植物生理学实验

1、植物生理学实验植物组织中自由水、束缚水含量的测定植物组织中自由水、束缚水含量的测定植物组织渗透势的测定植物组织渗透势的测定植物组织水势的测定植物组织水势的测定 硝酸还原酶活性测定硝酸还原酶活性测定 植株硝态氮的测定植株硝态氮的测定 植株磷素的测定植株磷素的测定叶绿体色素的提取、分离及理化性质的鉴定叶绿体色素的提取、分离及理化性质的鉴定叶绿素的分离与吸收光谱叶绿素的分离与吸收光谱叶绿素叶绿素a a、b b含量测定含量测定 植物呼吸强度测定植物呼吸强度测定IAAIAA酶活性测定酶活性测定可溶性固形物及可滴定酸含量的测定可溶性固形物及可滴定酸含量的测定油类种子萌发时脂肪酸含量测定油类种子萌发时脂肪酸

2、含量测定 E1.植物组织中自由水、束缚水含量的测定 一、实验目的：一、实验目的：了解植物组织中水分存在的状态与生命活动的关系，熟悉折射仪的使用。 二、原理及意义：略原理及意义：略 三、仪器设备与试剂试材三、仪器设备与试剂试材 仪器仪器 阿贝折射仪、分析天平、烘箱、钻孔器、 干燥器、称量瓶、移液管等。 试剂试剂 质量浓度65-75 蔗糖溶液 试材试材 新鲜土豆 四、实验步骤：四、实验步骤： 称量瓶洗净烘干备用 土豆洗净打孔切片称重(连瓶，两份) 一号瓶 105烘干直至恒重； 二号瓶加入浓度65-75 蔗糖溶液 放置1-2小时，中间经常摇动 阿贝折射仪测量蔗糖溶液浓度。 五、计算五、计算：自由水含

3、量=？ 束缚水含量=？ 组织含水量=？E2.植物组织渗透势的测定一、实验目的：一、实验目的： 了解植物组织在不同浓度溶液中细胞质壁分离的产生过程及用于测定植物组织渗透势的方法。二、原理及意义：原理及意义：若植物组织细胞内汁液与外界溶液渗透势相同，此时植物组织细胞将近处于初始质壁分离状态。这种外液称为等渗溶液。用一系列梯度浓度外液处理观测植物组织细胞质壁分离现象，就可以大略计算等渗溶液的浓度。三、仪器设备与试剂试材三、仪器设备与试剂试材 仪器仪器 显微镜等 试剂试剂 0.1、0.2-0.7mol/L的的蔗糖溶液 试材试材 洋葱 四、实验步骤：四、实验步骤： 1.配制0.1、0.2-0.7mol/

4、L的的蔗糖溶液浓度梯度； 2.浸入洋葱表皮5-10分钟 3.显微镜观测找到未产生质壁分离的最高浓度和产生初始质壁分离的浓度，算出其平均值即等渗溶液的浓度。 五、计算五、计算 计算公式：s =-RTic 式中s为植物组织细胞渗透势，以bar表示；i为解离系数，蔗糖是1；R为气体常数，0.083 Lbar/molK；T为绝对温度，K（即 273t，t为实验温度）；c为等渗溶液浓度，mol/L。E3、植物组织水势的测定一小液流法 一、实验目的一、实验目的 掌握植物组织水势的测定方法，并了解渗透系统中水势大小是水分移动方向的决定因素。 二、原理及意义：原理及意义：植物生活细胞是一个渗透系统，当将植物细

5、胞或组织放人外界溶液中时，水分将以水势差为动力在两者间流动，最终达到动态平衡。如果植物组织的水势小于外界溶液的水势，植物细胞吸水，使外界溶液浓度增大；反之，植物细胞失水，使外液浓度变小。若植物组织与外界溶液水势相同，将不改变外部溶液的浓度，此时外液的渗透势就等于植物组织的水势。可以利用外界溶液的浓度不同其比重也不同的原理来确定与植物组织水势相同的外液，根据公式计算植物组织的水势。 三、仪器设备与试剂试材三、仪器设备与试剂试材 1 1植物材料植物材料 马铃薯块茎、玉米或菠菜叶片 2 2实验器材实验器材 吸水纸、容量管（或10mL量筒）、试管、带盖青霉素小瓶、胶头细玻璃弯管、移液管、剪刀或打孔器、

6、橡皮塞和软木塞、试管架、温度计和镊子。 3 3实验试剂实验试剂 lmol/L的蔗糖溶液、甲烯蓝粉末。 四、实验步骤：四、实验步骤： 1.外界溶液的配制与渗透作用外界溶液的配制与渗透作用 配制 0107 mol/L 7个梯度的蔗糖溶液各10ml，注入7只试管中，并分别编号，作为对照组。 将7只试管编号，分别从对照组中相同编号的试管中取蔗糖溶液4ml注人各管作为实验组。 用打孔器将马铃薯块茎或玉米等植物的叶片剪成大小相同（约05cm）的小块，切成薄片，每管中投人约占1/4溶液体积的样品，放置 30 min。在此期间摇动试管数次。 用针尖或牙签尖端挑取少许甲烯蓝粉末加入上述各试管中，摇匀，此时溶液为

7、浅蓝色。量大会影响溶液浓度，能够显色即可 2等渗溶液确定等渗溶液确定 用胶头细玻璃弯管从各小瓶中依次吸取少量的浅蓝色溶液，并用吸水纸吸掉胶头弯管外壁上的溶液，然后将弯管伸入相同编号的对照组试管液体中部，缓慢放出溶液一滴，观察蓝色液滴的移动方向（见图）。 若有色液滴向上移动，表明组织失水，使蔗糖溶液浓度降低、比重减小；若有色液滴向下移动，表明组织吸水，使蔗糖溶液浓度升高、比重增大；如果有色液滴静止不动，则表明蔗糖溶液与植物组织水势相等，记录该蔗糖溶液的浓度。过快会影响上浮或下沉的观察效果注意：液滴不能贴壁 五、计算五、计算 计算公式：W =-RTiC 式中W为植物组织水势，以bar表示；i为解离

8、系数，蔗糖是1；R为气体常数，0.083 Lbar/molK；T为绝对温度，K（即 273t，t为实验温度）；C为等渗溶液浓度 注意事项1叶片投入小瓶要快，小瓶及时加盖，防止叶内或小瓶中水分蒸发影响实验结果。2加人实验组的甲烯蓝粉末量不宜过多，以免影响溶液的比重。3胶头细玻璃弯管要各溶液专用，如用一只弯管则应从低浓度到高浓度依次吸取溶液。4释放蓝色液滴时要缓慢，防止过急挤压冲力影响液滴移动。5观察液滴移动状况最好放在一个白色的背景下进行。E4.E4.硝酸还原酶活性测定硝酸还原酶活性测定一、原理 硝酸还原酶（硝酸还原酶（NRNR）是植物氮素同化的关键酶，它催）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体

9、内的硝酸盐还原为亚硝酸盐化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐 。 产生的亚硝酸盐与对产生的亚硝酸盐与对氨基苯磺酸（或对氨基苯磺酸（或对氨基苯磺氨基苯磺酰胺）及酰胺）及萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。下定量生成红色偶氮化合物。 生成的红色偶氮化合物在生成的红色偶氮化合物在540nm540nm波长下有最大吸收波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以产生的亚硝态氮的量表示。一般以NgNgg g1 1h h1 1为为单位。单位。分光光度计；分光光度计；真空抽气

10、泵（或真空抽气泵（或20ml20ml注射器筒）；注射器筒）；天平；单面刀片；天平；单面刀片；保温箱（或恒温水浴）；保温箱（或恒温水浴）；刻度试管（刻度试管（15ml15ml）；移液管；）；移液管；离心管等离心管等二、仪器与设备三、试验试剂 亚硝酸钠标准液： 称取分析纯NaNO2 0.1000g水溶后定容至100ml，吸取5ml用水稀释定容至1000ml，即为每ml含NaNO2 5g5g（亚硝态氮近似1g/ml）的标准液。 0.1mol/L pH7.5的磷酸缓冲液：K2HPO4 19.24g，KH2PO4 2.2g，加水溶解后定容至1000ml。三、试验试剂 1%（W/V）对-氨基苯磺酸溶液：称

11、取1.0g加入25ml浓HCl中，用蒸馏水定容至100ml。 0.2%（W/V）-萘胺溶液：称取0.2g-萘胺溶于25ml冰醋酸中，用蒸馏水定容至100ml。 30%三氯乙酸溶液：75.0g三氯乙酸水溶后定容250ml。 KNO3（0.1mol/L）、异丙醇（1% V/V）、磷酸缓冲液（0.1mol/L）混合液：称3.03g KNO3溶于300ml 0.1mol/L的磷酸缓冲液中，再加3ml异丙醇混匀。四、实验步骤1.标准曲线制作 ： 取6支洁净烘干的15ml刻度试管，以5g（亚硝态氮近似1g/ml）的标准液配制05.0g的系列标准亚硝态氮溶液各各1ml,1ml,分别加入对分别加入对氨基苯磺氨

12、基苯磺酸及酸及萘胺各萘胺各2ml2ml。摇匀后在。摇匀后在3030保温箱或恒温保温箱或恒温水浴中保温水浴中保温15min15min，然后在，然后在540nm540nm波长下比色。以波长下比色。以亚硝态氮（亚硝态氮（gg）为横坐标，光密度值为纵坐标绘）为横坐标，光密度值为纵坐标绘标准曲线或建立回归方程。标准曲线或建立回归方程。 2 2酶反应和酶活性测定酶反应和酶活性测定（1 1）取样）取样 将材料（小白菜、小麦、玉米等作物叶片）洗净，将材料（小白菜、小麦、玉米等作物叶片）洗净，用蒸馏水冲洗，滤纸吸干。在叶片中部打取直径用蒸馏水冲洗，滤纸吸干。在叶片中部打取直径1cm1cm的圆片（或剪成的圆片（或

13、剪成0.50.51.0cm1.0cm2 2的小块）混匀。的小块）混匀。A A 称称0.50.51.0g 1-31.0g 1-3份，放入三角瓶（试管并编份，放入三角瓶（试管并编号）。号）。B B 对照，称对照，称0.50.51.0g 11.0g 1份，放入三角瓶。份，放入三角瓶。 (A (A和和B B最好同重，便于计算。最好同重，便于计算。) )（2 2）酶促反应）酶促反应 A A 向向A A各三角瓶加入磷酸缓冲液混合液各三角瓶加入磷酸缓冲液混合液5ml5ml，KNOKNO3 3 5ml5ml。B B 向向B B三角瓶加入磷酸缓冲液混合液三角瓶加入磷酸缓冲液混合液5ml5ml，蒸馏水，蒸馏水5m

14、l5ml。 然后将所有试管置真空干燥器中接真空泵抽然后将所有试管置真空干燥器中接真空泵抽气，直至叶片沉在瓶底。将各三角瓶置气，直至叶片沉在瓶底。将各三角瓶置3030下下于黑暗处保温于黑暗处保温30min30min，准确记录反应时间。，准确记录反应时间。（3 3）比色）比色 将各三角瓶取出静置将各三角瓶取出静置2min2min，吸取上清液，吸取上清液1ml1ml加入另一组试管，按标准曲线做法进行显色加入另一组试管，按标准曲线做法进行显色测定，从标准曲线查出或回归方程计算出其测定，从标准曲线查出或回归方程计算出其亚硝态氮含量（处理减对照），计算酶活性亚硝态氮含量（处理减对照），计算酶活性（NgNg

15、g g1 1h h1 1）。）。 酶活性：酶活性： C C反应液催化产生的亚硝态氮总量（反应液催化产生的亚硝态氮总量（gg） V V1 1提取酶液时加入缓冲液等后的总体积（提取酶液时加入缓冲液等后的总体积（mlml） 10ml10ml V V2 2酶反应时加入的粗酶液体积（酶反应时加入的粗酶液体积（mlml）1ml1ml W W样品重量（样品重量（g g） t t反应时间（反应时间（h h小时小时,0.5,0.5） t/21WVVCE5植物组织中硝态氮的测定 一、原理及意义：植物体内硝态氮的含量，不仅反映出植物的氮素营养状态，还有助于鉴定果蔬及其加工品的品质硝态氮必须还原成NH3才能参加植物体

16、内的有机化合物的合成还原的部位因植物类别和环境条件而异，可以在根部，也可以在枝叶. 硝酸盐还原为亚硝酸盐（植物体内由硝硝酸盐还原为亚硝酸盐（植物体内由硝酸还原酶（酸还原酶（NRNR）催化）。）催化）。 产生的亚硝酸盐与对产生的亚硝酸盐与对氨基苯磺酸（或对氨基苯磺酸（或对氨基苯磺酰胺）及氨基苯磺酰胺）及萘胺（或萘基乙萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。氮化合物。 生成的红色偶氮化合物在生成的红色偶氮化合物在520nm520nm波长下有最波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定。大吸收峰，可用分光光度法测定。分光光度计；分光光度计；真空抽气泵（

17、或真空抽气泵（或20ml20ml注射器筒）；注射器筒）；天平；单面刀片；天平；单面刀片；保温箱（或恒温水浴）；保温箱（或恒温水浴）；刻度试管（刻度试管（15ml15ml）；移液管；）；移液管；离心管等离心管等二、仪器与设备三、试验试剂 醋酸溶液；醋酸溶液；KNO3标准液；标准液； 混合粉剂混合粉剂 实验材料洗净的小白菜、小麦、玉米等实验材料洗净的小白菜、小麦、玉米等作物叶片作物叶片四、实验步骤1.1.标准曲线制作标准曲线制作 ： 取取5 5支洁净烘干的支洁净烘干的15ml15ml刻度试管按顺序分别加入刻度试管按顺序分别加入25ug/ml25ug/ml的的KNOKNO3 3 8080、16016

18、0、240240、320320、400ul,400ul,再分别再分别加蒸馏水加蒸馏水920920、840840、760760、680680、600ul,600ul,即配成即配成2 2、4 4、6 6、8 8、10ug/ml10ug/ml的系列标准硝态氮溶液的系列标准硝态氮溶液; ;每支试管再每支试管再加入加入9ml 9ml 醋酸溶液醋酸溶液,0.2g试剂试剂混合粉剂混合粉剂，剧烈，剧烈摇匀后在摇匀后在3030保温箱或恒温水浴中保温保温箱或恒温水浴中保温10-30min10-30min，去除粉膜，取清液在去除粉膜，取清液在nmnm波长下比色。以硝态波长下比色。以硝态氮（氮（gg）为横坐标，光密度

19、值为纵坐标绘标准曲）为横坐标，光密度值为纵坐标绘标准曲线。线。 . .组织液中硝态氮含量的测定组织液中硝态氮含量的测定 取5g新鲜植物材料，切碎，于研钵内加少量蒸馏水研磨，洗入量筒或三角瓶，振荡-分钟（或用榨汁器尽力榨出尽汁液）， 定容至1毫升，澄清，取上清液1毫升按标准曲线制作方法测定硝态氮（比色时如样品液颜色太深，可以适当稀释10-20倍），按下列公式计算含氮量： 植物组织中硝态氮含量（硝态氮含量（ug/g）=C*V 为为标准曲线上查得的组织提取液所含硝态氮浓度硝态氮浓度（ug/ml） 为为g植物组织所制备的提取液体积（植物组织所制备的提取液体积（ml）此次为）此次为2. E6.植株磷素的

20、测定植株磷素的测定v一、原理与意义v材料中的有机物经酸氧化分解，使磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。此化合物经-1.2.4氨基奈酚磺酸还原成兰色化合物-钼蓝。用分光光度计在波长660nm处测定钼蓝的吸光值，以测定磷的含量。反应式为：H3PO4+12（NH4）3MoO4+21HNO3（NH4）3PO412MoO3+21NH4NO3+12H2O（NH4）3PO412MoO3钼蓝-1.2.4氨基奈酚磺酸二、实验试剂 1. 50g/mL标准磷溶液：（称取0.2195g分析纯KH2PO4）溶于400mL去离子水中，加入5mL浓硫酸，然后转入1L容量瓶中定容(摇匀）。 2. 钼酸铵-硫酸混合溶液：

21、2.5%钼酸铵和3mol/L硫酸等体积混合。 3. -1.2.4氨基奈酚磺酸溶液：将 0.25 -1.2.4氨基奈酚磺酸 ,15g NaHSO3及0.5gNa2SO3溶于100ml蒸馏水中。使用前加水混合均匀。三、实验步骤 1. 绘制标准曲线：取上述标准磷溶液配成浓度为0，10，20，30，40，50g/mL，分别取1mL于试管中，各加入钼酸铵-硫酸混合溶液3.5ml、-1.2.4氨基奈酚磺酸0.5ml，摇匀，37。C保温15-25min。选择660nm波长，用光径1cm比色杯，以浓度0为参比溶液，测得各标准溶液的光密度。以磷的浓度为横坐标，光密度为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。 2. 组织

22、中磷含量的测定：取小白菜功能叶柄，洗净吸干表面水分后，称取5g置于研钵中，加少许石英砂及5mL蒸馏水研磨，将匀浆移置50mL，将研钵中残渣一并洗入，（或用榨汁器尽力榨出）然后加水至刻度。吸取组织提取液1mL两份于洁净的试管中，再上述同样条件下测其光密度，根据光密度值，从标准曲线上即可查出试液的浓度。 P=C(V/W) 式中：C为提取液的磷含量（g/mL） V为提取液的体积（mL） W为样品（g）四、注意事项 注意在实验时不可待各管都加完-1.2.4氨基奈酚磺酸以后再同时混匀，应加一管，混匀一管，保温一管，力求各管的无机磷与还原剂反应时间一致。 E7.E7.叶绿体色素的提取、分离及叶绿体色素的提

23、取、分离及理化性质的鉴定理化性质的鉴定一、原理 叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a a和叶绿素和叶绿素b b）和黄）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。这两类色素都色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。溶剂提取。 提取液可用色谱分析的原理加以分离：因吸附剂对不提取液可用色谱分析的原理加以分离：因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同的分中

24、各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。种色素分开。 二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：菠菜、小白菜叶片（一）材料：菠菜、小白菜叶片（二）仪器设备（二）仪器设备研钵；漏斗；三角瓶；剪刀；滴管；培养皿（直研钵；漏斗；三角瓶；剪刀；滴管；培养皿（直径径11cm11cm）；康维皿或平底短玻管；圆形滤纸（直）；康维皿或平底短玻管；圆形滤纸（直径径11cm11cm）（三）试剂（三）试剂8080丙酮；丙酮；100100丙酮、石英砂；碳酸钙粉；丙酮、石英砂；碳酸钙粉；推动剂：按石油醚；丙酮：苯

25、（推动剂：按石油醚；丙酮：苯（10:2:110:2:1）比例配）比例配制（制（V VV V）。）。三、实验步骤 1. 1. 叶绿体色素的提取叶绿体色素的提取（1 1）取菠菜新鲜叶片）取菠菜新鲜叶片4 45 5片（片（2g2g左右），洗净，擦干，去左右），洗净，擦干，去掉中脉、剪碎，掉中脉、剪碎，称重（称重（1g1g），放入研钵中。，放入研钵中。（2 2）研钵中加）研钵中加3 35ml 5ml 100100丙酮、少量石英砂、碳酸钙丙酮、少量石英砂、碳酸钙粉粉，研磨至糊状，再加，研磨至糊状，再加5 510ml 10ml 8080丙酮丙酮，提取，提取3-5min3-5min，上清液过滤于三角瓶中，残

26、渣用上清液过滤于三角瓶中，残渣用5-10ml 805-10ml 80丙酮丙酮冲洗，冲洗，一同滤于三角瓶中一同滤于三角瓶中, ,定容为定容为20ml20ml。分为每。分为每10ml10ml两份，放于两份，放于暗处备用。暗处备用。2. 2. 叶绿体色素的分离叶绿体色素的分离（1 1）取圆形定性滤纸一张（直径）取圆形定性滤纸一张（直径11cm11cm），在），在其中心戳一圆形小孔（直径约其中心戳一圆形小孔（直径约3mm3mm）另取一）另取一张滤纸条（张滤纸条（3cm3cm4cm4cm），用镊子夹住纸条放），用镊子夹住纸条放入叶绿体色素提取液中入叶绿体色素提取液中1 1分钟，取出风干后，分钟，取出风干

27、后，再重复操作数次，然后沿长度方向卷成纸捻。再重复操作数次，然后沿长度方向卷成纸捻。（2 2）将纸捻插入圆形滤纸的小孔中，使与滤）将纸捻插入圆形滤纸的小孔中，使与滤纸刚刚平齐（勿突出）。纸刚刚平齐（勿突出）。（3 3）在培养皿内放一康维皿，在康维皿中央小室中）在培养皿内放一康维皿，在康维皿中央小室中加入适量的推动剂，把带有纸捻的圆形滤纸平放加入适量的推动剂，把带有纸捻的圆形滤纸平放在康维皿上，使纸捻下端浸入推动剂中。迅速盖在康维皿上，使纸捻下端浸入推动剂中。迅速盖好培养皿。好培养皿。（4 4）当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风）当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，即可看到分离的各

28、种色素：叶绿素干，即可看到分离的各种色素：叶绿素a a为蓝绿色，为蓝绿色，叶绿素叶绿素b b为黄绿色，叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为为黄绿色，叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。用铅笔标出各种色素的位置和名称。橙黄色。用铅笔标出各种色素的位置和名称。E8.E8.叶绿素的分离和含量与吸收光谱的测定叶绿素的分离和含量与吸收光谱的测定一、材料与试剂一、材料与试剂1.1.材料：菠菜、小白菜叶片材料：菠菜、小白菜叶片2.2.仪器设备仪器设备 研钵；漏斗；量筒；三角瓶；容量瓶；剪刀；滴研钵；漏斗；量筒；三角瓶；容量瓶；剪刀；滴管；培养皿（直径管；培养皿（直径11cm11cm）；康维皿或平底短玻管；）；康维皿或平

29、底短玻管；圆形滤纸（直径圆形滤纸（直径11cm11cm）；分光光度计等。）；分光光度计等。3.3.试剂试剂 8080丙酮；丙酮；100100丙酮、石英砂；碳酸钙粉；丙酮、石英砂；碳酸钙粉； 推动剂：按石油醚；丙酮：苯（推动剂：按石油醚；丙酮：苯（10:2:110:2:1）比例配）比例配 制（制（V VV V）。）。二、原理 叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素和叶绿素b）和类胡萝卜素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。和类胡萝卜素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机

30、溶剂提取；乙醇、丙酮等有机溶剂提取；提取液可以用色谱分析的原理将各种色素分开；提取液可以用色谱分析的原理将各种色素分开；然后将分离的叶绿素然后将分离的叶绿素a和黄绿色的叶绿素和黄绿色的叶绿素b于波长于波长400-700nm之间每隔之间每隔10nm进行比色，读取它们的进行比色，读取它们的OD值，绘制吸收光谱曲线。值，绘制吸收光谱曲线。三、实验步骤 1. 1. 叶绿体色素的提取叶绿体色素的提取（1 1）取菠菜新鲜叶片，洗净，擦干，去掉中脉、）取菠菜新鲜叶片，洗净，擦干，去掉中脉、剪碎，称重（剪碎，称重（0.5-1g0.5-1g）放入研钵中。）放入研钵中。（2 2）研钵中加）研钵中加 5-5-10m

31、l 10ml 100100丙酮丙酮，研磨至组织，研磨至组织变白，提取变白，提取3-5 min3-5 min，上清液过滤于三角瓶中，上清液过滤于三角瓶中，残渣用残渣用8080丙酮丙酮冲洗，一同滤于三角瓶中，用冲洗，一同滤于三角瓶中，用8080丙酮丙酮定容至定容至10-20ml10-20ml即得叶绿体色素待用。即得叶绿体色素待用。2. 2. 叶绿体色素的分离叶绿体色素的分离（1 1）取圆形定性滤纸一张（直径）取圆形定性滤纸一张（直径11cm11cm），在其中心），在其中心戳一圆形小孔（直径约戳一圆形小孔（直径约3mm3mm）另取一张滤纸条）另取一张滤纸条（5cm5cm1.5cm1.5cm），用滴管

32、吸取叶绿体色素提取液沿），用滴管吸取叶绿体色素提取液沿纸条的长度方向涂在纸条的一边，使色素扩散的宽纸条的长度方向涂在纸条的一边，使色素扩散的宽度限制在度限制在0.5cm0.5cm以内，风干后，再重复操作数次，以内，风干后，再重复操作数次，然后沿长度方向卷成纸捻，使浸过叶绿体色素溶液然后沿长度方向卷成纸捻，使浸过叶绿体色素溶液的一侧恰在纸捻的一端。的一侧恰在纸捻的一端。（2 2）将纸捻带有色素的一端插入圆形滤纸的小孔中，）将纸捻带有色素的一端插入圆形滤纸的小孔中，使与滤纸刚刚平齐（勿突出）。使与滤纸刚刚平齐（勿突出）。（3 3）在培养皿内放一康维皿，在康维皿中央小室中）在培养皿内放一康维皿，在康

33、维皿中央小室中加入适量的推动剂，把带有纸捻的圆形滤纸平放加入适量的推动剂，把带有纸捻的圆形滤纸平放在康维皿上，使纸捻下端浸入推动剂中。迅速盖在康维皿上，使纸捻下端浸入推动剂中。迅速盖好培养皿。好培养皿。（4 4）当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风）当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，即可看到分离的各种色素：叶绿素干，即可看到分离的各种色素：叶绿素a a为蓝绿色，为蓝绿色，叶绿素叶绿素b b为黄绿色，叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为为黄绿色，叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。用铅笔标出各种色素的位置和名称。橙黄色。用铅笔标出各种色素的位置和名称。3.叶绿素叶绿素a a、b b的吸收光谱的

34、吸收光谱 将将2 2分离的叶绿体色素纸层析滤纸用剪刀小分离的叶绿体色素纸层析滤纸用剪刀小心剪下蓝绿色的叶绿素心剪下蓝绿色的叶绿素a a和黄绿色的叶绿素和黄绿色的叶绿素b(b(注意避开分层不清晰的色区注意避开分层不清晰的色区) )，分别浸入，分别浸入8080丙酮洗下，用丙酮洗下，用8080丙酮为较零液，于丙酮为较零液，于波长波长400-700nm400-700nm之间每隔之间每隔10nm10nm进行比色，读进行比色，读取它们的取它们的ODOD值，绘制吸收光谱曲线。值，绘制吸收光谱曲线。 E9.E9.叶绿素叶绿素a a、b b含量测定含量测定一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利根据叶

35、绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。即可用公式计算出提取液中各色素的含量。 在测定叶绿素在测定叶绿素a a、b b时为了排除类胡萝卜素的干时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。最大吸收峰。 二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片（一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片（二）仪器设备：（二）仪器设备：分光光度计；电子顶载天平（感量分光光度计；电子顶载天平（感量0.01g0.01g）；）；

36、研钵；棕色容量瓶；小漏斗；定量滤纸；研钵；棕色容量瓶；小漏斗；定量滤纸；吸水纸；擦境纸；滴管吸水纸；擦境纸；滴管（三）试剂：（三）试剂：8080丙酮；石英砂；碳酸钙粉。丙酮；石英砂；碳酸钙粉。三、实验步骤1. 1. 取新鲜植物（菠菜）叶片（或其它绿色组织）取新鲜植物（菠菜）叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。脉），混匀。2. 2. 称取剪碎的新鲜样品称取剪碎的新鲜样品1g1g，放入研钵中，加少量，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及石英砂和碳酸钙粉及2-3ml802-3ml80丙酮丙酮，研成均浆，研成均浆，再加再加丙

37、酮丙酮2-3ml2-3ml，继续研磨至组织变白。静置，继续研磨至组织变白。静置3-3-5min5min。3. 3. 取滤纸取滤纸1 1张，置漏斗中，用张，置漏斗中，用8080丙酮丙酮湿润，湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml25ml棕棕色容量瓶中，用少量色容量瓶中，用少量8080丙酮丙酮冲洗研钵、研冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后用棒及残渣数次，最后用8080丙酮丙酮定容至定容至25ml25ml，摇匀。摇匀。4. 4. 把叶绿体色素提取液倒入光径把叶绿体色素提取液倒入光径1cm1cm的比色杯的比色杯内。以内。以8080丙酮丙酮为空白，在波长为空白，在波长

38、663nm663nm、645nm645nm下测定吸光度。下测定吸光度。四、实验结果计算 将测定得到的吸光值代入下面的式子：将测定得到的吸光值代入下面的式子： Ca=12.7ACa=12.7A6636632.69A2.69A645645 Cb=22.9A Cb=22.9A6456454.68A4.68A663663 Cr=8.02 A Cr=8.02 A663663+20.21 A+20.21 A645645 （CaCa、CbCb：mg/Lmg/L） 叶绿素的含量（叶绿素的含量（mg/gmg/g）= = 叶绿素的浓叶绿素的浓度度提取液体积提取液体积稀释倍数稀释倍数/样品鲜重样品鲜重E9.E9.植

39、物呼吸强度测定植物呼吸强度测定-真空干燥器真空干燥器一、目的与原理：一、目的与原理： 通过实验了解植物呼吸强度的概念、意义以及植物呼吸强度的测定方法、原理。 植物以葡萄糖为基质进行有氧呼吸时，反应为： C6H12O6+6O2 6CO2+6H2O+674(千卡) CO2+2NaOH （过量） Na2CO3+H2O NaCO3+BaCl 2 BaCO3+2NaCl 用标准HCl滴定剩余NaOH，即可求得呼吸强度。二、材料与设备： 设备 18cm或21cm直径真空干燥器；真空干燥器；30cm蒸发皿（置放NaOH ）；25ml酸式滴定管、25ml移液管；1000-2000ml容量瓶、三角瓶；天平等。

40、材料 柑橘果实或土豆三、实验步骤 1.样品称重； 2. 用25ml移液管将浓度0.4M的NaOH 20ml放入真真空干燥器内的空干燥器内的蒸发皿，放好格板； 3.放入样品，封闭、开始计时，同时做一空白即不放样品； 4.1小时后开盖，取出样品和蒸发皿，用5ml移液管加入饱和BaCl2 5ml，将蒸发皿内NaOH洗入三角瓶，加一滴酚酞指示剂； 5.用标准HCl滴定剩余NaOH，记录滴定量ml四、结果计算 呼吸强度(co2mg/kg.小时) =V*N*22 / W*T V 空白与样品滴定量差； N 标准HCl（当量）浓度 T 样品呼吸反应时间（小时） 22 co2的克当量 W 样品重kgE11E11

41、吲哚乙酸氧化酶活性的测定吲哚乙酸氧化酶活性的测定 一、原理一、原理 IAAIAA氧化酶是一种含铁的血红色素蛋白质，参与吲氧化酶是一种含铁的血红色素蛋白质，参与吲哚乙酸哚乙酸( (植物生长素植物生长素) )在植物体内的氧化。在植物体内的氧化。 在吲哚乙酸氧化酶的作用下，吲哚乙酸受到氧化，在吲哚乙酸氧化酶的作用下，吲哚乙酸受到氧化，生成无植物生理活性的生成无植物生理活性的3 3一亚甲氧基代吲哚最终产一亚甲氧基代吲哚最终产物。物。 以破坏吲哚乙酸的速度表示酶活性的大小，用比以破坏吲哚乙酸的速度表示酶活性的大小，用比色法测定吲哚乙酸含量的变化。色法测定吲哚乙酸含量的变化。二、材料、仪器设备及试剂二、材

42、料、仪器设备及试剂 材料：绿豆材料：绿豆 仪器设备：仪器设备： 研钵、试管、可见光分光光度计、研钵、试管、可见光分光光度计、 恒温水浴锅恒温水浴锅 试剂：试剂： 氯化锰、氯化锰、175ug/ml(1mmol/L)175ug/ml(1mmol/L)吲哚乙吲哚乙酸、磷酸酸、磷酸三、实验步骤三、实验步骤1 1新鲜绿豆芽，去子叶，留胚轴待用。新鲜绿豆芽，去子叶，留胚轴待用。2 2取取5g5g下胚轴加磷酸缓冲液下胚轴加磷酸缓冲液5ml5ml（预冷），研磨（预冷），研磨成匀浆，用磷酸缓冲液定容至成匀浆，用磷酸缓冲液定容至40ml.600040ml.6000* *离心离心1010分分, ,酶液待用。酶液待用

43、。3 3、取、取2 2 支试管，作如下处理：支试管，作如下处理：（1 1）氯化锰）氯化锰1ml+1ml+二氯酚二氯酚2ml+175ug/ml2ml+175ug/ml吲哚乙酸吲哚乙酸1ml+1ml+酶液酶液1ml1ml（2 2）氯化锰）氯化锰1ml+1ml+二氯酚二氯酚2ml+175ug/ml2ml+175ug/ml吲哚乙酸吲哚乙酸1ml+1ml+磷酸磷酸1ml1ml，于，于3030度下恒温水浴度下恒温水浴3030分钟分钟4.4.取反应液取反应液1ml+1ml+吲哚乙酸试剂吲哚乙酸试剂A 4mlA 4ml，暗处，暗处3030下保下保温温30min30min。于。于530nm530nm下比色读取光

44、密度值。下比色读取光密度值。5.5.标准曲线的绘制：配制浓度为标准曲线的绘制：配制浓度为0 0、5 5、1010、1515、2020、25ug/ml25ug/ml的吲哚乙酸溶液，按上述方法分别测量光的吲哚乙酸溶液，按上述方法分别测量光密度值。密度值。 6.6.从标准曲线上查出吲哚乙酸残留量，按下列公从标准曲线上查出吲哚乙酸残留量，按下列公式计算样品中酶活性：式计算样品中酶活性： Uug(IAA)/gUug(IAA)/g鲜重鲜重.h=(C.h=(C2 2-C-C1 1) )* *10/(1/V10/(1/V总总* *V V* *T/60)T/60) U U为样品中酶活性为样品中酶活性ug(IAA

45、)/g(ug(IAA)/g(鲜重鲜重).h).h C C2 2为反应液中吲哚乙酸残留量（为反应液中吲哚乙酸残留量（ug/mlug/ml） C C1 1为无酶反应液中吲哚乙酸残留量（为无酶反应液中吲哚乙酸残留量（ug/mlug/ml） V V总总为为1g1g鲜重样品制得的酶液体积（鲜重样品制得的酶液体积（mlml） T T为反应时间为反应时间(min)(min) 1010为反应液体积（为反应液体积（mlml）果蔬品质鉴定-可溶性固形物及可滴定酸含量的测定泰国抽绿橙朋那脐橙椪柑红毛丹番荔枝圣女果火龙果人心果菠萝蜜榴莲莲雾山竹杨桃百香果中国油橄榄椰子人参果海南青枣番石榴木瓜中国红豆杉大雪枣樱桃一、实

46、验目的：一、实验目的：1.1.固酸比是园艺学上作为果固酸比是园艺学上作为果实品质或成熟度常用的参考实品质或成熟度常用的参考指标之一。这里的指标之一。这里的“固固”是是指可溶性固形物（指可溶性固形物（soluble soluble solidssolids）。由于糖的测定较）。由于糖的测定较为复杂，而果汁的可溶性固为复杂，而果汁的可溶性固形物主要是糖，因此，在生形物主要是糖，因此，在生产上通常用可溶性固形物的产上通常用可溶性固形物的测定值作为糖含量的参考数测定值作为糖含量的参考数据。由于果实成熟时糖含量据。由于果实成熟时糖含量逐渐增加而酸含量逐渐减少，逐渐增加而酸含量逐渐减少，所以固酸比往往随果

47、实的成所以固酸比往往随果实的成熟而逐渐增高，用固酸比可熟而逐渐增高，用固酸比可作为果实成熟的指标之一。作为果实成熟的指标之一。如美国加州规定甜橙果汁的如美国加州规定甜橙果汁的固酸比达固酸比达8:18:1时即达到成熟。时即达到成熟。我国规定外销和内销柑橘的我国规定外销和内销柑橘的固酸比不能低于固酸比不能低于8:18:1。 果蔬的酸味来源于有机酸，这些有机酸主要贮存在液泡中。不同的果蔬所含有机酸的种类和比例不同，大多数以柠檬酸和苹果酸为主，葡萄中的主要有机酸是酒石酸。 二、实验原理及操作 2.1可滴定酸测定原理 有机酸用碱液中和，生成盐类 RCOOH + NaOH RCOONa + H2O 用酚酞作指示剂，在pH8.2时即游离酸中和的终点，无色的酚酞与碱作用生成酚酞盐，同时失去以分子水，引起醌型重排而呈红色。 2.2 可滴定酸测定试剂和器材 0.1M NaOH 标准溶液、1酚酞溶液 三角瓶、碱式滴定管等 2.3 可滴定酸测定操作过程操作过程 取清洁干净样品10克，放入研钵，加入少量水研磨为匀浆，洗入250ml容量瓶，蒸馏水冲洗、定容，摇匀。过滤部分入干净烧杯