第十三章高效液相色谱法ppt课件

1、第十三章第十三章 高效液相色谱法高效液相色谱法 2.高效液相色谱仪的部件；紫外检测器和荧光检测器的检测原理和适用范围。熟习 2.高效液相色谱固定相的选择，分别条件，与液相色谱气相色谱的区别。掌握第八章第八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 反相键合相色谱法保管行为的主要影响要素和分别条件选择；化学键合相的性质、特点和种类及运用本卷须知；流动相对色谱分别的影响；HPLC中的速率实际及其对选择实验条件的指点作用；定量分析方法。掌握 高效液相色谱法：高效液相色谱法： 一种用液体为流动相的色谱一种用液体为流动相的色谱分别分析方法。它在经典色谱实际的根底上，采用分别分析方法。它在经典色谱实际的根底上，采用

2、了高压泵、化学键合固定相高效分别柱、高灵敏公了高压泵、化学键合固定相高效分别柱、高灵敏公用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。 高压：高压：150-350*105 Pa 高效：大于高效：大于30000塔板塔板/米米 高灵敏：高灵敏：10-9g 紫外检测、紫外检测、10-12g 荧光检测荧光检测经典液相色谱法与高效液相色谱法的比较经典液相色谱法高效液相色谱法常压或减压填料颗粒大柱效低分析速度慢色谱柱只用一次不能在线检测高压，4050MPa填料颗粒小，250m柱效高,4000060000块/m分析速度快色谱柱可重复多次使用能在线检测气相色谱与高

3、效液相色谱的比较 气相色谱高效液相色谱不能用于热不稳定性物质的分析高温（程序升温）有很灵敏的检测器如ECD和较灵敏的通用检测器（FID和TCD）流动相为气体，无毒运行和操作容易可以用于热不稳定物质的分析室温没有较高灵敏的通用检测器流动相有毒，可供选择范围宽（梯度洗脱）运行和操作比GC难一些特点：具有分别效率高选择性好分析速度快检测灵敏度高运用范围广流动相选择范围宽柱后流出组分不被破坏，易制备第一节高效液相色谱仪进样器馏分收集器记录仪检测器流程1高压输液泵高压输液泵输液泵应具备的性能：输液泵应具备的性能： 流量精度高且稳定流量精度高且稳定 流量范围宽流量范围宽 能在高压下延续任务能在高压下延续任

4、务 液缸容积小液缸容积小 密封性能好，耐腐蚀密封性能好，耐腐蚀 恒流泵：在保送流动相过程中流量恒定。恒流泵：在保送流动相过程中流量恒定。 常用柱塞往复泵常用柱塞往复泵双泵：为了抑制流量的脉动。双泵：为了抑制流量的脉动。 有串联式和并联式有串联式和并联式输液泵操作本卷须知：输液泵操作本卷须知： 防止固体微粒进入泵体防止固体微粒进入泵体 流动相不应含有腐蚀性物质流动相不应含有腐蚀性物质 防止溶剂瓶内的流动相被用完防止溶剂瓶内的流动相被用完 不超越规定的最高压力不超越规定的最高压力 流动相普通应该先脱气流动相普通应该先脱气 梯度淋洗洗提、洗脱梯度淋洗洗提、洗脱 分别过程中按一定程序延续改动载液中溶剂

5、即流动相分别过程中按一定程序延续改动载液中溶剂即流动相的配比和极性以提高分别效果类似的配比和极性以提高分别效果类似GC中的程序升温中的程序升温高压梯度和低压梯度高压梯度和低压梯度高压梯度低压梯度二、分别和进样二、分别和进样系统系统 进样器进样阀六通阀、自动进样安装色谱柱色谱柱分析柱、制备柱分析柱、制备柱 性能评价性能评价 ：H、n、fs、k和和的反复性，或的反复性，或R。 柱效评价柱效评价1.1.硅胶柱：样品：苯、萘、联苯及菲己烷配制硅胶柱：样品：苯、萘、联苯及菲己烷配制 流动相：无水己烷流动相：无水己烷2. 反相色谱柱：样品：尿嘧啶、硝基苯、萘及芴反相色谱柱：样品：尿嘧啶、硝基苯、萘及芴 流

6、动相：甲醇流动相：甲醇-水水85：15 或乙腈或乙腈-水水60：403. 正相色谱柱：样品：四氯乙烯、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲正相色谱柱：样品：四氯乙烯、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二正丁酯及肉桂醇酸二正丁酯及肉桂醇 流动相：正庚烷流动相：正庚烷 色谱柱再生色谱柱再生1.反相色谱柱：反相色谱柱： 先以甲醇先以甲醇-水水95：5、甲醇、一氯甲烷为流动、甲醇、一氯甲烷为流动相依次冲洗，再以相反顺序依次洗脱。相依次冲洗，再以相反顺序依次洗脱。 2.正相色谱柱：正相色谱柱： 先以正己烷、异丙醇、一氯甲烷及甲醇为流动相先以正己烷、异丙醇、一氯甲烷及甲醇为流动相依次冲洗，再以相反顺序依次洗脱。依次冲洗，

7、再以相反顺序依次洗脱。三、检测系统三、检测系统一检测器一检测器(detector)的主要性能的主要性能要求：要求： 灵敏度高检测限低灵敏度高检测限低 噪音低噪音低 线性范围宽线性范围宽 反复性好反复性好 适用范围广通用型、专属型适用范围广通用型、专属型 二紫外检测器二紫外检测器检测原理：朗伯比尔(Lambert-Beer)定律，呼应信号吸光度与浓度成正比A=Cl特点：灵敏度较高10-610-9g/ml，噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏样品，运用广分析、制备。局限：只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。紫外检测器紫外检测器固定波长检测器：254nm可变波长检测器

8、：光源：氘灯和钨灯，200400800nm，单色器，流通池试样，光电管光路系统和紫外分光光度计类似光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector；PDAD)：一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约1nm谱带宽的单色光紫外检测器紫外检测器光电二极管阵列检测器任务原理：复光经过流通池，再进入单色器，分光后照射在二极管阵列安装上，同时获得各波长的信号强度，即获得组分的吸收光谱。获得三维光谱色谱图。用途：吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量,判别峰纯度。三荧光检测器三荧光检测器(FD)检测原理：化合物受紫外光激发后，发射出比激发光波长更长的光，称为荧光荧光强度(F)与

9、激发光强度(I0)及荧光物质浓度(C)之间的关系为：F=2.3QKI0ClQ为量子产率，K为荧光效率，为摩尔吸光系数，l为光径长度。F=KC特点：选择性好，专属型检测器灵敏度比紫外检测器高检测限10-10g/ml激发波长(ex)和发射波长(em)的选择 一、主要类型一、主要类型 1. 固定相的聚集形状固定相的聚集形状 液液色谱法液液色谱法LLC和液固色谱法和液固色谱法LSC 2. 分别机制：分别机制： 分配色谱法分配色谱法 吸附色谱法吸附色谱法 离子交换色谱法离子交换色谱法IEC 空间排阻色谱法空间排阻色谱法SEC3.其他色谱类型其他色谱类型亲合色谱法亲合色谱法AC 手性色谱法手性色谱法CC胶

10、束色谱法胶束色谱法MC 电色谱法电色谱法EC化学键合相色谱法化学键合相色谱法第二节高效液相色谱法的固定相和流动相第二节高效液相色谱法的固定相和流动相 固定相应符合以下要求：固定相应符合以下要求： 颗粒细且均匀；颗粒细且均匀； 传质快；传质快； 机械强度高，能耐高压；机械强度高，能耐高压； 化学稳定性好，不与流动相发生化学反响。化学稳定性好，不与流动相发生化学反响。一、液一、液- -固吸附色谱固定相固吸附色谱固定相1.硅胶表孔硅胶薄壳玻珠YBK无定形全多孔硅胶(YWG)球形全多孔硅胶(YQG)堆积硅胶(YQG)2.高分子多孔微球或称有机胶 二、液二、液- -液分配色谱固定相液分配色谱固定相化学键

11、合相色谱法的固定相化学键合相色谱法的固定相 以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法法BPCBPC化学键合相：采用化学反响的方法将官能团键合在载体化学键合相：采用化学反响的方法将官能团键合在载体外表所外表所 构成的固定相构成的固定相 二键合相的性质和特点二键合相的性质和特点 1.键合反响硅氧烷SiOSiC型：氯硅烷与硅胶进展硅烷化反响硅氧碳键型：硅氧碳键型： SiOC 化学键合相构成具备的条件化学键合相构成具备的条件 2.固定液应有与载体外表发生化学反响的官能团1.载体外表应有某种活性基团2.键合相的种类1非极性键合相：非极性烃基，如C18C8

12、C1与苯基等键合在硅胶外表；用于反相色谱；ODS2极性键合相：极性键合相：常用常用-NH2、-CN键合相键合相氰乙硅烷基氰乙硅烷基Si(CH2)2CN)键合硅胶键合硅胶 普通用于正相色谱普通用于正相色谱 3离子交换键合相：离子交换键合相：常用常用-SO3H、 -COOH、 、-R3NCl3.键合相的特点运用过程中不流失；化学稳定性好；柱效高，分别选择性好；适于梯度洗脱；载样量大留意：流动相的pH普通应在3-8，否那么会引起硅胶溶解；(也有适用宽pH范围的键合相)二、化学键合相色谱法的流动相二、化学键合相色谱法的流动相 对流动相的要求：1.与固定相不发生化学反响。2.对试样有适宜的溶解度。使k在

13、110范围内，3.与检测器相顺应。例如用紫外检测器时，选用截止波长小于检测波长的溶剂。4.纯度高，粘度小。低粘度流动相如甲醇乙腈等可以降低柱压，提高柱效。1、液固吸附色谱流动相的选择、液固吸附色谱流动相的选择选择原那么是待测样品的极性和洗脱剂的极性一致，即分别极性大的试样选用极性强的洗脱剂；分别极性弱的试样选用极性弱的洗脱剂。1.溶剂的极性强度正相色谱：溶剂极性越强，洗脱才干越强反相色谱：极性弱的溶剂洗脱才干强2.溶剂的选择性不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，应选择性不同混合溶剂二元或多元流动相二液液分配色谱法流动相的选择性二液液分配色谱法流动相的选择性 溶剂的选择性溶剂的选择性 溶剂和样品

14、分子间的作溶剂和样品分子间的作用力用接受质子的才干用力用接受质子的才干xe、给予质子的才干、给予质子的才干xd和静和静电力电力xn(由偶极矩决议由偶极矩决议)三种三种参数来表征，并以参数来表征，并以xe、xd和和xn构成一个三角坐标图构成一个三角坐标图 。 溶剂可分为八组而分别位于图中不同区。溶剂可分为八组而分别位于图中不同区。I组的组的xe值较大，属质子受体溶剂；值较大，属质子受体溶剂；VII组的组的xd值较大，属质子值较大，属质子给于体溶剂；给于体溶剂；V组的组的xn值较大，属偶极作用力溶剂。同值较大，属偶极作用力溶剂。同组溶剂在分别中具有类似的选择性，不同组差别较大。组溶剂在分别中具有类

15、似的选择性，不同组差别较大。溶剂的选择性溶剂的选择性多元混合溶剂的溶剂极性参数计算多元混合溶剂的溶剂极性参数计算 niiiPP1mix式中式中i 为混合溶剂中各溶剂的体积百分数。为混合溶剂中各溶剂的体积百分数。 二元混合溶剂的那么为二元混合溶剂的那么为 PPPBAAAB 式中式中A， B分别为二元混合溶剂中溶剂分别为二元混合溶剂中溶剂A和溶剂和溶剂B的体积百分数的体积百分数。 多元混合溶剂的溶剂极性参数计算多元混合溶剂的溶剂极性参数计算 对于正相色谱，二元溶剂的极性参数对于正相色谱，二元溶剂的极性参数P 和组分的和组分的k值存在如下值存在如下关系：关系： 2)(122110/PPkk 式中分别

16、为初始和调理后二元溶剂的极性参数。式中分别为初始和调理后二元溶剂的极性参数。k1、k2为组分为组分相应的容量因子。相应的容量因子。例例 在一反相色谱柱上，当流动相为在一反相色谱柱上，当流动相为30%甲醇和甲醇和70%水水(体积比体积比)时，某组分的保管时间为时，某组分的保管时间为25.6min，死时间为，死时间为0.35min，如何调理溶剂配比使组分容量因子为，如何调理溶剂配比使组分容量因子为5？ 解：初始值解：初始值 1723503506251.k 78210700153001.P 2/ )7 . 8(2101 .725P27 . 816. 12P2 .10)1 (1 . 538. 6 =

17、0.75 即调整溶剂比例为即调整溶剂比例为75%甲醇和甲醇和25%水可使该组分的水可使该组分的k值为值为5。 固定相：极性键合相 如CN、NH2或二羟基键合硅胶流动相：非极性或弱极性溶剂加极性调整剂适用范围：溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物 分别机制？分别机制？ 分配：把有机键合层作为一个液膜对待，溶质在两相的溶解分配：把有机键合层作为一个液膜对待，溶质在两相的溶解 吸附：溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作用吸附：溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作用一、正相键合相色谱法一、正相键合相色谱法 组分的保管和分别组分的保管和分别 分别选择性决议于键合相的种类、流动相分别选择性决

18、议于键合相的种类、流动相的强度和试样的性质的强度和试样的性质 流动相的极性加强，洗脱才干添加，使组分流动相的极性加强，洗脱才干添加，使组分k减小，减小，tR 减小。反之，减小。反之， k增大，增大，tR增大。增大。 极性强的组分极性强的组分k大，后洗脱出柱。大，后洗脱出柱。二反相键合相色谱法二反相键合相色谱法1. 固定相：非极性键合相固定相：非极性键合相 如十八烷基硅烷如十八烷基硅烷C18，ODS、辛烷基、辛烷基C8键合硅胶键合硅胶 流动相：水为根底溶剂，参与一定量与水混溶的极性调整剂流动相：水为根底溶剂，参与一定量与水混溶的极性调整剂 常用甲醇水、乙腈水等常用甲醇水、乙腈水等运用：非极性至中

19、等极性的组分，还有有机酸、碱及盐等运用：非极性至中等极性的组分，还有有机酸、碱及盐等 2. 保管机制：疏溶剂实际保管机制：疏溶剂实际溶质的保管主要是溶质分子与溶质的保管主要是溶质分子与极性溶剂分子间的排斥力，促极性溶剂分子间的排斥力，促使溶质分子与键合相的烃基发使溶质分子与键合相的烃基发陌生水缔合。不是溶质分子与陌生水缔合。不是溶质分子与键合相间的色散力。键合相间的色散力。3.保管行为的主要影响要素保管行为的主要影响要素 1溶质的分子构造极性极性越弱，疏水性越强，k越大，tR也越大。同系物碳数越多，极性越弱，k越大；引入极性取代基，降低疏水性，k值变小。2固定相键合烷基的疏水性随碳链的延伸而添

20、加，溶质的k也增大。硅胶外表键合烷基的浓度越大，那么溶质的k越大。3流动相流动相 极性越强，洗脱才干越弱，使溶质的极性越强，洗脱才干越弱，使溶质的k越越大大 溶剂种类：水为弱溶剂，醇为强溶剂溶剂种类：水为弱溶剂，醇为强溶剂 溶剂比例：水的比例添加，使溶剂比例：水的比例添加，使k增大增大 中性盐的参与：使中性溶质的中性盐的参与：使中性溶质的k增大增大 pH：影响弱酸、弱减的离解：影响弱酸、弱减的离解 流动相的流动相的pH降低，弱酸降低，弱酸k增大，增大，tR增大；弱碱增大；弱碱k变小。变小。第三节第三节 影响色谱峰扩展的要素及分别操作条件的选择影响色谱峰扩展的要素及分别操作条件的选择 涡流分散A

21、=2dp球形、小粒度、均匀RSD5%固定相，匀浆高压填充，以降低A。纵向分散=2Dm可以忽略。由于Dl很小，室温操作，且U大于U最正确，传质阻抗：固定相传质阻抗CS可以忽略，因df极小流动相传质阻抗Cmm2PmmDdC要求：dp小，Dm大一柱内展宽及分别条件的选择一柱内展宽及分别条件的选择1.影响柱内展宽的要素影响柱内展宽的要素静态流动相传质阻抗：由于部分流动相在固定相微孔内的滞留静态流动相传质阻抗系数CsmCsmdp2，Csm1/Dm，而DmT/要求:固定相dp2、流动相都小H=A+Cmu+Csmu =A+CuH=A+Cmu+Csmu =A+Cu HPLC HPLC的实验条件应该是：的实验条

22、件应该是：小粒度、均匀的球形化学键合相；低粘小粒度、均匀的球形化学键合相；低粘度流动相，流速不宜过快；柱温适当。度流动相，流速不宜过快；柱温适当。 二分别条件的选择二分别条件的选择 1.固定相的选择固定相的选择 2.流动相的选择：黏度低的选择流动相的选择：黏度低的选择 3.流速的选择流速的选择 4. 柱温的选择柱温的选择 ：室温：室温二、柱外展宽二、柱外展宽 柱外要素：柱前峰展宽和柱后峰展宽。柱外要素：柱前峰展宽和柱后峰展宽。 柱前峰展宽：由进样及进样器到色谱柱衔接纳引起柱前峰展宽：由进样及进样器到色谱柱衔接纳引起的柱头直接进样，色谱峰的不对称性和柱效有明显的柱头直接进样，色谱峰的不对称性和柱

23、效有明显改善。改善。 柱后峰展宽：柱后衔接纳和检测器死体积；柱后峰展宽：柱后衔接纳和检测器死体积； 通用紫外检测器的池体积仅为通用紫外检测器的池体积仅为8L。 第四节第四节 HPLC 运用与例如运用与例如 定性分析方法定性分析方法 定量分析方法：定量分析方法： 外标法、内标法外标法、内标法同同GC本人看本人看二、二、 分别类型选择分别类型选择分析实例：分析实例：环境中有机氯农药残留量分析环境中有机氯农药残留量分析 可对水果、蔬菜中的农药残留量进展分析。固定相：薄壳型硅胶(3750m)流动相：正己烷流速：1.5mL/min色谱柱：50cm2.5mm(内径)检测器：示差折光检测器 稠环芳烃的分析稠

24、环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：流动相：20%甲醇甲醇-水水 100%甲醇甲醇 线性梯度淋洗，线性梯度淋洗，2%/min 流流 速：速：1mL/min 柱柱 温：温：50 C 柱柱 压：压：70 104 Pa 检测器：紫外检测器检测器：紫外检测器血浆分析血浆分析1.计算在某色谱条件下，分析只含有二氯乙烷，二溴乙烷及四乙基铅三组分的样品，结果如下：二氯乙烷二溴乙烷四乙基铅相对质量校正因子1.001.651.75峰面积cm21.501.012.82(1)试求各组分的百分含量。上述色谱分析采用了何种定量方法

25、?该定量方法有何优点和局限性?2.知物质A和B在一根30.00cm长的柱上的保管时间分别为16.40min和17.63min。不被保管组分经过该柱的时间为1.30min。峰底宽度分别为1.11min和1.21min，计算：1柱的分别度；2柱的平均塔板数3到达1.5分别度所需的柱长度。21122()2(17.63 16.40)1.061.11 1.21RRttRWW216()RtnW2116.4016()34931.11n 2217.6316()33971.21n 12(3493 3397)344522nnn21122221.06301.53060()1.51.06LRLcmRLL1分1HPLC

26、与GC的比较，可忽略纵向分散项，这主要是由于2液相色谱定量分析时，要求混合物中每一个组分都出峰的是C。3在分配色谱法与化学键合相色谱法中，选择不同类别的溶剂分子间作用力不同，以改善分别度，主要是A柱前压力高B流速比GC的快C流动相黏度较小D柱温低A外标规范曲线法B内标法C面积归一化法D外标法C。A提高分配系数比B容量因子增大C保管时间增长D色谱柱柱效提高 A 。D。4在液相色谱中，梯度洗脱适用于分别A异构体B沸点相近，官能团一样的化合物C沸点相差大的试样D极性变化范围宽的试样5在高效液相色谱中，采用254nm紫外控制器，下述溶剂的运用极限为A甲醇210nmB乙酸乙醋260nmC丙酮330nm

27、A 6当用硅胶为基质的填料作固定相时，流动相的pH范围应为A在中性区域B5一8C1一14D2一8D。8在正相色谱中，假设适当增大流动相极性那么A样品的k降低，tR降低B样品的k添加，tR添加C相邻组分的添加D对根本无影响7在液相色谱中，提高色谱柱柱效的最有效途径是在液相色谱中，提高色谱柱柱效的最有效途径是 A 减小填料粒度减小填料粒度 B 适当升高柱温适当升高柱温 C 降低流动相的流速降低流动相的流速 D 增大流动相的流速增大流动相的流速 A A 9用ODS柱分析一有机弱酸混合物样品，以某一比例甲醇一水为流动相时，样品容量因子较小，假想象使容量因子适当添加，较好的方法是A添加流动相中甲醇的比例

28、B添加流动相中的水的比例C流动相中加人少量HAcD流动相中加人少量的氨水 B10假设样品比较复杂，相邻两峰间间隔太近或操作条件不易控制稳定，要准确丈量保管值有一定困难时，可选择以下方法A利用相对保管值定性B加人知物添加峰高的方法定性C利用文献保管值数据定性D与化学方法配合进展定性11液相色谱中通用型检测器是A紫外吸收检测器B示差折光检测器C热导池检测器D荧光检测器 B C 12高压、高效、高速是现代液相色谱的特点，采用高压主要是由于A可加快流速，缩短分析时间B高压可使分别效率显著提高C采用了细粒度固定相所致D采用了填充毛细管柱 C 。13在液相色谱中，提高色谱柱柱效的最有效途径是A减小填料粒度

29、B适当升高柱温C降低流动相的流速D增大流动相的流速 A 14液相色谱的H一u曲线A与气相色谱的一样，存在着HminBH随流动相的流速添加而下降CH随流动相的流速添加而上升DH受u影响很小 C 15与气相色谱相比，在液相色谱中A分子分散项很小，可忽略不计，速率方程式由两项构成B涡流分散项很小，可忽略不计，速率方程式由两项构成C传质阻力项很小，可忽略不计，速率方程式由两项构成D速率方程式同样由三项构成，两者一样A 16在液相色谱中，以下检测器可在获得色谱流出曲线的根底上，同时获得被分别组分的三维彩色图形的是A光电二极管阵列检测器B示差折光检测器C荧光检测器D电化学检测器 A 17.在液相色谱中，常

30、用作固定相又可用作键合相基体的物质是A分子筛B硅胶C氧化铝D活性炭 B 18键合相的键合基团的碳链长度增长后A极性减小B极性增大C载样量增大D载样量减小19.水在下述色谱中，洗脱才干最弱作为底剂的是A正相色谱法B反相色谱法C吸附色谱法D空间排斥色谱法 A B 20在以下方法中，组分的纵向分散可忽略不计的是A毛细管气相色谱法B高效液相色谱法C气相色谱法D超临界色谱法 B 。1高效液相色谱仪普通可分为 、 、 、 和 等部分。填空题2常用的高效液相色谱检测器主要是常用的高效液相色谱检测器主要是 、 、 、 和和 检测器等。检测器等。3高效液相色谱中的技术类似于气相色谱中的程序升温，不过前者延续改动

31、的是流动相的，而不是温度。高压输液系统、进样系统、分别系统、检测器 、显示系统紫外、示差折光、荧光、电导、电化学梯度洗脱、组成与极性 4在液液分配色谱中，对于亲水固定液采用流动相，即流动相的极性_固定相的极性称为正相分配色谱。5正相分配色谱适用于分别化合物、极性的先流出、极性的后流出。疏水性；小于 极性；小；大 6高效液相色谱的开展趋势是减小和以提高柱效。填料粒度；柱径 7在液相色谱中，为改善分别度并调整出峰时间，可经过改动流动相和_的方法到达。8在液相色谱中，速率实际方程中的项很小，可忽略不计，vanDeemter方程式可写成。9经过化学反响，将键合到外表，此固定相称为化学键合固定相。组成、极性分子分散、HACu固定液、载体10液相色谱流动相应运用黏度溶剂，可