溶血实验和有机磷中毒

1、第八次实验第八次实验红细胞渗透性和化学性溶血实验红细胞渗透性和化学性溶血实验 有机磷酸酯类中毒及其抢救有机磷酸酯类中毒及其抢救溶血实验溶血实验红细胞渗透脆性：红细胞渗透脆性： 红细胞在低渗溶液中可发生破裂、解体的特性。红细胞在低渗溶液中可发生破裂、解体的特性。红细胞渗透抵抗力：红细胞渗透抵抗力： 红细胞耐受一定浓度的低渗溶液而不发生破裂、红细胞耐受一定浓度的低渗溶液而不发生破裂、 解体的能力。解体的能力。最小抵抗力（最小抵抗力（RBCRBC渗透脆性）渗透脆性） ： 开始出现溶血的溶液浓度。开始出现溶血的溶液浓度。最大抵抗力：最大抵抗力：完全溶血的溶液浓度。完全溶血的溶液浓度。实验原理红细胞的化

2、学性溶血：红细胞的化学性溶血： 有机溶剂、酸、碱破坏红细胞膜的有机溶剂、酸、碱破坏红细胞膜的疏水键和膜蛋白上的次级键，溶解膜脂疏水键和膜蛋白上的次级键，溶解膜脂质，使膜蛋白质变性，造成红细胞溶解。质，使膜蛋白质变性，造成红细胞溶解。1.1.制备红细胞悬液制备红细胞悬液 取抗凝动脉血取抗凝动脉血2ml2ml 混匀离心弃上清夜混匀离心弃上清夜 （配平、对称放置、（配平、对称放置、5min5min、1500r/min1500r/min） 加加NSNS洗涤洗涤2 2次（离心弃上清夜）次（离心弃上清夜） NSNS配成配成30%30%和和3%3%红细胞悬液红细胞悬液 实验步骤2.2.渗透性溶血试验渗透性溶

3、血试验 标记标记1-101-10号试管号试管 依次加入不同浓度的依次加入不同浓度的NaClNaCl溶液溶液 滴入滴入30%30%混悬液混悬液1-21-2滴，轻轻混匀滴，轻轻混匀 静置静置30min30min后判断各试管溶血现象后判断各试管溶血现象3.3.化学性溶血试验化学性溶血试验 标记标记11-1411-14号试管号试管 依次加入不同试剂依次加入不同试剂1ml1ml 11-NS 12- 11-NS 12-氯仿氯仿 13-HCl 14-NaOH13-HCl 14-NaOH 滴入滴入3%3%混悬液混悬液2ml2ml，轻轻混匀，轻轻混匀 静置静置30min30min后判断各试管溶血现象后判断各试管

4、溶血现象4.4.结果判断结果判断不溶血：不溶血：上层浅黄色或白色透明上层浅黄色或白色透明 下层红色不透明下层红色不透明部分溶血：部分溶血：上层红色透明上层红色透明 下层红色不透明下层红色不透明完全溶血：完全溶血：管内液体完全红色透明管内液体完全红色透明不溶血部分溶血完全溶血1.1.完成表完成表6 61010、11112.2.分析各处理因素对红细胞膜的影响及其分析各处理因素对红细胞膜的影响及其 原理，写出实验报告。原理，写出实验报告。实验后处理实验后处理1. 1.红细胞渗透脆性实验为定量指标，氯化钠红细胞渗透脆性实验为定量指标，氯化钠浓度的配制要求准确。浓度的配制要求准确。2. 2.向试管中滴加

5、红细胞混悬液时要靠近液面，向试管中滴加红细胞混悬液时要靠近液面，轻轻滴入，以免冲击力太大使红细胞破损，轻轻滴入，以免冲击力太大使红细胞破损，造成溶血假象。造成溶血假象。3. 3.滴加红细胞混悬液后要轻轻摇匀，切勿剧滴加红细胞混悬液后要轻轻摇匀，切勿剧烈震荡。静置一段时间后在光线明亮处观烈震荡。静置一段时间后在光线明亮处观察。察。注意事项注意事项有机磷中毒有机磷中毒中毒的原理和症状中毒的原理和症状中毒的原理中毒的原理: :外周作用（外周作用（M、N样作用）样作用）中枢作用（先兴奋后抑制）中枢作用（先兴奋后抑制）有机磷酸酯类为难逆性抗胆碱酯酶药有机磷酸酯类为难逆性抗胆碱酯酶药中毒的症状中毒的症状:

6、 :实验原理解毒药作用原理解毒药作用原理 阿托品阿托品: :小剂量阻断小剂量阻断M受体，大剂量阻断受体，大剂量阻断N1受体，受体，可兴奋呼吸中枢可兴奋呼吸中枢碘解磷定碘解磷定: :复活胆碱酯酶复活胆碱酯酶 与游离的有机磷酸酯类结合与游离的有机磷酸酯类结合1.1.家兔，称重，观察并记录其正常体症家兔，称重，观察并记录其正常体症（R R、 瞳孔大小、唾液分泌、肌张力、肌震颤等）。瞳孔大小、唾液分泌、肌张力、肌震颤等）。2.2.造模：耳缘静脉注射造模：耳缘静脉注射3.5%3.5%敌百虫敌百虫(3ml/kg)(3ml/kg)，观察并，观察并 记录各种指标的变化。记录各种指标的变化。3.1.3.53.1

7、.3.5排先静脉注射排先静脉注射阿托品阿托品(1ml/kg)(1ml/kg) ，记录各指标的，记录各指标的变化；变化；10min10min后再静脉注射后再静脉注射碘解磷定碘解磷定(2ml/kg)(2ml/kg) ，记录各，记录各指标的变化。指标的变化。4.2.4.64.2.4.6排给药相反。排给药相反。实验步骤观察指标观察指标瞳孔大小：尺测量其直径（瞳孔大小：尺测量其直径（mmmm）唾液分泌：唾液分泌：- -（无）（无） 、+ +（少）、（少）、+（较多）、（较多）、 +（很多）（很多）大小便：大小便： 同上同上骨骼肌活动：骨骼肌活动：- -（无）（无） 、+ +（局部）、（局部）、+（全身）

8、（全身） +（全身并站立不稳或瘫卧桌上）（全身并站立不稳或瘫卧桌上）1.1.完成表完成表7-97-9。2.2.比较不同给药顺序解救效果的差异，比较不同给药顺序解救效果的差异， 分析原因，写出实验报告。分析原因，写出实验报告。实验后处理实验后处理1.测量瞳孔时应注意光线强弱对瞳孔大小的影响。测量瞳孔时应注意光线强弱对瞳孔大小的影响。实验前后光源的一致性。实验前后光源的一致性。2.敌百虫溶液有较强的刺激性，静脉注射时要避免敌百虫溶液有较强的刺激性，静脉注射时要避免药物外漏。药物外漏。3.事先准备好抢救工作，中毒症状明显后立即解救。事先准备好抢救工作，中毒症状明显后立即解救。注意事项注意事项小结红细

9、胞脆性增加：遗传性球形红细胞增多症，自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多者。 红细胞脆性减低：见于各型海洋性贫血，包括轻型，重型海洋性贫血及血红蛋白增多病。缺铁性贫血，镰状红细胞贫血以及其它红细胞面积/体积比例增大情况，如肝病等。 机体胆碱能神经纤维及其受体分布机体胆碱能神经纤维及其受体分布1.1.全部交感神经和副交感神经的节前纤维全部交感神经和副交感神经的节前纤维（N1-R）2.2.运动神经运动神经（N2-R）3.3.全部副交感神经的节后纤维全部副交感神经的节后纤维（M-R）4.4.极少数交感神经节后纤维极少数交感神经节后纤维（M-R）体内乙酰胆碱体内乙酰胆碱(Ach)(Ach)神经递质的生

10、理作用神经递质的生理作用M M样作用：样作用： 心率心率减慢减慢，血压，血压下降下降 支气管、胃肠道平滑肌支气管、胃肠道平滑肌收缩收缩 瞳孔括约肌、睫状肌收缩瞳孔括约肌、睫状肌收缩（瞳孔缩小）（瞳孔缩小） 腺体分泌腺体分泌增加增加N N样作用：样作用： 神经节兴奋神经节兴奋 肾上腺髓质分泌肾上腺髓质分泌增加增加 骨骼肌兴奋骨骼肌兴奋( (收缩收缩) )AchAch作用的消失作用的消失AchAch胆碱胆碱 + + 乙酸乙酸胆碱酯酶胆碱酯酶有机磷有机磷磷酸胆碱酯酶磷酸胆碱酯酶M M样症状样症状： HRHR、BPBP 恶心、呕吐、腹痛、腹泻恶心、呕吐、腹痛、腹泻 瞳孔缩小瞳孔缩小 流涎、大汗淋漓流涎

11、、大汗淋漓 呼吸困难呼吸困难N N样症状样症状： 肌束颤动，重者呼吸肌麻痹肌束颤动，重者呼吸肌麻痹中枢症状中枢症状： 兴奋、不安、谵语等兴奋、不安、谵语等阿托品阿托品碘解磷定碘解磷定优点：能迅速消除优点：能迅速消除M样症状，也能解除一部分样症状，也能解除一部分 CNS中毒症状，大剂量还可阻断神经节作用中毒症状，大剂量还可阻断神经节作用解毒药效果比较解毒药效果比较 阿托品阿托品: : 缺点：对缺点：对N2受体无效，不能制止骨骼肌震颤，受体无效，不能制止骨骼肌震颤， 也无复活胆碱酯酶作用，疗效不易巩固。也无复活胆碱酯酶作用，疗效不易巩固。 优点：能迅速制止肌束颤动，对植物神经系统功能优点：能迅速制止肌束颤动，对植物神经系统功能 的恢复较差，对的恢复较差，对CNS中毒症状似有疗效中毒症状似有疗效碘解磷定碘解磷定: : 缺点：不能直接对抗体内积聚的缺点：不能直接对抗体内积聚的Ach作用，消除作用，消除 M样症状，不能单