5的外切酶活性，即具有 5-3DNA 聚合酶活性和对双链

2、DNA 特异的 5-3外切核酸酶活性，无 3-5外切酶活性。使用该产品扩增得到的 PCR 产物的 3末端附有一个“A”碱基，可直接用于TA 克隆。由于不具有 3-5外切酶活性，因而在合成中对某些单核苷酸错配没有校正功能。TaqDNA 聚合酶还具有非模板依赖性活性，可将 PCR 双链产物的每一条链 3加入单核苷酸尾，故可使 PCR 产物具有 3突出的单 A 核苷酸尾；另一方面，在仅有 dTTP 存在时，它可将平端的质粒的 3端加入单 T 核苷酸尾，产生 3端突出的单 T 核苷酸尾。应用这一特性，可实现 PCR 产物的 T-A 克隆法。适用于：普通 PCR，TA 克隆SuperTaqDNA 聚合酶

3、SuperTaqDNA 聚合酶是由耐热的 TaqDNA 聚合酶和具有 3-5外切酶活性的高保真 DNA 聚合酶按照最合适的比例混合而成，具有扩增效率高和错配率低的优良性能，使用该产品扩增得到的 PCR 产物的 3末端附有一个“A”碱基，可直接用于 TA 克隆。适用于：要求效率高保真性好的 PCR 反应。UlltraPF?DNA 聚合酶UlltraPF?DNAPolymerase 是一种耐热的超保真 DNA 聚合酶，具有 5-3聚合酶活性和 3-5外切酶活性，具有比 PfuDNAPolymerase 更好的保真性能和更快的扩增效率。使用该产品扩增得到的 PCR产物为平滑末端，可直接克隆于平滑末端

4、载体中。LATaqDNA 聚合酶LATaqDNApolymerase 是一种具有 5-3DNA 聚合酶活性和 3-5校对活性的聚合酶，可用于扩增较长的富含 GC 的片段。作为具有 3-5校对活性的且热稳定性最强的 DNA 聚合酶之一，该酶可在最佳温度（75C）催化 DNA 合成，且错配率低（准确率约是标准TaqDNApolymerase 的 10 倍）。该酶可扩增人基因组 DNA 长达 17.5kb 的片段和入 DNA 长达 20kb 的片段。在较长的 PCR 扩增中应用 LAproTaqDNApolymerase 可减少拖尾效应，实际上减少背景影响。LATaqDNApolymerase 扩增

5、产物带有 A 尾可用于 T-A 克隆。LATaqDNA 聚合酶的应用：LATaqDNApolymerase 可应用于许多方面：扩增人基因组中长达 20kb 的片段；高忠实度扩增；比普通 Taq 聚合酶更稳定；T-A 克隆；定点突变；片段分析。TthDNA 聚合酶TthDNA 聚合酶是一种热稳定性酶，分子量为 92kDa，从 ThermusthermophilusHB-8 中分离。该酶在 74C时可进行 DNA 复制，在 95C的半衰期为 20 分钟。TthDNA 聚合酶在镁离子存在的条件下可催化核苷酸沿 53方向发生聚合反应，形成双链 DNA,也可在镁离子存在的条件下，以 RNA 为模板沿 5

6、3方向发生核苷酸聚合反应。该酶也具有 53外切酶活力。TthDNA 聚合酶可用于 PCR、RT-PCR、逆转录和较高温度条件下的引物延伸反应。产品特点：1、RT-PCR 反应的特异性增加：在较高的温度下进行逆转录，增加了引物杂交和延伸的特异性2、二级结构减少：在较高的温度下进行逆转录，减少了由于 RNA 二级结构引起的问题3、当加入 Mg2+后，该酶的聚合活性大大增加，从而使 cDNA 合成与扩增可用一种酶催化。生产公司：美国 promage 公司PfuDNA 聚合酶该酶在 75C时可进行 DNA 复制，PfuDNA 聚合酶在镁存在的条件下可催化核苷酸沿 5t3方向发生聚合反应，形成双链 DN

7、A,PfuDNA 聚合酶具有 3宀 5外切酶校正活性。当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。在所有热稳定性聚合酶中 PfuDNA 聚合酶的错误几率最低，错误率约为 1X10-6/每碱基对，缺点是 PCR 扩增灵敏度较 Taq 低。建议 PfuDNA 聚合酶用于要求保真度比较高的 PCR 反应，引物的延伸反应以及其它的一些应用，包括克隆、DNA 表达、突变分析等。PfuDNA 聚合酶产生的 PCR 产物为平端，无末端磷酸化。若要进行“T-A”克隆，可在 PCR 反应完了之后，加入 TaqDNA 聚合酶，于 72C反应 1-2 小时，以便在 DNA3端附加一个“A”。Gen

8、StarPfuDNAPolymerase 是将克隆有 Pyrococcusfuriosis 的 DNA 聚合酶基因在大肠杆菌中重组表达，经多次柱层析纯化而获得的高纯度、高效率耐热 DNA 聚合酶。该酶具有5t3DNA 聚合酶活性和3t5的外切酶活性（即校读活性），能够纠正 DNA 扩增过程中产生的碱基错配现象，适用于对保真性要求较高的 DNA 片段的扩增，如基因克隆、定点突变、SNP 分析等，也可用于 DNA 片段的末端补平。本产品扩增得到的 PCR 产物无 3端突出碱基，不可直接用于 T 载体克隆。用途：基因克隆、测序；定点突变。特点：高保真性：高纯度的酶带来优于其它品牌的保真性。VentR

9、DNA 聚合酶该酶是从 Litoralis 栖热球菌中分离出的，不具有 5-3外切酶活性，但具有 3-5外切酶活性，可以去除错配的碱基，具有校对功能。生产公司：美国 NEB 公司PhusionDNA 聚合酶特的 Phusion?DNA 聚合酶是 Finnzymes 公司的拳头产品，其合成准确率和合成速度无与伦比。PhusionDNA 聚合酶的独特的分子结构和特性使其成为基因克隆的最佳选择，为PCR 扩增树立了新的标准。PhusionDNA 聚合酶（以及 PhusionHotStartDNA 聚合酶）的出错率是 4.4x10-7，比 TaqDNA 聚合酶低 50 倍、比 Pfu 酶低 6 倍，是

10、目前市场上准确性最高的 DNA 聚合酶；此外其扩增速率比 Pfu 快 10 倍，比 Taq 酶快 2 倍。PhusionDNA 聚合酶的应用：高保真 PCR:扩增错误率只有 4.4x10-7，是目前保真性最好的 DNA 聚合酶克隆：PhusionDNA 扩增保真性最好，基因克隆的最佳选择长片段扩增：最高的核苷酸渗入率，在短时间内可以扩增更长的 DNA片段DHPLC 分析芯片分析生产公司：Finnzymes 公司KODDNA 聚合酶1、最适合于克隆反应，具备超群的准确性KODDNA 多聚酶的特点是具有很高水准的准确性，而 KODPlus 的准确性则有了更大的提高，具有 TaqDNA 多聚酶 82

11、 倍左右的 PCR 可信度，最适合于克隆。2、通过热启动 PCR，提高了 PCR 的性能。通过采用两种抗 kod 单克隆抗体，抑制了 PCR 反应前常温状态下的多聚酶活性和3t5核酸外切酶活性。不需其他特殊操作即可进行热启动 PCR。抗体的阻断作用在 94C、2分钟预热下即发生失活，不需要冗长的变性步骤，实现了高特异性的 PCR 反应。3、伸长性、扩增效果的提高对 PCR 反应缓冲液的组成进行了最优化重组，使之较以往的 KODDNA 多聚酶相比伸长性及扩增效果均有所提高，可对更多种类的目标物进行 PCR 反应。4、超群的耐热性因来源于超嗜热原始菌，其耐热性比 TaqDNA 多聚酶还要高，在 1

12、00C、1 小时的热处理候仍可保持约 70%的活性。故可以将热变性步骤的温度设定提高，对 gc 含量高的模板等具有特异性高级结构的样品非常有利。用途因准确性高，特别适用于 pcr 产物的克隆。另外，由于通过抗体法实现热启动反应，所以能够轻松简便地实施高特异性的 pcr 反应。伸长性、扩增效率也很高，可以进行更多种类目标物的 pcr 反应。生产公司：toyobo 公司最高扩增性能的 PCR 酶-KOD-FX-货号：KFX-101 规格：200U 优势:长片断扩增效率,（入 DNA40kb,基因组 DNA24kb,cDNA13.5kb）高扩增效率，（1ng 的模板量即可扩增）对高 GC 含量的模版也有很高扩增效率（70%以上 GC 含量也能扩增）KOD-PLUS-KOD-Plus-ver2.0 货号：KOD-211 规格：200U优势:世界最高水平保真度的 PCR 酶，是 Taq 酶的可信度的82倍，pfu 酶的 7 倍.用途:特别适合 PCR产物的克隆；进行热启动 PCR,实现高特异反应。高效率高速度 PCR 酶-KODDash 货号：LDP-101 规格：250U优势:世界合成速度最快的 PCR 酶，是 Taq 酶的2倍,pfu 酶的 6 倍。用途:长距离 PCR/菌落直接法PCR/