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文档简介

1、基因的分离技术基因的分离技术演讲人：组演讲人：组 员：员：2. cDNA的分离与纯化 什么是什么是cDNA?依赖依赖RNA的的DNA聚合酶聚合酶核糖核酸酶核糖核酸酶H活力活力依赖依赖DNA的的DNA聚合酶聚合酶获得高纯度获得高纯度RNA 在一小时之内分离在一小时之内分离RNA在在3小时内分离小时内分离DNA或蛋白或蛋白质质在在4摄氏度条件下稳定保摄氏度条件下稳定保存两年以上存两年以上 4. 基因文库的应用 建立和使用基因文库是建立和使用基因文库是分离基因分离基因，特别是分离高等真核生物基因的特别是分离高等真核生物基因的有效手段。有效手段。 如果一个哺乳动物的基因组是如果一个哺乳动物的基因组是

2、3109碱基对，直接从细胞中提碱基对，直接从细胞中提取并分离出某一特定基因的取并分离出某一特定基因的 DNA片段在技术上是很困难的。片段在技术上是很困难的。但是在基因文库中，不同的但是在基因文库中，不同的 DNA片段都分别在不同的克隆中片段都分别在不同的克隆中扩增了，只要有该基因的探针存扩增了，只要有该基因的探针存在，则从许多克隆中筛选一个所在，则从许多克隆中筛选一个所需的克隆是一项比较简单的工作。需的克隆是一项比较简单的工作。SDS阴离子去垢剂SDSSDS(十二烷基硫酸钠)是阴离子去垢剂，本身带负电荷的SDS能够与蛋白质的疏水区相结合，使蛋白质伸展和解聚，并使蛋白质呈一致的强负电荷，从而消除

3、了不同蛋白质分子之间的电荷差异。在收集细胞蛋白的操作中，它主要作用有二：1、能改变细胞的表面张力而使细胞膜破裂，效果很强很迅速；2、可以使蛋白质变性而使其与DNA分离，在收蛋白最后一步操作中离心下来的就是基因组DNA，上清液中即使有点RNA也会很快降解。在1XSDS蛋白裂解液中，SDS的终浓度为2%，即每50ml裂解液中含有1gSDS。 SDS的应用广泛，蛋白质收集、Western Blot里上样乃至SDS-PAGE凝胶电泳过程中都会应用到。然而SDS是离子型去垢剂会导致蛋白质变性，所以对于要检测蛋白质间相互作用的免疫沉淀(IP)之类的实验就不能使用了。SDS是离子型表面活性剂。 它主要功能有： (1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。 (2)解聚细胞中的核蛋白。 (3)SDS能与蛋 白质结合成为R-O-SO3R-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的

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