药物04药物的含量测定方法与验证

1、LOGO药物分析药物分析Jiangxi University of Traditional Chinese Medicines第四章第四章 药物的含量测定方法药物的含量测定方法主讲主讲: 曾金祥曾金祥前言前言药物的含量测定药物的含量测定是指药物中所含的主成分的量，是指药物中所含的主成分的量，是评价药物质量的重要指标。是评价药物质量的重要指标。定定义义前言前言药物的含量测定药物的含量测定化学、物理学、生物学、化学、物理学、生物学、微生物学方法微生物学方法基基础础 在规定条件下选用适当微生物测定某物质含量的方法。被测定的物质可以是在规定条件下选用适当微生物测定某物质含量的方法。被测定的物质可以是某

2、些生物生长所必需的维生素、氨基酸等，也可以是抑制某些微生物生长的某些生物生长所必需的维生素、氨基酸等，也可以是抑制某些微生物生长的抗生素、农药等。常使用的有液体稀释法和固体平板扩散法。抗生素、农药等。常使用的有液体稀释法和固体平板扩散法。 利用某些生物对某些物质如维生利用某些生物对某些物质如维生素、氨基酸素、氨基酸)的特殊需要，或对的特殊需要，或对某些物质如激素、抗生素、药物某些物质如激素、抗生素、药物等等)的特殊反应来定性、定量测的特殊反应来定性、定量测定这些物质的方法。定这些物质的方法。 化学反应化学反应如如UV光吸收光吸收特性、浊度特性、浊度前言前言药物的含量测定药物的含量测定基于化学或

3、物理学基于化学或物理学原理的含量测定。原理的含量测定。分分两两类类基于生物学原理的基于生物学原理的效价测定效价测定。基基础础生物检定法，微生生物检定法，微生物检定法，酶法。物检定法，酶法。目目标标本章的目标：本章的目标：含量测定。含量测定。P40：效价测定方法：效价测定方法：凡凡以生物学方法或者酶学方以生物学方法或者酶学方法对药品中的特定成分以法对药品中的特定成分以标准品为对照，作标准品为对照，作量反应量反应平行线测定方法平行线测定方法进行的生进行的生物活性（活力）测定物活性（活力）测定量反应平行线测定方法：量反应平行线测定方法：同同时测定供试品和标准品的剂时测定供试品和标准品的剂量反应曲线，

4、且两条反应线量反应曲线，且两条反应线必须具有平行性，即供试品必须具有平行性，即供试品和标准品的活性只有量的区和标准品的活性只有量的区别，并无质的区别别，并无质的区别前言前言药物的含量测定药物的含量测定容量分容量分析法析法三种三种分析分析方法方法光谱分光谱分析法析法色谱分色谱分析法析法特点特点操作简单、结果操作简单、结果准确，耐用性高，准确，耐用性高，但专属性差但专属性差特点特点特点特点简便快速、灵敏简便快速、灵敏度高，有一定的度高，有一定的准确度，但专属准确度，但专属性稍差性稍差灵敏度与专属性灵敏度与专属性都高，有一定的都高，有一定的准确度，但结果准确度，但结果需要对照品需要对照品适用于准确度

5、与适用于准确度与精确度要求较高精确度要求较高的样品测定的样品测定适用于灵敏度要适用于灵敏度要求较高，样本量求较高，样本量较大的分析项目较大的分析项目适用于专属性和适用于专属性和灵敏度要求较高灵敏度要求较高的复杂样品的复杂样品第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点容量分析法容量分析法定义定义将已知浓度的滴定液（标准物质溶液），由滴定管滴加到被测药物的溶液中，将已知浓度的滴定液（标准物质溶液），由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全（直至滴定液与被测药物反应完全（通过适当的方法指示通过适当的方法指示），然后根据滴定液消），然后根据滴定液消耗的浓度和被消

6、耗的体积，按化学计量关系式计算出被测药物的含量。耗的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系式计算出被测药物的含量。亦称亦称滴定法滴定法通过指示剂颜色通过指示剂颜色变化，或者电子变化，或者电子设备的电位或电设备的电位或电流突变来指示滴流突变来指示滴定终点定终点滴定终点和计量滴定终点和计量点不一致，就会点不一致，就会引入滴定误差，引入滴定误差，应该尽量避免。应该尽量避免。特点特点适用适用范围范围1、方法简便易行：所用仪器价廉易得，操作简便快速、方法简便易行：所用仪器价廉易得，操作简便快速广泛应用于化学原料广泛应用于化学原料的测定，较少应用于的测定，较少应用于药物制剂的测定药物制剂的测定2、方法耐用性高

7、：影响测定的试验条件与环境因素少、方法耐用性高：影响测定的试验条件与环境因素少3、测定结果准确：误差低于、测定结果准确：误差低于0.2%，满足准确度高样品，满足准确度高样品4、方法专属性差：对相近杂质干扰缺少选择，适用于主、方法专属性差：对相近杂质干扰缺少选择，适用于主成分含量较高的样品分析成分含量较高的样品分析?第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点容量分析法有容量分析法有关计算关计算滴定度滴定度每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物质量。中国药典用毫克（mg）表示。例如例如用碘量法测定维生素用碘量法测定维生素C的含量的含量时，时，中国药典中国药典规定：每规定：每1

8、ml碘滴定液（碘滴定液（0.05mol/L）相当于相当于8.806mg的维生素的维生素C（C2H8O6）第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点dDcCbBaA被测药物被测药物 滴定液滴定液容量分析法有容量分析法有关计算关计算滴定度计算滴定度计算用用B来来滴定滴定AWAWBaMAbMB=滴定液反应的质量滴定液反应的质量被测药物反应的质量被测药物反应的质量被测药物的摩尔质量被测药物的摩尔质量滴定液的摩尔质量滴定液的摩尔质量第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点ABABBAMbanMbMWWABBMbaVm容量分析法有容量分析法有关计算关计算滴定度计算

9、滴定度计算用用B来来滴定滴定A滴定液滴定液待测液待测液等于等于1ml浓度乘体浓度乘体积积=nB计算有一个从计算有一个从质质量量到到物质的量物质的量，再到再到浓度浓度再到再到滴滴定度定度的转变过程的转变过程浓度浓度mB示例一 计算Vc的滴定度T碘量法测定Vc含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/LHI2OHCIOHC6662686Mbam)ml/mg(TT =mbaM=0.0511176.13=8.806(mg/ml)Mb=0.05mol/L11MA=176.13示例二 异烟肼的滴定度溴酸钾法测定异烟肼含量M(C6H7N3O)=137.14，C溴酸钾溴酸钾=0.016

10、67mol/LOH3KBr2N3NOHC3KBrO2ONHC3222563376Mbam)ml/mg(TT =mbaM=0.0166732137.14=3.429(mg/ml)ab%100(%)WTV含量含量计算方法直接滴定法直接滴定法间接滴定法间接滴定法直接滴定法直接滴定法在实际工作中，滴定液的浓度可能与药典规定的浓度并不一致，所以应该进行校正在实际工作中，滴定液的浓度可能与药典规定的浓度并不一致，所以应该进行校正规定摩尔浓度实际摩尔浓度F规定摩尔浓度实际摩尔浓度F%100(%)WFTV含量直接滴定法的直接滴定法的含量计算方法含量计算方法直接读取直接读取药典规定药典规定自己标定自己标定取样量

11、取样量间接滴定法间接滴定法不直接对待测物进行滴定，不直接对待测物进行滴定，而采用间接途径滴定而采用间接途径滴定生成物滴定法生成物滴定法剩余量滴定法剩余量滴定法被测药物与化合物被测药物与化合物A作用生作用生成成 化合物化合物B，再用滴定液，再用滴定液滴定化合物滴定化合物B也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液A与药物作用，再用滴定液与药物作用，再用滴定液B与剩余的滴与剩余的滴定液定液A反应，然后再进行含量计算反应，然后再进行含量计算%100(%)WFTV含量间接滴定法的间接滴定法的生成物滴定法生成物滴定法注意滴定度注意滴定度T的计算的计算Mbam)ml/mg(T

12、先计算先计算T再计算含量再计算含量请看下例请看下例正确求正确求a和和b示例三 葡萄糖酸锑钠的含量测定0.3g供试品供试品水水100ml盐酸盐酸15ml碘化钾试液碘化钾试液10ml密塞，振摇后暗处放置密塞，振摇后暗处放置10min碘量法碘量法2642322235OSI2OS2IISbI2SbSb5+2S2O32-本法先用葡萄糖酸锑钠与碘离子反应生成碘，再用碘与硫代硫酸钠反应生成碘离子，相当于本法先用葡萄糖酸锑钠与碘离子反应生成碘，再用碘与硫代硫酸钠反应生成碘离子，相当于是用硫代硫酸钠在滴定葡萄糖酸锑钠，因此要找出它们两者的量反应关系，也就是是用硫代硫酸钠在滴定葡萄糖酸锑钠，因此要找出它们两者的量

13、反应关系，也就是a和和b滴定度滴定度T的计的计算示例如下算示例如下%100(%)WFTV含量间接滴定法的间接滴定法的生成物滴定法生成物滴定法注意滴定度注意滴定度T的计算的计算)/(088. 676.121211 . 0)/(mlmgMbammlmgT请读取请读取请校正请校正%100)(%)WTFVFVABBAA含量间接滴定法的间接滴定法的剩余量滴定法剩余量滴定法也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液A与药物作用，再用滴定液与药物作用，再用滴定液B与剩余的滴与剩余的滴定液定液A反应，然后再进行含量计算反应，然后再进行含量计算计算的关键在于求出滴定液计算的关键在于

14、求出滴定液A应用于药物反应的实际量应用于药物反应的实际量间接滴定法的间接滴定法的剩余量滴定法剩余量滴定法也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液A与药物作用，再用滴定液与药物作用，再用滴定液B与剩余的滴与剩余的滴定液定液A反应，然后再进行含量计算反应，然后再进行含量计算计算的关键在于求出滴定液计算的关键在于求出滴定液A应用于药物反应的实际量应用于药物反应的实际量常涉及化学反应、加热、分取等操常涉及化学反应、加热、分取等操作等步骤，使测定误差显著增加作等步骤，使测定误差显著增加空白试验校正空白试验校正没有药物存在时的滴定，方没有药物存在时的滴定，方法步骤与有药物存

15、在时相同法步骤与有药物存在时相同计算公式相应计算公式相应修正如下：修正如下：%100)(%)0WTFVVABSBB含量间接滴定法的间接滴定法的剩余量滴定法剩余量滴定法也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液A与药物作用，再用滴定液与药物作用，再用滴定液B与剩余的滴与剩余的滴定液定液A反应，然后再进行含量计算反应，然后再进行含量计算计算的关键在于求出滴定液计算的关键在于求出滴定液A应用于药物反应的实际量应用于药物反应的实际量常涉及化学反应、加热、分取等操常涉及化学反应、加热、分取等操作等步骤，使测定误差显著增加作等步骤，使测定误差显著增加没有药物存在时，滴定液没有

16、药物存在时，滴定液A全部与滴定液全部与滴定液B反应反应药物存在时，剩余滴定液药物存在时，剩余滴定液A全部与滴定液全部与滴定液B反应反应浓度校正作用浓度校正作用Example as follows示例四 司可巴比妥钠的含量测定 取本品约取本品约0.1g，精密称定精密称定，置，置250ml碘瓶中，加水碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，振摇使溶解，精密加溴滴定液精密加溴滴定液( (0.05mol/L) ) 25ml，再加盐酸，再加盐酸5ml，立即密塞，并振摇，立即密塞，并振摇1min，在暗，在暗处放置处放置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀

17、后，用立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠硫代硫酸钠滴定液滴定液( (0.1mol/L) )滴定，至终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消滴定，至终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定得的结果用空白试验校正。失，并将滴定得的结果用空白试验校正。本法用溴与司可巴比妥钠反应，再用硫代硫酸钠反滴定溴，属反滴定法，本法用溴与司可巴比妥钠反应，再用硫代硫酸钠反滴定溴，属反滴定法，并用空白试验校正并用空白试验校正,滴定液滴定液A为溴，为溴，B为硫代硫酸钠，含量计算只需先求为硫代硫酸钠，含量计算只需先求溴滴定度，再求出硫代硫酸钠空白试验溴滴定度，再求出硫代硫酸钠空白试验V0体积与样品测定体积体积与样品

18、测定体积Vs示例四 司可巴比妥钠的含量测定已知：已知：司可巴比妥钠司可巴比妥钠M=260.23;司可巴比妥钠与溴反应摩尔司可巴比妥钠与溴反应摩尔=1:1； W=0.1022 g； 硫代硫酸钠浓度校正因子硫代硫酸钠浓度校正因子=1.038 ； 供试品滴定供试品滴定Vs=15.73ml ;空白试验滴定空白试验滴定V0 =23.21ml;)/(01.1327.2601105. 0)/(mlmgMbammlmgT%100)(%)0WTFVVABSBB含量Its very easy！%100)(%)0WTFVVABSBB含量Notice！本公式适本公式适用于空白用于空白校正情形校正情形%100)(%)W

19、TFVFVABBAA含量本公式适用于没有做空本公式适用于没有做空白校正情形白校正情形见上例见上例见下例见下例见见P146习题一 剩余碘量法测定异烟肼含量 异烟肼在弱碱性溶液中，加定量过量的碘滴定液异烟肼在弱碱性溶液中，加定量过量的碘滴定液(0.1mol/L)氧氧化，反应完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸钠滴定液化，反应完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定滴定( (以淀粉为指示剂以淀粉为指示剂) )。NCONHNH2+2I2+5NaHCO3COOH+N2+ 4NaI+ 5CO2+4H2OI2 + 2Na2S2O3+ 2NaINa2S4O6100WT)V-F(V%

20、(mg/ml)858. 614.134210.1T 12: 2322322222IOSNaOSNaIII2FI含量：异烟肼习题二 非那西丁含量测定 精密称取本品精密称取本品0.3630g加稀盐酸回流加稀盐酸回流1小时后，放冷，小时后，放冷，用亚硝酸钠液用亚硝酸钠液（0.1010mol/L）滴定，用去滴定，用去20.00ml。每每1ml1ml亚硝酸钠液亚硝酸钠液（0.1mol/L）相当于相当于17.92mg的的C10H13O2N，请计算非那西丁的含量。，请计算非那西丁的含量。%72.9910010003630.01 .01010.000.2092.17%非那西丁光谱分析法光谱分析法药典药典收载收

21、载紫外可见紫外可见分光度法分光度法原子吸收分原子吸收分光光度法光光度法红外分光红外分光度法度法荧光分析荧光分析法法火焰光度火焰光度法法本章本章讲叙讲叙紫外可见紫外可见分光度法分光度法荧光分析荧光分析法法紫外可见紫外可见分光度法分光度法基于物质对紫外区基于物质对紫外区(200400nm)和可见光区和可见光区(400760nm)的单色光辐的单色光辐射建立起来的光谱分析法射建立起来的光谱分析法朗伯朗伯-比比尔定律尔定律基基础础EclTA1lg%11)100/(cmEAmlgc紫外可见紫外可见分光度法分光度法方法特方法特点与适点与适用范围用范围1、简便易行：本法使用的仪器价格比较低廉，操作简单，易于普

22、及、简便易行：本法使用的仪器价格比较低廉，操作简单，易于普及2、灵敏度高：本法灵敏度可达、灵敏度高：本法灵敏度可达10-710-4g/ml，适用于低浓度试样分析，适用于低浓度试样分析3、准确度较高：本法误差在、准确度较高：本法误差在2%5%之间，适用于对测定结果的准确度之间，适用于对测定结果的准确度要求较高的样品要求较高的样品4、专属性较差：本法通常不受一般杂质的干扰，但对结构相近的有关、专属性较差：本法通常不受一般杂质的干扰，但对结构相近的有关物质缺乏选择性。物质缺乏选择性。本法比较少应用于本法比较少应用于原料药的含量测定，原料药的含量测定，可用于制剂的含量可用于制剂的含量测定，更多的应用测

23、定，更多的应用于生物制剂的定量于生物制剂的定量检查检查本法紫外区须选用本法紫外区须选用石英比色皿，比色石英比色皿，比色皿一般为皿一般为1cm，吸，吸光度在光度在0.30.7之之间为宜，选用最大间为宜，选用最大吸收光波长。吸收光波长。紫外可见分光度紫外可见分光度法含量测定方法法含量测定方法4种种方方法法对照品对照品比较法比较法吸收系吸收系数法数法计算光计算光度法度法比色比色法法紫外可见分光度紫外可见分光度法含量测定方法法含量测定方法对照品对照品比较法比较法分别配制供试品溶液和对照品溶液分别配制供试品溶液和对照品溶液,对照品溶液的中所含被测对照品溶液的中所含被测药物的量应为供试品溶液中被测成分规定

24、量的药物的量应为供试品溶液中被测成分规定量的10010%,所用所用溶剂量两者相同溶剂量两者相同,在规定的波长下测定吸光度在规定的波长下测定吸光度.按下式计算结果按下式计算结果;,;对应吸光度对照品溶液浓度供试品溶液浓度RxRxRRxxAACCACAC1.对照品比较法紫外可见分光度紫外可见分光度法含量测定方法法含量测定方法对照品对照品比较法比较法;:;:;:%100%100(%):供试品的量稀释体积供试品浓度称样量测得量含量对原料药WDCWDCxxP16:将将Cx用上述公式替代，用上述公式替代，即可通过实验求出各种含即可通过实验求出各种含量。见书例。量。见书例。对应于稀释对应于稀释体积浓度体积浓

25、度1.对照品比较法紫外可见分光度紫外可见分光度法含量测定方法法含量测定方法对照品对照品比较法比较法;:);(:%100(%):制剂的标示量装量制剂平均重量标示量对于固体制剂BWBWWDCxP16:制剂的标示量制剂的标示量:系指每系指每一支、片或每一个单位制一支、片或每一个单位制剂中含有主药的重量剂中含有主药的重量(或效或效价）或含量或装量。价）或含量或装量。P16:将将Cx用上述公式替代，用上述公式替代，即可通过实验求出各种含即可通过实验求出各种含量。见书例。量。见书例。紫外可见分光度紫外可见分光度法含量测定方法法含量测定方法吸收系吸收系数法数法吸收系数法吸收系数法:引入吸光系引入吸光系数的含

26、量计算方法数的含量计算方法100EAC%1cm1xx紫外可见分光度紫外可见分光度法含量测定方法法含量测定方法吸收系吸收系数法数法%1001001000(%)%11BVEVDAcm标示量%1001001000(%)%11BWEWDAcm标示量g/mlMg转转化单位化单位请看例题请看例题紫外可见分光度紫外可见分光度法含量测定方法法含量测定方法吸收系吸收系数法数法%1001001000(%)%11BVEVDAcm标示量例题例题示例：盐酸氯丙嗪注射液的含量测定：精密量取本品适量（约相示例：盐酸氯丙嗪注射液的含量测定：精密量取本品适量（约相当于盐酸氯丙嗪当于盐酸氯丙嗪50mg），置），置200ml量瓶中

27、，加盐酸溶液量瓶中，加盐酸溶液（91000)稀释至刻度，摇匀；精密量取稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置，置100ml量瓶中，量瓶中，用盐酸（用盐酸（91000)稀释至刻度，摇匀；在稀释至刻度，摇匀；在254nm下测定吸光度，下测定吸光度，按盐酸氯丙嗪的吸收百分系数计算，即得。按盐酸氯丙嗪的吸收百分系数计算，即得。过程推导过程推导注射液，选溶液公式注射液，选溶液公式,如下：如下：紫外可见分光度紫外可见分光度法含量测定方法法含量测定方法吸收系吸收系数法数法D为供试品溶液的稀释体积：共稀释了为供试品溶液的稀释体积：共稀释了200ml1002=10000ml%1001001000(%)%11BVE

28、VDAcm标示量已知已知测量值吸光度已知供试品取样量已知注射液标示量已知是注射液规格%11:2:cmEAmlVBV2ml ?吸收系吸收系数法数法)(1:100%100100(%)%11%11含量标示量的百分比量之后等于实际供试品含再乘液的含量稀释液体积相当于供试取样的意义标示量VBDmlVEAVBDVEAcmcm%1001001000(%)%11BVEVDAcm标示量吸收系吸收系数法数法)(:100%100100(%)%11%11含量标示量的百分比量之后等于实际供试品含再乘试液的含量取样单位质量相当于供的意义标示量WBDWEAWBDWEAcmcm%1001001000(%)%11BWEWDAc

29、m标示量固体试剂公式推导如下：固体试剂公式推导如下：3.计算分光光度法4.比色法（可能有实验，Its very simple）看书！特点：特点： 灵敏度高，可达10-1010-12g/ml 要求低浓度下测定 须做空白测定 荧光弱的药物可衍生化后测定( (二二) )荧光分析法荧光分析法rbrrxbxxCRRRRC( (三三) )色谱分析法色谱分析法1.HPLC1.1 内标法 RRssC/AC/Af 校正因子As：内标物质峰面积或者峰高AR: 对照品的峰面积或者峰高Cs: 内标物质浓度CR：对照品浓度SSxxC/AAf)C(含量As：内标物质峰面积或者峰高Ax: 供试品的峰面积或者峰高Cs: 内标

30、物质浓度f：校正因子( (三三) )色谱分析法色谱分析法1.HPLC示例一 炔诺酮的含量测定 照高效液相色谱法照高效液相色谱法( (附录附录DD测定测定) )色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用用十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶为为填充剂；以甲醇填充剂；以甲醇- -水水(65:35)(65:35)为流动相，检测波长为为流动相，检测波长为244nm244nm。理理论塔板数论塔板数按炔诺酮峰计算不低于按炔诺酮峰计算不低于15001500，炔诺酮峰与内标物质，炔诺酮峰与内标物质峰的峰的分离度分离度及主成分峰后一杂质峰与主成分峰的分离度均应及主成分峰后一杂质峰与主成分峰的分离度

31、均应符合要求。符合要求。内标溶液的制备内标溶液的制备 取黄体酮约取黄体酮约25mg25mg，精密称定，置，精密称定，置25ml25ml量瓶量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。中，加甲醇溶解并稀释至刻度。测定法测定法 取本品约取本品约25mg25mg，精密称定，置，精密称定，置25ml25ml量瓶中，加甲醇溶解并量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液2ml2ml与内标溶液与内标溶液3ml3ml，置，置10ml10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取20l20l注入液相色谱仪，记注入液相色谱仪，记录色谱仪，记录色谱图；另

32、取炔诺酮对照品适量，精密称定，同录色谱仪，记录色谱图；另取炔诺酮对照品适量，精密称定，同法测定。按内标法以峰面积计算，即得。法测定。按内标法以峰面积计算，即得。对照品对照品样品测得量WA/A/ArrssA2.GC示例 松节油的含量测定 照气相色谱法照气相色谱法( (附录附录 E E测定测定) )色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用聚乙二醇用聚乙二醇(PEG)-20M(PEG)-20M为固定相，为固定相，涂布密度为涂布密度为20%20%；柱温为；柱温为9090C。理论塔板数按。理论塔板数按-蒎烯峰计算应蒎烯峰计算应低于低于15001500。校正因子测定校正因子测定 取正丁醇适量，

33、精密称定，加石油醚取正丁醇适量，精密称定，加石油醚(30(306060C)C)制成每制成每1ml1ml含含20mg20mg的溶液，作为内标溶液。另取的溶液，作为内标溶液。另取-蒎烯对照品约蒎烯对照品约30mg30mg，精密称定，置，精密称定，置10ml10ml棕色量瓶中，精密加入内标溶液棕色量瓶中，精密加入内标溶液2ml2ml，加，加石油醚石油醚(30(306060C)C)至刻度，摇匀，吸取至刻度，摇匀，吸取1l1l注入气相色谱仪，计注入气相色谱仪，计算校正因子。算校正因子。测定法测定法 取本品约取本品约35mg35mg，精密称定，置，精密称定，置10ml10ml棕色量瓶中，精密加入棕色量瓶中

34、，精密加入内标溶液内标溶液2ml2ml，用石油醚，用石油醚(30(306060C)C)溶解并稀释至刻度，摇匀，溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取吸取1l1l注入气相色谱仪，测定，即得。注入气相色谱仪，测定，即得。 本品含本品含-蒎烯蒎烯(C(C1010H H1616) )不得少于不得少于70%70%。RRssC/AC/Af 校正因子SSxxC/AAf)C(含量v 外标法外标法:含量(Cx)=CRAxARv 标准加入法标准加入法:AisAx=Cx+ CxCx或Cx= Cx(Ais/Ax) -1不经有机破坏经有机破坏直接测定配位滴定法氧化还原滴定法水解后测定酸水解碱水解经还原分解后测定湿法破坏凯氏定氮法

35、干法破坏高温灼烧法氧瓶燃烧法( (一一) )、直接测定法、直接测定法 葡萄糖酸钙葡萄糖酸钙 EDTAEDTA配位滴定配位滴定 富马酸亚铁富马酸亚铁 邻二氮菲邻二氮菲- -硫酸铈滴定硫酸铈滴定 葡萄酸锑钠葡萄酸锑钠 间接碘量法间接碘量法( (二二) )、经水解后测定法、经水解后测定法适用范围：金属原子不直接于碳原子相连或某些C-M键结合不牢固的有机金属药物。1 1、碱水解法、碱水解法344332334)(NONHAgSCNSCNNHAgNO NaNOAgClAgNONaCl O2HHCOONa3NaClCO)(CHNaOHOHCHCCCl3223 回回流流三氯叔丁醇银量法返滴定2 2、酸水解法、

36、酸水解法适用范围：含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物。十一烯酸氯化锌十一烯酸锌稀盐酸EDTA配位滴定( (三三) )、经还原分解后测定法、经还原分解后测定法适用范围：碘原子直接与芳环连接的含碘有机化合物。COOHIIINHCOCH3CH3COHN+11NaOH+COOHNH2H2N+ +2CH3COONa+3Na2ZnO2+NaI+AgNO3AgI3Zn3NaOH3H2O+ NaNO3回流碘他那酸碘他那酸三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法 含氮、硫、硫柳汞、氯化钠的生物制品、含氮有机合成药物测定的前处理和生物制品中金属元素测定时生物基质的去除。u H2SO4-HNO3u

37、 H2SO4-HClO4u H2SO4-H2SO4u HNO3-KMnO4分解剂/消化剂辅助分解剂凯氏定氮法测定含有氨基和酰胺结测定含有氨基和酰胺结构的药物结构构的药物结构( (一一) )湿法破坏湿法破坏原 理 将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中有机结构被中有机结构被“消化消化”成成COCO2 2和和H H2 2O O，有机结合的氮转，有机结合的氮转化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，经碱化经碱化后后释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸

38、滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。n 常量法含氮量 2530mgn 半微量法含氮量 1.02.0mg凯氏烧瓶K2SO4( (提高消解温度提高消解温度) )CuSO4( (加快消解速度加快消解速度) )硫酸硫酸碱液碱液硼酸硼酸( (吸收液吸收液) )甲基红甲基红- -溴甲酚绿指示剂溴甲酚绿指示剂硫酸滴定空白校正先用强先用强酸水解酸水解再用含碱硫代硫再用含碱硫代硫酸钠中和酸钠中和最后用碱释放出氨最后用碱释放出氨气气 ，并蒸馏出之，并蒸馏出之( (二二) )干法破坏干法破坏1.高温灼烧法高温灼烧法用于含卤素、含磷药物和药物中砷盐的检查。常加入无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。2.氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法 系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为分解为COCO2 2和和H H2 2O O，待测元素根据电负性的不同转化为不，待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据其性质和存在方式选择方法进行分析。其性质和存在方式