D-A02060S-022RocheCobasz480荧光定量基因扩增仪作业指导书

1、浙医二院检验科分子检验 SOPSOP年度回顾AnnualReviewAnnualReview日期回顾者签字日期回顾者签字修订页RevisedRevised日期修订回修订内容修订者审核者阅读人员签字口修改口新增口删除口修改口新增口删除口修改口新增口删除口修改口新增口删除口修改口新增口删除口修改口新增口删除目的保证RocheCobaSZ480RocheCobaSZ480荧光定量基因扩增仪的正确和正常使用。适用仪器RocheCobasRocheCobas?Z Z480480荧光定量基因扩增仪。SOPSOP使用和变动该作业指导书适用于本专业人员，使用前应认真阅读，在专业组组长指导下执行。若仪器设备和测

2、定方法或试剂性能改变，应及时修订该SOP文件，可由任一使用该SOP的工作人员提出改动，并报专业组组长审核，经技术负责人批准，签字生效。仪器使用操作4.1开机.2打开Cobas.Z480荧光定量基因扩增仪的电源开关，仪器自检。依次打开电源、电脑显示器和电脑主机电源开关，进入计算机操作系统WindowsXP。.3双击图标,打开Cobas.Z480UDF软件，登陆用户名Per,密码Pcr480。检测样品操作4.2.1打开扩增仪抽屉，将样品板放入仪器，缺角位置对准金属槽的左上角，然后闭合抽屉。4.2.2打开Cobas?Z480UDF软件，如果软件内已有保存好的模板，点

3、击NewExperimentfromTemplate直接调用模板程序。如果需要建立模板，请按照行实验。仪器软件使用4.3.1建立实验模板4.3所示步骤建立模板，然后进点击软件主界面中的NewExperiment,进入程序设定界面。Al画根据实验所用的检测模式选择“DetectionFormat，“BlockTypePlateID,(optional)和ReactionVolume”。DZ48LI三1 14JvsrSfvftrn4JvsrSfvftrnQ QIUIUIRe-Re-M MDIMDIM|Ci*+n*|Ci*+n*避UlKfclfiliBUlKfclfili

4、BflairIU|naflciiMiVnlumvIU|naflciiMiVnlumvjjjjLjLjININ中.r*i.r*iqpdqpd .An-.An-”.kkr4.kkr4 一一1工加.TumpHrMurfeTkiqaH.TumpHrMurfeTkiqaH.)IUmpRMr)IUmpRMrftc.ffff Oi-rgOi-rg3 3 K KlaiqBtr9Mv.laiqBtrH口“WliSS3ftp01*1Sonpl.i212耳Hl，1i?cz-Mroi-：alibEsitotUrknn-ir.UiJfcnoEi点击“Experimentvnttnrfvnttnrf,模块，

5、回到程序设定界面。如果已经加载样本，则窗口右下方的“StartRun”为可点击状态，点击即开始运行。IsLsflhtCjfclerrdtaiEL.OUbZ!?IsLsflhtCjfclerrdtaiEL.OUbZ!?iln12LWlHdOrW；VHVHH H洲L/gktQrcL/gktQrc加r r4 4加384384/ /HotHot|1N|1NEWEWExpErimeritExpErimerit。鼠通b b后日职MyCoimpifterTRC&alileMyCoimpifterTRC&alileIHer:SateiHAdminIHer:SateiHAdmin0

6、mpiT0mpi0 0幅J JndPraDFigrni1ndPraDFigrni1+1(+1(CyclnCyclnI5I5乜RurRurE Eionion士口口14:14:IBtl?TheriB-ate-iIBtl?TheriB-ate-i tnetneI IT T. .de-tinAd.Svlxchcoluc.c-raupordefine-de-tinAd.Svlxchcoluc.c-raupordefine-J J E E-L-LC C单工.11.11日亭 3tnCMfuivpl*tnCMfuivpl*日匚IOE一E.eEMLFN5gwi-.ivT-iN5gwi-.ivT-ir rrnrn

7、：3tiiSi31id3tiiSi31idUnUn工物EIkEIkHUHEFVkK4lEFVkK4lRunRunHodgiHodgiISampltfESampltfEdimrdimrHlnld(hh:mm3KjRnmpHlnld(hh:mm3KjRnmpRainfArquikiEiRainfArquikiEi口n1n1相nrnrTargetTargetI中日同TargnlfQArquisiliAnMndnTargnlfQArquisiliAnMndn4.3.4分析数据:在“Creatnewanalysis下拉框中选择分析的类型并双击，在跳出的对话框中从各下拉框中分别选定分析的范围

8、、分析模式和分析的程序，并可命名该分析。Air丛i绝对定量分析：自动法（2ndDerivativeMaximum二次最大导数法）点击“Calculate查看结果。其中Threshold表示阈值，Baseline表示基线。RdURdUEiav.LaEiav.LaFrMHtwFrMHtwSluniidiriSluniidiri5 5 rnplnrnplnJlurigtnlniIncJlurigtnlniIncTHrnpIdliTHrnpIdli,模块。MQIIJHJC;11ym11ym. .pywpyw回tyaterviArimiintyaterviArimiinHi*e/| |Q

9、QOJUIOJUI/F/FL L L LW W|W|W0 0巴n n；“MlMl卜WCvwi4luniFillerCvmhFillerCvmhQrihviGiiwlLjJQrihviGiiwlLjJ5.7hw*rhw*rv i i”1 1415injiiyrgr,415injiiyrgr,耳中OnEH HKt|门iE-I点击左侧“Analysis；：二二M；七-，,看 milrls-i3111-1Tamilrls-i3111-1Ta一篮篮篮二二二N N43S43S驹项,x,x总,取,55*1155*1MZWiI*C4lMZWi:刷nwuhiw:HyruHpiMrflumTikib

10、lHnwuhiw:HyruHpiMrflumTikiblH1 1占AdnlnAdnlnikmiKloihikmiKloih1 1：少IEIE二IAhotEPHlh5*AhotEPHlh5*LogCmcaNiMmLogCmcaNiMmriEimLtlcswwEimLtlcsww1 1: :W*W*口414414hidhidl*imrl*imr AnikinAnikin|l&5i|l&5i口WLDtfEELFerilYQtl-uFlFiqWLDtfEELFerilYQtl-uFlFiqD DM M; ;岫嗝!QUQ*QUQ*司HlqbLHlqbL nlnl dHdHncrncrS-

11、arnvi*nirpetadrS-arnvi*nirpetadrL LE EA AQIQIrPwrPwHdMHHdMH&国爆应ffWrrmiiin!EEEEEEEEEEB! !PuriitWFPuriitWF口HrInHrInHiHfcdHidHiHfcdHid3 3O O3L3LE E1 1L LE E5La45La44uijLi*4uijLi*QA A14MLt3HLO3a14MLt3HLO3aarparpL LE ELDA.L1LDA.L13 3F FL LT TL LI3JnjLaLZ1I3JnjLaLZ1L LL L LJlLJlx xL4L4I II IIIIIM MLsm

12、bLsmb4 4的叵文件编号：D-A020603-S-022D-A020603-S-0225f5f MmteMmte浙医二院检验科分子检验 SOPSOP4.3.4,4相对定量分析.1在跳出的对话框中选择合适的选项：推荐在AutoPair选择框前打勾。.2如果是在同一RUN中包含有Reference,则直接进入后一的界面；如果Reference和Target不在同一块板上运行，则调用外部Reference数据后进入后一界面。.3结果图中默认扩增效率为“2”；如果要进行效率校准的相对定量分析，并且relativestandard包含在本实验中，点击Calc

13、ulate”进行标准曲线的计舁。.4可分别点击Target、Reference、Paring、Charts和Result模块查看目标基因， 参考基因，配对（如果在3.3.1中没有选择AutoPair,则在此模块中进行手动配对），图表和最后相对定量的结果。（notes：点击Result、Paring或Charts模块中任意一个Calculate就可得到计算结果） UqhitLyclEfMBngaflwwEFCFCI IHSCHSC3.ZJQ.M1Z基因分型分析Saveasext:将本次实验的标准曲线存为外标准曲线AutoGroup:自动分组InMnumflotVir

14、tualL&ghtCyder48DJ04JMatCinnededResult刈SS i|jleT/pEi|jleT/pEPaaS-am|ileMameS-am|ileMame邙MedianMedianloncentraloncentraMarmallzMarmallzNormalliedNormalliedulllrlicliDH/CorreoElc上H HJIJIilinilinR RSTDSTDRatinRatinRalitnSTDRalitnSTDTargetCalxTargetCalx0101l lr r（匕d1md1m匚2B-672B-67里 H HEETETIJEETETI

15、JCECEC CP11P11H HFCalibratGET23.13FCalibratGET23.13Hl/IlTtrgtVnknRlHl/IlTtrgtVnknRlr r感目事用以，1 1a.02g.oza.02g.oz4 4由守ETET1-17E-31-17E-31.ni1.ni0.0S1/11/1曼R RE E工EtwEtwg gUIlUIlr rKSampleKSample1 123.7323.73Be/IfrBe/IfrTargetUDknTargetUDknHH；SampleSampleZ32.55Z32.55StttttrtTICtUTA.nSWnpItStttttrtTICtU

16、TA.nSWnpIt2 2；3.793.79Z.3DI-32-56E-2-56E-OuOu1212.1i/ii/iBll/IllTarsetVDknBllBll/IllTarsetVDknBllr rESample327.2:2ESample327.2:2a.07a.071.96E-31.96E-33.533.530 0加1$1$1/11/1?.e?.eCErenCEren ：e%je%j111,111,iSapLEiSapLE3 323233232日】专/rif/rifTfirTfirq qVnVn幡野曰4 4QQ QQ Qa11/1.1/1.0Windriw:mentmentD玳ah肌My

17、CcmputerMyCcmputer”冏日与1111| |DemoDemoR RB BI IQuijinlQuijinlIlsur:写”I IEVTIEVTIAdminAdminRereraiiicRereraiiic PairinPairing gCliad?Cliad?ResultsAnlysis|PelativeQuantifIcaLtionJotwithout曰tajid01rdsInfaiirniilinnTargelSatiipleSatiiplefdiilorfdiilor身必配EdiWrEdiWrRelativeQuantitiiG3tianRjesullsRelativeQu

18、antitiiG3tianRjesulls二Noles匚aloulMeF?匚IMninafesd1.M1:IUHE-1H1z!1O0E3-口.LoncerlialsinSi&inMvIlyIn-run:标准品包含在本次实验中External:调用外标准曲线.2点击“Calculate进行结果计算LgH5Her&i盹写而Mrurdfe.tiM!L.OXibZSInrsIriJirnrnl:VirtuInrsIriJirnrnl:VirtuH H11nghlCyclEr4fln1R411nghlCyclEr4fln1R4; ;(NotCflnncclEd(NotCfl

19、nncclEdWindow:Window:IDIDEUKIEUKIGBnalypingGBnalyping11|i11|iS-dmplcKS-dmplcKRnuilMRnuilMIncludi-CulviPusN-drnifIncludi-CulviPusN-drnif3回3引回回A5AShlABAB以B5B5HeitScEkDdacdvtRepl,HeitScEkDdacdvtRepl,口口士士HeitHeit耻：gu:gu:OfHtUOfHtU耳ETHepl.oETHepl.o 目didi匕ScarRep1ScarRep1a aDtBeltStarMultDtBeltStarMult5 5

20、匕后口。d dndmmtPepl.ndmmtPepl.”FleFleU U知0l坤曲I I电|巾21213 3幅FillerCartib.fColorCortifiFillerCartib.fColorCortifiII8幅皿由；l日四切口，12m|I|(In-riinj(In-riinj|yITmcalling.1确认熔解曲线峰的数目wj jMaxPeaksMaxPeaksL L，.工J J，.由/1/1MaxPeaksMaxPeaks就14.IHybProbeHybProbeL.L.EQrrnalEQrrnal_j_jSYSY前GrGr荷I IFormalFor

21、malSimpleProbeSimpleProbe.3点击“Calculate”进行结果计算，并通过选择下述各项查看各熔解峰的详细情况。4.一=i=i= = 4 4-Display-DisplayShouldersFTmShouldersFTm口AreaArea何HeightHeight口WidthWidthf fIColorComp颜色补偿.1确认荧光数目，Experiment选项卡下，需要做几个荧光的颜色补偿就在DetectionFormat下选择相应的探针。AnAn七格力自typitDGfoeTinRunffsUtypitDGfoeTinRunf

22、fsU3 3 日SultSaelSultSael! !IriruirniiliIriruirniiliR$9li电GEWRESeUlnqe解立玄说1657g1657g及TerTWEf-ature-jG GKJUKJUPSPSLDFLDF R RV V MeltingFcolks;MeltingFcolks;DIKDDIKD口iDEMiturEf*iDEMiturEf*卜NewCall|i.FShoStantlar结果报告保存实验数据后，在链接有打印机的情况下，“Report”模块变成激活状态，点击“Report”。在树形folder中选择报告所需的内容，点击“Generate”产

23、生报告并打印。 浙医二院检验科分子检验 SOPSOP.2就选择wateroEjcprlmemGStep1:SelectWtorWtowAbsQuantR-slQuantScanningitColorCompMeltGenoEndptGenoSeteclFilterCombinaiiocgP465510F533580SubsetEditorrSlep2:SelectSampleB加加毓匹I位ampleEditorColorIRepI01SennipleNameOominantChannelSample3FAHVIC/EfEK/Y611OW555TFTF1 .3分析，

24、首次做在分析时选择ColorComp,分析后存为模板。-CreateNewAnalysis-CreateNewAnalysisQuaeQuae匕方EHEHj/vj/v小r:r:工YEYEMaxMax| |AbsQuant/FiPointsAdvancedRelativeQuanTificAtiorLAbsQuant/FiPointsAdvancedRelativeQuanTificAtiorLB BSBSBI IC CReRelativelativeQuanriXicationColorCompensationEndpointGenotypingGeneScQuanriXicationColorCompensationEndpointGenotypingGeneScanningMeleanningMeleCurveCurveSenotypingTmCallingSenotypingTmCalling之后在分析时直接选择InDatabase调用相应模板即可。样本编辑，SampleEditor选项卡下选择ColorComp的workflow,然后将对应的样本选择相应的DominantChannel,每个荧光至少3个复孔，BufferAlM