血红蛋白的提取和鉴定

1、课题五课题五-血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离蛋白质的提取和分离一般分为四蛋白质的提取和分离一般分为四步：步：1、样品处理、样品处理2、粗分离、粗分离3、纯化、纯化4、鉴定、鉴定1.1.样品处理样品处理血血液液血浆血浆水分水分固体物质固体物质血浆蛋白血浆蛋白无机盐无机盐磷脂磷脂葡萄糖等葡萄糖等血细胞血细胞白细胞白细胞血小板血小板红细胞红细胞（最多）（最多）血红血红蛋白蛋白（ ）两个两个a肽链肽链两个两个肽链肽链共四条肽链共四条肽链90目的：去除目的：去除杂蛋白杂蛋白方法：方法：低速短时间低速短时间离心去除血浆，再加离心去除血浆，再加入入生理盐水生理盐水洗涤，离心。洗涤，离心。1.1.样

2、品处理样品处理1）目的：释放血红蛋白）目的：释放血红蛋白 加（加（ ）到（）到（ ）体积，）体积，再加再加40体积的（体积的（ ）（）（ 溶解细胞溶解细胞膜膜） ，置于（，置于（ ）上充分搅拌）上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）分钟（加速细胞破裂）, 细胞破裂释放出细胞破裂释放出血红蛋白血红蛋白.2) 分离血红蛋白溶液：以分离血红蛋白溶液：以2000r/min的速度的速度离心离心10 min ，试管中的溶液分为，试管中的溶液分为4层层:原血液原血液甲苯甲苯磁力搅拌器磁力搅拌器蒸馏水蒸馏水1.1.样品处理样品处理分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液有机溶剂有机溶剂 （无色透明的甲苯层）（无色透明的甲

3、苯层）脂类物质脂类物质 （白色白色脂溶性物质沉淀层）脂溶性物质沉淀层）血红蛋白溶液血红蛋白溶液 （红色透明液体）（红色透明液体）红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物）红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物）2 2、粗分离、粗分离除去样品中分子量较小的杂质除去样品中分子量较小的杂质用到的方法用到的方法-透析透析20mmol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液1mL透析透析血红蛋白血红蛋白3、纯化、纯化a方法：方法： 凝胶色谱法凝胶色谱法 凝胶：凝胶：是是一些微小一些微小的的多孔球体多孔球体（内含许多贯穿（内含许多贯穿的通道的通道) )，由多糖类化合物构成，由多糖类化合物构成, ,如葡聚糖、琼脂如葡聚糖、琼脂糖。糖。 b原理：

4、是根据原理：是根据相对分子质量的大小相对分子质量的大小 分离蛋白质的有效方法分离蛋白质的有效方法。c 凝胶色谱的凝胶色谱的具体过程具体过程样品的加入和洗脱样品的加入和洗脱 大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；流动快； 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。流动慢。4、鉴定、鉴定原理：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的原理：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移迁移 率率取决于它所带取决于它所带净电荷净电荷的多少以及的多少以及分子的分子的大小大小等因素。等因素。为了消除为了消除净电荷对迁移率的影响，净电荷对迁移率的影响

5、，可以在可以在凝胶中加入凝胶中加入SDSSDS（十二烷基磺酸钠）。（十二烷基磺酸钠）。方法：电泳方法：电泳电泳图结果练习巩固1、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的研究和应用越来越深入，首先要白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是做的一步是A 弄清各种蛋白质的空间结构弄清各种蛋白质的空间结构B 弄清各种蛋白质的功能弄清各种蛋白质的功能C 弄清各种蛋白质的合成过程弄清各种蛋白质的合成过程D 获得高纯度的蛋白质获得高纯度的蛋白质2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是关于蛋白质的叙述，正确的是A 相对分子

6、质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质B 相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质C 相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质D 二者根本无法比较二者根本无法比较3、使用、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A 电荷的多少电荷的多少 B 分子的大小分子的大小C 肽链的多少肽链的多少 D 分子形状的差异分子形状的差异4、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是A 调节调节pH B 维持红细胞的能量供应维持红细胞的能量供应C 防止微生物生长防止微生物生长 D 防止血液凝固防止血液凝固5、一分子血红蛋白最多可携带的、一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子分子数和数和CO2分子数分别是分子数分别是A 4、2 B 4、4 C 2、1 D、1、16、记住样品处