实验四、细胞融合

1、人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合，也术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。这一技这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。种培育的重要手段。细胞融合过程两个细胞的细胞膜从接触、重细胞融合过程两个细胞的细胞膜从接触、重排到形成细胞桥的过程示意图排到形

2、成细胞桥的过程示意图1 1、鸡红细胞悬液的制备、鸡红细胞悬液的制备: :注射器内先吸入注射器内先吸入2 ml 2 ml AlseverAlsever溶液，从鸡翼下静脉取溶液，从鸡翼下静脉取2ml2ml鸡血，注入离心鸡血，注入离心管，再加入管，再加入6 ml 6 ml AlseverAlsever溶液，使之成为溶液，使之成为1 1：4 4的悬的悬液。液。 ( (AlseverAlsever溶液：葡萄糖溶液：葡萄糖2.05g2.05g，柠檬酸钠，柠檬酸钠0.80g0.80g，NaClNaCl 0.42g 0.42g，溶于，溶于100ml100ml双蒸水中。双蒸水中。AlseverAlsever液能

3、液能起到抗凝作用又能起到保护作用起到抗凝作用又能起到保护作用, ,可用来暂时保存可用来暂时保存细胞细胞。) )2 2、取鸡红细胞悬液、取鸡红细胞悬液1ml1ml，加，加5ml5ml生理盐水，生理盐水，1200r/min1200r/min离心离心5min5min，去上清（注意：用吸管吸出，如直接倒，去上清（注意：用吸管吸出，如直接倒会损失红细胞），再以上述条件离心洗涤两次。会损失红细胞），再以上述条件离心洗涤两次。3 3、将沉淀加入、将沉淀加入5ml GKN5ml GKN液，混匀。液，混匀。 （GKNGKN溶液溶液：NaClNaCl 8g 8g，KClKCl 0.4g 0.4g，Na2HPO42

4、H2O Na2HPO42H2O 1.77g1.77g，NaH2PO4H2O 0.69gNaH2PO4H2O 0.69g，葡萄糖，葡萄糖2g2g，酚红，酚红0.01g0.01g，溶于，溶于1000ml1000ml水中。水中。维持维持pHpH与渗透压，保证与渗透压，保证细胞的正常形态和活性细胞的正常形态和活性，使成为细胞悬液，便于融，使成为细胞悬液，便于融合。合。）4 4、计数，稀释至每毫升、计数，稀释至每毫升1.51.510106 6个。个。( (可选步骤可选步骤) )5 5、悬液、悬液1ml1ml放入放入3737预热。同时将预热。同时将50%PEG50%PEG液液预热预热（注（注意：否则意：否则PEGPEG冷却会有结晶析出，影响浓度）。冷却会有结晶析出，影响浓度）。 （5050PEGPEG溶液溶液：称取一定量的：称取一定量的PEGPEG（WMWM40004000）放）放入烧杯中，沸水浴加热，使之熔化，待冷却至入烧杯中，沸水浴加热，使之熔化，待冷却至5050时，加入等体积预热至时，加入等体积预热