基因诊断与基因治疗习题及答案

1、第十八章 基因诊断与基因治疗一、填空题1. 基因突变可导致 的改变，从而引起 2. 基因变异包括 和。3.内源性基因变异包括 、 和_等。4.外源性基因变异是指 疾病。5.基因诊断常用技术方法有 _、 、 _和 。6.核酸分子杂交技术是依据 _、 和_原理设计的技术方法。7.常用固相核酸杂交方法有 _、 、 _、 、 和等。8.PCR 是的缩写，译为 _。9.PCR过程由、和_步骤组成。10.生物芯片技术包括、_、 、 _、 和。11.基因测序是将有关基因进行，测出_，从中找出 _所在。12.基因治疗在概念上分为_和。目前普遍接受的是 _。13.基因治疗的总体策略主要有、 、 _、 、 、和等

2、。14. 基因治疗的基本程序包括 _、 、 _、和 。15. 获得治疗性基因的方法包括、 、和 。16. 常被用于基因治疗的基因转移载体有 _、 和 。17. 基因治疗中的靶细胞也称为细胞，靶细胞有 和_两大类18. 基因转移方法概括地讲有 _、 和_等。二、名词解释19. 基因诊断20. 基因治疗21. 核酸分子杂交22. Southern blotting23. 生物芯片24. 免疫基因治疗25. 基因矫正26. 基因置换27. 基因增补28. 基因失活29. 自杀基因30. 夹心杂交31. 引物32. Northern blotting33. PCR三、问答题34. 简述基因诊断的特点3

3、5. 简述分子杂交程序。36. 简述 PCR 技术原理。37. 简述基因诊断的临床应用概况38. 基因治疗要符合哪些要求？答案一、填空题1. 相应表型；疾病。2. 内源性基因变异；外源性基因变异。3. 点突变；缺失或插入性突变；染色体移位；基因重排和基因扩增。4. 病原体感染性。5. 核酸杂交；PCR;基因芯片；基因测序。6. DNA 双链碱基互补；变性；复性。7. Southern印迹杂交法；Northern印迹杂交法；斑点或狭缝杂交法；菌落杂 交法；夹心杂交法；原位杂交法。8. Polymerase chain reaction 聚合酶链反应。9. DNA 模板的变性；模板与引物结合；引物

4、延伸。10. 芯片制作（配体点阵及固定化 ）；样品处理（扩增和标记 ）；分子间反应或杂 交；检测；数据处理；综合分析。11. 分离；其碱基序列；其变异。12. 广义基因治疗；狭义基因治疗；广义基因治疗。13. 基因矫正；基因置换；基因增补；基因失活； “自杀基因 ”的应用；免疫 基因治疗；耐药基因治疗14. 治疗性基因的获得；基因载体的选择；靶细胞的选择；基因转移方法的 选择。15. 真核基因组文库； cDNA 文库； PCR 扩增；人工合成。16. 逆转录病毒；腺病毒；腺相关病毒。17. 受体；生殖细胞；体细胞。18. 化学法；物理法；生物 （病毒 ）法。二、名词解释19. 是利用分子生物学

5、和分子遗传学的技术方法， 直接检测基因分子结构及 表达水平是否异常，从而对疾病做出诊断的方法。20. 为达到治疗目的，采用正常基因置换或增补患者体内变异基因的方法。21. 是依据 DNA 双链碱基互补、变性和复性原理，用已知碱基序列的单链 核苷酸片段作为探针， 检测样本中是否存在与其互补的同源核苷酸序列的一种实 验技术，是分子生物学领域及基因诊断最常用的基本技术之一。22. DNA 分子经限制性内切酶酶切和凝胶电泳后， 可按分子量大小分离， 再 进行变性处理，将单链 DNA 从凝胶中吸附转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然 后在该滤膜上进行杂交反应，称为 Southern 印记杂交法。23. 主要

6、用于 DNA 测序、基因表达谱的鉴定和基因突变体的检测与分析， 故又称为 DNA 芯片或基因芯片。生物芯片技术包括芯片制作、样品处理、分子 间反应或杂交、检测、数据处理和综合信息分析。24. 是把产生抗病毒或肿瘤免疫力的相应的抗原决定族基因导入机体细胞， 以达到治疗目的的基因治疗技术。25. 是指将致病基因中的异常碱基进行纠正， 而正常部分予以保留的基因治 疗技术。26. 是指用正常基因通过基因同源重组技术，原位替换致病基因，使细胞内 的 DNA 完全恢复正常的基因治疗技术。27. 即把正常基因导入体细胞，通过基因的非定点整合进入体细胞 DNA ， 并使其表达， 以弥补缺陷基因的功能， 或使原

7、有基因的功能得到增强， 但致病基 因本身并未除去。28. 是将特定的反义核酸（反义RNA、反义DNA和核酶）导入细胞，在转录 和翻译水平阻遏某些基因的异常表达，从而达到治疗目的的基因治疗技术。29. 在某些病毒或细菌中的某基因可产生一种酶， 它可将原本无细胞毒或低 细胞毒药物前体转化为细胞毒性物质，将细胞本身杀死，此种基因称为 “自杀基 因”。30. 用位于待测靶基因序列上两个相邻但不重叠的 DNA片段（A、B），分别 制作捕捉探针（不标记的、与A序列互补的片段）和检测探针（标记的、与B序列 互补的片段 ），先后与靶基因杂交。31. 进行 PCR 扩增时需先设计一对序列与已知序列的 DNA 待

8、测区两个 3'- 端的碱基互补的寡核苷酸，称为引物。32. 是经典的 RNA 分析法，用于组织细胞中总 RNA 或 mRNA 的定性和定 量分析，可确定其加工、剪接的缺陷及外显子的变异等。33. 即聚合酶链反应，是由Kary B.M.在1985年创建的，是一种在体外进行的由引物介导的 DNA 序列酶促合成反应，又称为基因扩增技术。三、问答题34. 基因诊断的对象是基因，它具有一般诊断所不具备的以下特点：特异性高。基因诊断是以特定的基因为探查靶点， 所采用的分子杂交技术是用特定基 因序列作为探针，故病因针对性很强。灵敏度和精确性高。分子杂交技术和PCR技术具有放大效应。其中PCR可检出p

9、g水平靶基因。实用性强，诊断范 围广。可用于内源性基因和外源性基因的检测。 此外被检测基因样品几乎可以是 任何状态的组织细胞， 包括分化阶段的特异性表达及异常表达， 也可对血斑、 精 斑中的 DNA 等进行鉴定。35. 分子杂交程序主要包括下列内容：待测核酸样本的制备。特异性探 针的制备与标记：制备的探针包括基因组探针、cDNA探针、寡核苷酸探针、RNA 探针。核酸探针必须标记。待测核酸样本的电泳分离、变性、转移和固定。非特异性DNA分子的预杂交，标记探针的杂交、漂洗。杂交信号的检测：放 射性核素标记的核酸探针杂交信号， 一般用放射自显影法检测。 非放射性标记的 核酸探针杂交信号，是通过酶促反

10、应显色或发光来显示的。36. 采用PCR方法进行的基因扩增过程类似于体内 DNA的复制过程。不同 之处是使用耐热的Taq酶取代DNA聚合酶，用合成的DNA引物替代RNA引物。 PCR全过程由DNA模板变性、模板与引物结合和引物延伸三个步骤组成，具体 过程如下：DNA模板的变性：将待扩增的DNA高温变性，使双链解开变成单 链。模板与引物的结合：预先加入反应体系中的两种引物在降温退火过程中将 分别同待扩增的 DNA 片段两条链 3'-端对应的核苷酸互补结合， 配对复性。 引 物延伸：将反应体系调节到所选用的 Taq酶的最适温度，在有四种dNTP底物存 在的条件下，聚合酶以待扩增 DNA为模

11、板，从引物的3-端合成新的DNA链。37. 基因诊断临床应用概况：遗传病的基因诊断：如镰刀形红细胞贫血病的B珠蛋白基因的第六个密码子发生单碱基突变。 这一突变改变了该基因内部的 一个内切酶Mst U作用位点。当把正常人和带有基因突变者的基因组 DNA用Mst U酶解后，用B珠蛋白基因探针杂交，结果会出现不同的 DNA条带，依此对其 进行基因诊断。 肿瘤的基因诊断： 从分子生物学角度来看， 肿瘤的发生是由某 些因素的作用所致的多个癌基因的激活或抑癌基因的缺失。 所以有人认为肿瘤是 一种多基因异常性疾病。 依其基因突变事实， 可采用相应的技术对肿瘤进行基因 诊断。诊断结果对了解癌变机制， 肿瘤分类分型及预后均有指导意义。 感染性 疾病的基因诊断：采