任务二维生素C注射液的含量测定

1、维生素维生素C的含量测定的含量测定组别：2组组员：王鹏飞 李东 于天齐 苏剑为什么要维生素为什么要维生素C测定的含量测定的含量？v 精密量取本品适量，用水稀释制成每精密量取本品适量，用水稀释制成每1ml1ml中约含中约含2020g g的溶的溶液，照肌苷项下的方法测定，计算，即得。液，照肌苷项下的方法测定，计算，即得。u 色谱分析法色谱分析法高效液相色谱法、气相色谱法高效液相色谱法、气相色谱法 举例举例维生素维生素C 注射液注射液怎么测定的含量？怎么测定的含量？一、背景知识 高效液相色谱概述 基本原理 液相色谱仪二、 HPLC仪器 高压输液泵 梯度淋洗装置 进样装置 高效分离柱 高效液相色谱检测

2、器三、实验仪器、设备与药品 液相色谱仪测定的检测流程 数据采集与分析 测定测定维生素维生素C的含量的含量高效液相色谱法背景知识背景知识v概念概念v 色谱法色谱法: :利用组分在利用组分在两相两相间分配系数不同而进行分离的技术。间分配系数不同而进行分离的技术。v 高效液相色谱法（高效液相色谱法（high performance liquid chromatographyhigh performance liquid chromatography，缩写缩写 HPLCHPLC），又译高效液相层析法，以前曾指高压液相层析），又译高效液相层析法，以前曾指高压液相层析法（法（high pressure l

3、iquid chromatographyhigh pressure liquid chromatography），用来分离液），用来分离液体混合物，以确认并量化各个成分的比例。体混合物，以确认并量化各个成分的比例。高效液相色谱仪高效液相色谱仪l 检测的分辨率和灵敏度高，检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，分析速度快，重复性好，定量精度高，应用范围广。定量精度高，应用范围广。l 适用于分析高沸点、大分适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差子、强极性、热稳定性差的化合物的化合物。l 价格昂贵，要用各种填料价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大柱，容量小，分析生物大分子和无机离

4、子困难，流分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居动相消耗大且有毒性的居多。多。背景知识背景知识特点：特点：v色谱原理色谱原理v HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。v固定相材料固定相材料v 微粒硅胶：pH范围是 27.5，若过碱（pH8），硅胶会粉碎或溶解；若过酸（pH1），键合相的化学键会断裂。v 优点： 硅胶的强度大；微粒硅胶的小孔结构和表面积易人为控制；化学稳定性好。 基本原理基本原理 样品易溶，且溶解度尽可能大。样品易溶，且溶解度尽可能大。 化学性质稳定，不损坏柱子。化学性质稳定，不损坏柱子。 不妨碍检测器检

5、测，紫外波长处无吸收。不妨碍检测器检测，紫外波长处无吸收。 粘度低，流动性好。粘度低，流动性好。 易于从其中回收样品。易于从其中回收样品。 无毒或低毒，易于操作。无毒或低毒，易于操作。 易于制成高纯度，即色谱纯。易于制成高纯度，即色谱纯。 废液易处理，不污染环境。废液易处理，不污染环境。流流动动相相选选择择原原则则基本原理基本原理流动相流动相HPLC仪器:液液相色谱仪相色谱仪(1) (1) 高压输液泵高压输液泵主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：15015035035010105 5 PaPa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（1010mm），），

6、液液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性(2) (2) 梯度淋洗装置梯度淋洗装置外梯度外梯度: 利用两台高压输液泵，将两利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。后进入色谱柱。内梯度内梯度:一台高压泵一台高压泵, 通过比例调节通过比例调节阀阀,将两种或多种不同极性将两种或多种不同极性

7、的溶剂按一定的比例抽入高的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。压泵中混合。液相色谱仪液相色谱仪(3) (3) 进样装置进样装置 流路中为高压力工作状态，流路中为高压力工作状态， 使用耐高压的六通阀进样装置使用耐高压的六通阀进样装置 液相色谱仪液相色谱仪FLASH动画(4)(4)高效分离柱高效分离柱柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径16 mm，柱长柱长540 cm。发展趋发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。液相色谱仪液相色谱仪(5) (5) 高效液相色谱检测器高效液相色谱检测器紫外光度检测器（紫外光度检测器（UVUV）：）：最小检测量最小检测量1

8、010-9-9gmLgmL-1-1，对流量和温度的波动对流量和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱。不敏感，可用于梯度洗脱。 FLASH动画实验仪器、设备与药品实验仪器、设备与药品仪器仪器 Agilent 1100 Agilent 1100 液相色谱仪一套液相色谱仪一套试剂试剂 乙腈乙腈 水水 样品样品 色谱工作站界面状态工具条上浮工具系统图系统状态状态工具条上浮工具系统图系统状态液相色谱仪测定的检测液相色谱仪测定的检测流程流程仪器自检仪器自检打开工作打开工作站电源站电源进样进样 记录记录计算计算冲洗色谱柱冲洗色谱柱结束进样结束进样关闭主机关闭主机电源电源关闭关闭电脑电脑开电脑开电脑设定参数设定参数调调参数参数数据采集与分析数据采集与分析思考题思考题v1 1高效液相色谱法有高效液相色谱法有哪些特点？高效液相哪些特点？高效液相色谱仪主要由哪几大色谱仪主要由哪几大系统组成？系统组成？v 高效液相色谱法特点是速度快、分辨率高、灵敏度高、色谱柱可反复使用、样品量少。高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。v2 2在高效液相色谱中，在高效液相色谱中，为