基因探针分子杂交技术学习教案_第1页
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文档简介

1、会计学1基因基因(jyn)探针分子杂交技术探针分子杂交技术第一页，共19页。第1页/共18页第二页，共19页。第2页/共18页第三页，共19页。印迹将样品在凝胶将样品在凝胶上分离，然后上分离，然后将样品通过将样品通过“影印影印”的方式的方式转移到固相支转移到固相支持物上（如滤持物上（如滤膜）。膜）。杂交将已印迹有样将已印迹有样品的滤膜与带品的滤膜与带有放射性标记有放射性标记或其它标记的或其它标记的探针进行杂交探针进行杂交。结果检测通过放射自显通过放射自显影或显色反应影或显色反应，判断样品中，判断样品中是否有与探针是否有与探针同源的分子。同源的分子。第3页/共18页第四页，共19页。检测样品检测

2、样品(yngpn)DNA的处理的处理电泳分离及变性电泳分离及变性(binxng)处理处理转移并固定到滤膜上转移并固定到滤膜上探针的制备及杂交探针的制备及杂交检测与分析检测与分析第4页/共18页第五页，共19页。第5页/共18页第六页，共19页。变性(binxng)处理通常DNA变性(binxng)的方法：热变性(binxng)、酸碱变性(binxng)、化学试剂变性(binxng) NaOH碱性条件下变性(binxng)凝胶凝胶0.4M NaOH第6页/共18页第七页，共19页。第7页/共18页第八页，共19页。第8页/共18页第九页，共19页。第9页/共18页第十页，共19页。第10页/共1

3、8页第十一页，共19页。第11页/共18页第十二页，共19页。第12页/共18页第十三页，共19页。 洗膜：经过一定的洗涤程序(chngx)将游离的探针分子除去。安装(nzhung)杂交管杂交(zjio)炉第13页/共18页第十四页，共19页。第14页/共18页第十五页，共19页。mRNA的表达水平，或比较不同组织或细胞的同一基因的表达情况。第15页/共18页第十六页，共19页。v 1、基本原理和基本过程与Southern 杂交基本相同v 2、检测对象为蛋白质（或酶）v 3、SDS-PAGE电泳分离v 4、用“抗体-抗原”免疫反应(fnyng)或“DNA-protein”结合反应(fnyng)鉴别滤膜上的蛋白质。第16页/共18页第十七页，共19页。第17页/共18页第十八页，共19页。NoImage内容(nirng)总结会计学。将样品在凝胶上分离，然后将样品通过(tnggu)“影印”的方式转移到固相支持物上（如滤膜）。用限制性内切酶对其进行酶切，至大小不同的DNA片段。通过(tnggu)毛细管虹吸法，将凝胶上的DNA转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上。同位素：3H、35S、32P等。非同位素：地高辛、生物素、荧光素等。地高辛 + 抗地高辛抗体。洗膜：经过一定

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