生化实验 实验四、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清ldhppt课件

1、区带电泳、电场电泳仪、电泳槽区带电泳、电场电泳仪、电泳槽1 1、带电颗粒的物理性状、带电颗粒的物理性状包括带电颗粒电荷数，颗粒大小、外形包括带电颗粒电荷数，颗粒大小、外形和空间构型。和空间构型。QQ，v v ；r r ，vv。 3缓冲溶液：缓冲溶液： pH值：溶液的值：溶液的pH值决议带电颗粒的解离值决议带电颗粒的解离程度，亦即决议程度，亦即决议Q。 离子强度：普通最适的离子强度在离子强度：普通最适的离子强度在0.020.2之间，溶液的离子强度越高，那么电泳之间，溶液的离子强度越高，那么电泳速度越慢。速度越慢。 溶液粘度：迁移率与溶液粘度呈反比关溶液粘度：迁移率与溶液粘度呈反比关系。系。p特性

2、：特性：p机械强度好，有弹性，透明，相对化学稳定，机械强度好，有弹性，透明，相对化学稳定，对对pHpH和温度变化较稳定，没有吸附和电渗作用。和温度变化较稳定，没有吸附和电渗作用。p调理单体的浓度和交联度可以控制孔径大小。调理单体的浓度和交联度可以控制孔径大小。p聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，能分别、小量制备聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，能分别、小量制备生物大分子，而且可用来研讨生物大分子的性生物大分子，而且可用来研讨生物大分子的性质如电荷、相对分子质量、等电点以及构象等。质如电荷、相对分子质量、等电点以及构象等。n丙烯酰胺丙烯酰胺AcrAcr，单体，单体N,N-N,N-甲叉双丙稀酰胺甲叉双丙稀酰胺 Bis

3、 Bis，交联剂，交联剂催化剂催化剂聚合聚合n催化剂：催化剂：n 1 1过硫酸铵四甲基乙二胺过硫酸铵四甲基乙二胺TEMEDTEMEDn 2 2核黄素核黄素VitB2VitB2光光n根据要分别物质的相对分子质量选择适宜的单根据要分别物质的相对分子质量选择适宜的单体浓度。体浓度。 【凝胶总浓度及交联度对凝胶的影响】 n凝胶溶液中单体和交联剂的总浓度和两者的比例是决议聚丙烯酰胺凝胶特性包凝胶溶液中单体和交联剂的总浓度和两者的比例是决议聚丙烯酰胺凝胶特性包括其机械性能、弹性、透明度、粘着度及孔径大小的主要要素。括其机械性能、弹性、透明度、粘着度及孔径大小的主要要素。nT为凝胶总浓度，为凝胶总浓度，C为

4、交联度。为交联度。n a为丙烯酰胺单体的质量为丙烯酰胺单体的质量(g)，b为交联剂的质量为交联剂的质量(g)，m为溶液的终体积为溶液的终体积(mL)。n凝胶凝胶a、b的比例决议了凝胶的物理性状。当的比例决议了凝胶的物理性状。当a:b小于小于10时，凝胶脆且硬，不透时，凝胶脆且硬，不透明，呈乳白色；当明，呈乳白色；当a:b大于大于100时，即使用时，即使用5%的丙烯酰胺凝胶也呈糊状；通常的丙烯酰胺凝胶也呈糊状；通常用用a:b在在30左右，并且丙烯酰胺浓度高于左右，并且丙烯酰胺浓度高于3%，凝胶富有弹性并且透明。，凝胶富有弹性并且透明。 %100 mbaT%100 babC 1959年Markert等用电泳的方法将纯化的心肌乳酸脱氢酶(LDH)分别出5条区带，由阳极到阴极依次命名为LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5。 【乳酸脱氢酶同工酶染色】【乳酸脱氢酶同工酶染色】LDH4LDH3LDH5LDH1LDH2 1 2 3 4电泳安装电泳安装 采用Pharmacia公司的SE250小型夹心式垂直板电泳安装： 制胶安装 制备凝胶板 电泳安装 进展凝胶电泳 1、凝胶制备 2、电极缓冲液 3、样品处置及加样 4、电泳 5、染色1.81.82.02.00.70.71.41.45.05.02.4