选修一专题微生物的培养与应用学习教案

1、会计学1第一页，共44页。第1页/共44页第二页，共44页。一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养1培养基培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制 出供其生长繁殖的出供其生长繁殖的 。(2)成分：一般都含有碳源、氮源、水和无机盐，还需满成分：一般都含有碳源、氮源、水和无机盐，还需满 足不同微生物生长对足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及、特殊营养物质以及(yj)氧气的要氧气的要 求。求。2无菌技术无菌技术营养营养(yngyng)基质基质第2页/共44页第三页，共44页。煮沸消毒煮沸消毒(xio d)法法灼烧灼烧(zhu

2、sho)灭菌灭菌3实验操作实验操作(cozu)(1)牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备 计算计算 溶化溶化灭菌灭菌 。称量称量倒平板倒平板第3页/共44页第四页，共44页。(2)微生物的分离方法微生物的分离方法平板划线法：通过平板划线法：通过(tnggu)接种环在琼脂固体培养基接种环在琼脂固体培养基表面表面 的操作，将聚集的菌种逐步分散开来。的操作，将聚集的菌种逐步分散开来。稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后 将不同稀释度的菌液分别涂布到将不同稀释度的菌液分别涂布到 表面，表面， 进行培养。进行培养。连续连续(

3、linx)划线划线琼脂琼脂(qingzh)固体培养基固体培养基第4页/共44页第五页，共44页。二、土壤二、土壤(trng)中分解尿素的细菌的分离与计数中分解尿素的细菌的分离与计数1分离原理：土壤分离原理：土壤(trng)中细菌之所以能分解尿素，是由于它们中细菌之所以能分解尿素，是由于它们体体 内能合成内能合成 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中 起到催化作用。起到催化作用。2统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用 。3实验流程：土壤实验流程：土壤(trng)取样取样制备制备 微生物的培养与观微生物的培养与观察察 细菌

4、的计数。细菌的计数。脲酶脲酶稀释稀释(xsh)涂布平板法涂布平板法培养基培养基第5页/共44页第六页，共44页。三、分解纤维素的微生物的分离三、分解纤维素的微生物的分离1纤维素酶纤维素酶 一种复合酶，它包括一种复合酶，它包括 、 和和 ，前两种，前两种 酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解 成葡萄糖。成葡萄糖。2纤维素分解菌的筛选原理纤维素分解菌的筛选原理 (1) 可以可以(ky)与纤维素形成红色复合物，但并不和与纤维素形成红色复合物，但并不和 发生这种反应。发生这种反应。 (2)纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素，从而使菌纤维素分

5、解菌能产生纤维素酶分解纤维素，从而使菌 落周围形成透明圈。落周围形成透明圈。C1酶酶Cx酶酶葡萄葡萄(p to)糖苷酶糖苷酶刚果红刚果红纤维纤维(xinwi) 二糖和葡萄糖二糖和葡萄糖第6页/共44页第七页，共44页。3土壤中纤维素分解菌的筛选实验流程土壤中纤维素分解菌的筛选实验流程 土壤取样土壤取样 将样品涂布到鉴别纤将样品涂布到鉴别纤 维素分解菌的培养基上维素分解菌的培养基上挑选产生挑选产生(chnshng) 的菌落。的菌落。选择选择(xunz)培养培养梯度梯度(t d)稀释稀释透明圈透明圈第7页/共44页第八页，共44页。第8页/共44页第九页，共44页。考点一考点一培养基的配置与应用培

6、养基的配置与应用命命题题解解读读培养基的制备与应用是历年高考的热点，培养基的制备与应用是历年高考的热点，又是微生物培养与应用的基础，其中选择培养又是微生物培养与应用的基础，其中选择培养基的作用是考查的重点。新课标省份的考题多基的作用是考查的重点。新课标省份的考题多以简答题的形式出现，分值比重加大，但难度以简答题的形式出现，分值比重加大，但难度不大，预计不大，预计2012年高考中将延续这种趋势。年高考中将延续这种趋势。第9页/共44页第十页，共44页。示例示例1如下所示为培养如下所示为培养(piyng)某种某种微生物的培养微生物的培养(piyng)基的配方，请回答：基的配方，请回答：成分成分含量

7、含量NaNO3K2HPO4KClMgSO47H2OFeSO4CH2OH2O青霉素青霉素3 g1 g05 g05 g001 g30 g1 000 mL01万单位万单位(1)依物理性质，该培养基属于依物理性质，该培养基属于 _培养基；依用途划分，培养基；依用途划分， 则属于则属于_培养基。培养基。(2)根据培养基原料，所培养微生根据培养基原料，所培养微生 物的同化作用的类型物的同化作用的类型(lixng)是是_， 培养的微生物可能是培养的微生物可能是_。第10页/共44页第十一页，共44页。(3)该培养基中的碳源是该培养基中的碳源是_。不论何种培养基，在各。不论何种培养基，在各 成分都溶化后分装前

8、，要进行的是成分都溶化后分装前，要进行的是_和和_； 倒平板倒平板(pngbn)时，一般需冷却至时，一般需冷却至_左右，在左右，在_附近附近 操作。操作。(4)若用该培养液培养纤维素分解菌，应除去的物质是若用该培养液培养纤维素分解菌，应除去的物质是_， 至少应加入的物质是至少应加入的物质是_，为检测纤维素分解菌的存，为检测纤维素分解菌的存 在与否还应加入在与否还应加入_，形成，形成_色复合物，若产色复合物，若产 生生_，则证明有纤维素分解菌存在。，则证明有纤维素分解菌存在。第11页/共44页第十二页，共44页。解析解析(1)从培养基成分看，没有琼脂等凝固剂，属于液体培从培养基成分看，没有琼脂等

9、凝固剂，属于液体培养基；从用途上分析，加入青霉素可以杀死细菌、放线菌，选养基；从用途上分析，加入青霉素可以杀死细菌、放线菌，选择择(xunz)出霉菌、酵母菌等属于选择出霉菌、酵母菌等属于选择(xunz)培养基。培养基。(2)该生该生物以培养基中的物以培养基中的(CH2O)作碳源，为异养型微生物。作碳源，为异养型微生物。(3)考查微生考查微生物培养的基本操作。物培养的基本操作。(4)培养纤维素分解菌，是以纤维素作碳源，培养纤维素分解菌，是以纤维素作碳源，故应去除故应去除(CH2O)；培养细菌应去除能杀灭细菌的青霉素。可用；培养细菌应去除能杀灭细菌的青霉素。可用刚果红与纤维素形成红色复合物，检测纤

10、维素分解菌的存在。刚果红与纤维素形成红色复合物，检测纤维素分解菌的存在。若存在，菌落周围会形成透明圈。若存在，菌落周围会形成透明圈。第12页/共44页第十三页，共44页。答案答案(1)液体选择液体选择(xunz)(2)异养型酵母菌或霉菌异养型酵母菌或霉菌(3)(CH2O)调整调整pH灭菌灭菌50酒精灯火焰酒精灯火焰(4)青霉素和青霉素和(CH2O)琼脂和纤维素粉刚果红红琼脂和纤维素粉刚果红红透明圈透明圈第13页/共44页第十四页，共44页。划分划分标准标准培养基培养基种类种类特点特点用途用途物理物理性质性质液体培液体培养基养基不加凝固剂不加凝固剂工业生产工业生产固体培固体培养基养基加凝固剂，如

11、加凝固剂，如琼脂琼脂微生物分离、鉴定等微生物分离、鉴定等1培养基的类型培养基的类型(lixng)第14页/共44页第十五页，共44页。划分划分标准标准培养基培养基种类种类特点特点用途用途用用途途选择培选择培养基养基培养基中加入某种化培养基中加入某种化学物质，用来抑制不学物质，用来抑制不需要的微生物的生长，需要的微生物的生长，促进所需要的微生物促进所需要的微生物的生长的生长培养和分离出特定微生物培养和分离出特定微生物(如分离酵母菌和霉菌，可如分离酵母菌和霉菌，可以在培养基中加入青霉素以在培养基中加入青霉素)鉴别培鉴别培养基养基根据微生物的代谢特根据微生物的代谢特点，在培养基中加入点，在培养基中加

12、入某种指示剂或化学药某种指示剂或化学药品品鉴别不同种类的微生物，如鉴别不同种类的微生物，如用伊红用伊红美蓝培养基鉴别饮美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否含有大用水或乳制品中是否含有大肠杆菌肠杆菌(若有，则菌落呈深若有，则菌落呈深紫色并带有金属光泽紫色并带有金属光泽)第15页/共44页第十六页，共44页。(1)加入培养基中的凝固剂加入培养基中的凝固剂(如琼脂如琼脂)，一般不能被微生物利，一般不能被微生物利 用，只起到凝固作用。用，只起到凝固作用。(2)选择培养基一般只生长具有特定目的的微生物，鉴别选择培养基一般只生长具有特定目的的微生物，鉴别 培养基可以培养基可以(ky)存在其他微生物，而且能鉴

13、别特定的微生物。存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。2微生物的营养微生物的营养营养营养要素要素含义含义作用作用主要来源主要来源碳源碳源凡能提凡能提供所需供所需碳元素碳元素的物质的物质构成生物体细胞的构成生物体细胞的物质和一些代谢产物质和一些代谢产物，有些是异养生物，有些是异养生物的能源物质物的能源物质无机化合物：无机化合物：O2NaHCO3；有机化合物：糖类、脂有机化合物：糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油肪酸、花生饼粉、石油等等第16页/共44页第十七页，共44页。营养营养要素要素含义含义作用作用主要来源主要来源氮源氮源凡能提供所凡能提供所需氮元素的需氮元素的物质物质合成蛋白质、合成蛋白质、核

14、酸以及含核酸以及含氮的代谢产氮的代谢产物物无机化合物：无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机物铵盐、硝酸盐；有机物化合物：尿素、牛肉膏、化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等蛋白胨等生长生长因子因子生长必不可生长必不可少的微量有少的微量有机物机物酶和核酸的酶和核酸的组成成分组成成分维生素、氨基酸、碱基维生素、氨基酸、碱基等等第17页/共44页第十八页，共44页。1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤(bzhu)是是 () A计算、称量、倒平板、溶化、灭菌计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B计算、称量、溶化、倒平板、灭菌计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C计算、称量、溶化、

15、灭菌、倒平板计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D计算、称量、灭菌、溶化、倒平板计算、称量、灭菌、溶化、倒平板解析：制备牛肉膏蛋白胨固体解析：制备牛肉膏蛋白胨固体(gt)培养基，应先根据需培养基，应先根据需要计算各成分用量，然后称量、溶化、灭菌、倒平板。要计算各成分用量，然后称量、溶化、灭菌、倒平板。答案答案(d n)：C第18页/共44页第十九页，共44页。2现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分(chng fn)如下表：如下表：KHSO4MgSO4NaClCaSO4CaCO3葡萄糖葡萄糖淀粉淀粉甲培养甲培养基基0.02%0.02%0.02% 0.0

16、1%0.5%0.5%2%乙培养乙培养基基0.02%0.02%0.02% 0.01%0.5%00用这两种培养基分别分离土壤中的两种微生物，你认为它们用这两种培养基分别分离土壤中的两种微生物，你认为它们(t men)适于分离适于分离 ()A甲培养基适于分离自养型自生固氮菌；乙培养基适于分离甲培养基适于分离自养型自生固氮菌；乙培养基适于分离 异养型自生固氮菌异养型自生固氮菌B甲培养基适于分离酵母菌；乙培养基适于分离真菌甲培养基适于分离酵母菌；乙培养基适于分离真菌第19页/共44页第二十页，共44页。C甲培养基适于分离异养型自生固氮菌；乙培养基适于分甲培养基适于分离异养型自生固氮菌；乙培养基适于分 离

17、自养离自养(z yn)型自生固氮菌型自生固氮菌D甲培养基适于分离异养型共生细菌；乙培养基适于分离甲培养基适于分离异养型共生细菌；乙培养基适于分离 异养型共生固氮菌异养型共生固氮菌第20页/共44页第二十一页，共44页。解析：根据所提供的甲、乙两种培养基的成分分析，两者之间解析：根据所提供的甲、乙两种培养基的成分分析，两者之间的主要差别是：甲培养基以葡萄糖和淀粉作为有机碳源和能源，的主要差别是：甲培养基以葡萄糖和淀粉作为有机碳源和能源，也有少量也有少量(sholing)的无机碳源的无机碳源(CaCO3)；乙培养基无有机碳源；乙培养基无有机碳源和能源。两者之间的共同点是：都不含氮源。说明这两种培养

18、和能源。两者之间的共同点是：都不含氮源。说明这两种培养基只能培养具有固氮能力的微生物。基只能培养具有固氮能力的微生物。答案答案(d n)：C第21页/共44页第二十二页，共44页。考点二考点二微生物培养的实验室操作微生物培养的实验室操作命命题题解解读读 考题多以非选择题的形式出现，考查微生物考题多以非选择题的形式出现，考查微生物的培养条件、代谢特点，实验室微生物培养规范的培养条件、代谢特点，实验室微生物培养规范和主要步骤。预计和主要步骤。预计2012年高考命题将通过生产生年高考命题将通过生产生活中有关微生物计数、微生物分离与培养等实际活中有关微生物计数、微生物分离与培养等实际问题考查培养基消毒

19、灭菌等基础知识。问题考查培养基消毒灭菌等基础知识。第22页/共44页第二十三页，共44页。示例示例2(2009宁夏高考宁夏高考)(1)在大肠杆菌培养过程中在大肠杆菌培养过程中 ，除考虑营，除考虑营养条件外，还要考虑养条件外，还要考虑 _ 、_ 和渗透压等条件。和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、_ 、_ 等优点，因此等优点，因此(ync)常作为遗传学研究的常作为遗传学研究的实验材料。实验材料。(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养 基和培养皿进行基和培

20、养皿进行 _(消毒、灭菌消毒、灭菌)；操作者的双手需；操作者的双手需 进行清洗和进行清洗和 _ ；静止空气中的细菌可用紫外线杀；静止空气中的细菌可用紫外线杀 灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。第23页/共44页第二十四页，共44页。(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所 得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还 应保证待测样品稀释的应保证待测样品稀释的_ 。(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌通常，对获

21、得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌 落特征对细菌进行初步的落特征对细菌进行初步的 _。(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。 对于固体培养基应采用对于固体培养基应采用(ciyng)的检测方法是的检测方法是_。(6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须 经过经过 _ 处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。第24页/共44页第二十五页，共44页。解析解析解答本题需要识记微生物的培养条件、代谢特点，实验解答本题需要识记微生物的培养

22、条件、代谢特点，实验室微生物培养规范和主要步骤。微生物的培养条件有适宜的营养室微生物培养规范和主要步骤。微生物的培养条件有适宜的营养物质物质(碳源、氮源、无机盐等碳源、氮源、无机盐等)、温度、温度、pH、渗透压、渗透压(控制培养液的控制培养液的浓度浓度)等。细菌具有个体微小、结构简单、生长周期短、繁殖等。细菌具有个体微小、结构简单、生长周期短、繁殖(fnzh)快、代谢旺盛、变异类型简单快、代谢旺盛、变异类型简单(主要是基因突变主要是基因突变)等特点。等特点。在微生物实验操作中，防止杂菌污染是贯穿实验整个过程中的内在微生物实验操作中，防止杂菌污染是贯穿实验整个过程中的内容，因此，对环境、生物材料

23、、操作者双手等进行消毒，对培养容，因此，对环境、生物材料、操作者双手等进行消毒，对培养基、接种环和培养仪器进行灭菌等是微生物实验中的常见操作。基、接种环和培养仪器进行灭菌等是微生物实验中的常见操作。紫外线灭菌的原理是紫外线的高能量使蛋白质和紫外线灭菌的原理是紫外线的高能量使蛋白质和DNA等生物分子等生物分子变性，即空间结构改变。稀释涂布平板法是细菌分离纯化的常用变性，即空间结构改变。稀释涂布平板法是细菌分离纯化的常用方法，合适的稀释倍数是实验的关键。方法，合适的稀释倍数是实验的关键。第25页/共44页第二十六页，共44页。答案答案(1)温度酸碱度易培养温度酸碱度易培养(piyng)生活周期生活

24、周期短短(2)灭菌消毒损伤灭菌消毒损伤DNA的结构的结构(3)比例合适比例合适(4)鉴定鉴定(或分类或分类)(5)将未接种的培养将未接种的培养(piyng)基在适宜的基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养温度下放置适宜的时间，观察培养(piyng)基上是否有基上是否有菌落产生菌落产生(6)灭菌灭菌第26页/共44页第二十七页，共44页。1消毒消毒(xio d)与灭菌与灭菌条件条件结果结果常用的方法常用的方法消消毒毒较为温较为温和的物和的物理或化理或化学方法学方法仅杀死物体表面或内部仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微一部分对人体有害的微生物生物(不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子)煮沸消毒

25、法、巴氏煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或消毒法、紫外线或化学药物消毒法化学药物消毒法灭灭菌菌强烈的强烈的理化因理化因素素杀死物体内外所有的微杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌菌、高压蒸汽灭菌第27页/共44页第二十八页，共44页。 用酒精消毒时，用酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好。若浓度过高，的酒精杀菌效果最好。若浓度过高， 菌体表面蛋白质凝成一层保护层，则乙醇分子不能渗入菌体表面蛋白质凝成一层保护层，则乙醇分子不能渗入(shnr) 其中；若浓度过低，杀菌能力减弱。其中；若浓度过低，杀菌能力减弱。2无菌技术具体操作无

26、菌技术具体操作(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火 焰附近进行。焰附近进行。(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品 相接触。相接触。第28页/共44页第二十九页，共44页。3倒平板的注意事项倒平板的注意事项(1)若培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，

27、应废弃该平板；若培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，应废弃该平板；(2)手试刚不烫手时手试刚不烫手时(50)倒平板；倒平板；(3)在酒精灯火焰附近操作，防污染；在酒精灯火焰附近操作，防污染；(4)冷凝平板倒置，防皿盖冷凝水落到培养基上造成污染。冷凝平板倒置，防皿盖冷凝水落到培养基上造成污染。4纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌(1)常用常用(chn yn)方法：平板划线法和稀释涂布平板法。方法：平板划线法和稀释涂布平板法。(2)平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在 一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形一起的微生物分散成单个细胞，从而能在

28、培养基表面形 成单个的菌落，以便于纯化菌种。成单个的菌落，以便于纯化菌种。第29页/共44页第三十页，共44页。(3)平板划线操作平板划线操作(cozu) 第一次划线与第二次划线之前都需灼烧灭菌，划线操第一次划线与第二次划线之前都需灼烧灭菌，划线操 作、结束时仍需灼烧接种环。作、结束时仍需灼烧接种环。 划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线时最后一区域不要与第一区域相连。 灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液以免温度过灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液以免温度过 高杀死菌种。高杀死菌种。第30页/共44页第三十一页，共44页。3(2011青岛质检青岛质检(zh jin)微生物与人类关系密切

29、。虽然有些微微生物与人类关系密切。虽然有些微生生 物能使动植物患病，但多数微生物对人类是有益的。请物能使动植物患病，但多数微生物对人类是有益的。请 回答下列问题。回答下列问题。 (1)培养微生物的培养基配方中一般含有水、碳源、氮源培养微生物的培养基配方中一般含有水、碳源、氮源 和无机盐。从土壤中分离分解尿素的细菌时，培养基中和无机盐。从土壤中分离分解尿素的细菌时，培养基中 加的唯一氮源为加的唯一氮源为_，这种培养基称为，这种培养基称为_ 培养基。培养基。 (2)在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平 板冷凝后，为什么要将平板倒置？板冷凝后，

30、为什么要将平板倒置？_。第31页/共44页第三十二页，共44页。 (3)微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和 _ 法。在用平板划线法接种时，为什么在操作的法。在用平板划线法接种时，为什么在操作的 第第 一步一步(y b)以及每次划线之前都要灼烧接种环以及每次划线之前都要灼烧接种环 _。 在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么 _。第32页/共44页第三十三页，共44页。解析：从土壤中分离出分解尿素的细菌，需用选择性培养基，唯解析：从土壤中分离出分解尿素的细菌，需用选择性培养基，唯一的氮源是

31、尿素。接种过程中，最常用的是平板划线法和稀释涂一的氮源是尿素。接种过程中，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法两种方法。每次划线前都要灼烧接种环的目的是杀死上布平板法两种方法。每次划线前都要灼烧接种环的目的是杀死上次接种时留下的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来自次接种时留下的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来自上次划线的末端，以便通过多次划线后，得到单个的菌落。操作上次划线的末端，以便通过多次划线后，得到单个的菌落。操作的第一步和最后一步需灼烧接种环的目的分别是防止接种环上有的第一步和最后一步需灼烧接种环的目的分别是防止接种环上有其他微生物而污染培养基、以免其他微生物而污染培养基

32、、以免(ymin)菌种对环境造成污染和菌种对环境造成污染和感染操作者。感染操作者。第33页/共44页第三十四页，共44页。答案：答案：(1)尿素选择尿素选择(xunz)(2)皿盖上会凝有水珠，防止水皿盖上会凝有水珠，防止水珠落入培养皿造成污染，还可使培养基表面的水分更好地挥发珠落入培养皿造成污染，还可使培养基表面的水分更好地挥发(3)稀释涂布平板第一步灼烧接种环是防止接种环上有其他微稀释涂布平板第一步灼烧接种环是防止接种环上有其他微生物而污染培养基。每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次接生物而污染培养基。每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次接种时留下的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来自上种

33、时留下的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来自上次划线的末端，以便通过多次划线后，得到单个的菌落次划线的末端，以便通过多次划线后，得到单个的菌落(4)需需要，以免菌种对环境造成污染和感染操作者要，以免菌种对环境造成污染和感染操作者第34页/共44页第三十五页，共44页。第35页/共44页第三十六页，共44页。示例示例下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的实验，完成下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的实验，完成下列问题：下列问题：(1)实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较(bjio)多。多。将用表层土制成的稀泥浆，接种

34、到无氮培养基上进行培养。将用表层土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。材料用具：农法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基，盛田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基，盛9 Ml无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90 mL无菌水的锥形瓶、恒温箱。无菌水的锥形瓶、恒温箱。第36页/共44页第三十七页，共44页。(2)方法步骤：方

35、法步骤： 倒平板：分别倒平板：分别(fnbi)将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平 板，操作过程应在火焰旁。板，操作过程应在火焰旁。 制备土壤稀释液：取土样制备土壤稀释液：取土样10 g加入盛有加入盛有90 mL无菌水的锥无菌水的锥 形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液1 mL，转至，转至9 mL 的无菌水的大试管中，依次稀释到的无菌水的大试管中，依次稀释到107稀释度。稀释度。 涂布：按照由涂布：按照由107103稀释度的顺序分别稀释度的顺序分别(fnbi)吸取吸取0.1 mL进行进行 平板涂布，每个稀释度下，无氮培

36、养基应至少涂布平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布 _个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个平板。个平板。第37页/共44页第三十八页，共44页。 培养：放入恒温箱内，在培养：放入恒温箱内，在2830下培养下培养34天。天。 细菌的计数：当菌落数目细菌的计数：当菌落数目(shm)稳定时，选取菌落数在稳定时，选取菌落数在 _ 的平板进行计数。如果测试的平均值的平板进行计数。如果测试的平均值 为为50，则每克样品中的菌落数是，则每克样品中的菌落数是_。(稀释度是稀释度是105)(3)预测结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基平板上预测结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白

37、胨培养基平板上 的菌落数应多于无氮培养基上的数目的菌落数应多于无氮培养基上的数目(shm)。请说明原因。请说明原因。第38页/共44页第三十九页，共44页。解析解析分离自生固氮微生物，应用无氮培养基，因为氮是生物分离自生固氮微生物，应用无氮培养基，因为氮是生物必需的元素，只有具有固氮能力的自生固氮微生物才能在无氮必需的元素，只有具有固氮能力的自生固氮微生物才能在无氮培养基上生长。而营养全面的牛肉膏蛋白培养基上生长。而营养全面的牛肉膏蛋白(dnbi)胨培养基则允胨培养基则允许多种微生物生长。许多种微生物生长。答案答案(2)3303005107(3)无氮培养基上能生存无氮培养基上能生存(shngcn)繁殖的仅是土壤中的繁殖的仅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存菌类生存(shn