液相色谱基础知识学习教案

1、会计学1液相色谱液相色谱(s p)基础知识基础知识第一页，共40页。(lidng)相的色谱分离方法相的色谱分离方法适用于沸点较低、热稳定性好适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析的中小分子化合物的分析流动流动(lidng)相只起运载样品相只起运载样品分子的能力分子的能力第1页/共40页第二页，共40页。一、色谱(s p)起源石油醚碳酸钙颗粒色素玻璃柱第2页/共40页第三页，共40页。二、定义 色谱法：利用组分在两相之间分配系数不同(b tn) 而进行分离的技术 移动相：携带样品流过整个系统的流体 固定相：静止不动的一相，通常为色谱柱固 定液第3页/共40页第四页，共40页。第4页/共

2、40页第五页，共40页。第5页/共40页第六页，共40页。溶溶 剂剂 等等 级级波长波长(bchng) (nm)纯化纯化(chn hu)水水去离子水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物纯化水中去除了无机和有机的污染物第6页/共40页第七页，共40页。水水 / 甲醇甲醇(ji chn)梯度梯度ODS 柱柱鬼峰鬼峰Gradient Curve1ml/min, 0-100% MeOHover 10 mins and hold for15 mins.溶溶 剂剂 等等 级级第7页/共40页第八页，共40页。溶溶 剂剂 等等 级级

3、都经过蒸馏都经过蒸馏(zhngli)和和0.45u的过滤的过滤(除纤维毛除纤维毛,未溶解的机械颗粒未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析优级纯的纯度比分析(fnx)纯大纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过级经过0.2u的过滤的过滤,且除去有紫外吸收的杂质且除去有紫外吸收的杂质第8页/共40页第九页，共40页。甲醇甲醇(ji chn) 乙睛乙睛 正己烷正己烷分析纯级(实线）和 HPLC 级溶剂（虚线）的吸光度(gungd)比较溶溶 剂剂 等等 级级第9页/共40页第十页，共40页。General Maintenance and Troubleshooting缓冲液

4、的使用缓冲液的使用(shyng) 使用前必须过滤使用前必须过滤 使用后一定要对柱子进行清洗使用后一定要对柱子进行清洗 ，以免造成腐蚀、，以免造成腐蚀、磨损及磨损及 阻塞阻塞:首先用纯水冲洗首先用纯水冲洗10-30min（0.5-1ml/min），再用甲醇冲洗），再用甲醇冲洗30min(0.1-0.5ml/min) 易受到细菌和霉菌易受到细菌和霉菌(mjn)的影响的影响 溶溶 剂剂 等等 级级注意冲洗次序注意冲洗次序(cx)，不能直接用，不能直接用有机溶剂冲洗有机溶剂冲洗第10页/共40页第十一页，共40页。溶溶 剂剂 前前 处处 理理第11页/共40页第十二页，共40页。目的 单元 流速(li

5、 s)范围特性和应用 分析(fnx) LC-10ADVP0.001-9.999无脉动，适于半微量LC 和 LC-MS LC-10ATVP0.001-9.999非凡的耐用性， 适于常量分析*所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度第12页/共40页第十三页，共40页。LC-10ATvp泵：泵： 串联式往复泵串联式往复泵LC-10ADvp泵：泵： 并联式微体积并联式微体积(tj)往复泵往复泵LC-10ADVP / LC-10ATVP工作工作(gngzu)原理原理第13页/共40页第十四页，共40页。单向阀结构单向阀结构(jigu)抛光面透明塑料垫片宝石球单向阀原

6、理单向阀原理(yunl)吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头LC-10ADVP / LC-10ATVP工作工作(gngzu)原理原理第14页/共40页第十五页，共40页。第15页/共40页第十六页，共40页。第16页/共40页第十七页，共40页。的通用型检测器（如示差折光检测器）的通用型检测器（如示差折光检测器）第17页/共40页第十八页，共40页。1.使用适宜的流动相溶解样品2. 在溶剂选择的时候，应注意以下原则：3. - 减少溶剂峰，尤其是不可使用组分峰靠近溶剂峰 的流动相4. - 保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在色谱柱中产生沉淀5. 6.2. 进样前最好使用0.45

7、um 的膜进行过滤(gul)7. 如果样品很脏，要使用0.2um的膜进行过滤(gul)第18页/共40页第十九页，共40页。第19页/共40页第二十页，共40页。进样量和检测器响应进样量和检测器响应(xingyng)的关系示意图的关系示意图Volume of Injection Response of DetectorHalf volumeof sample loopThree times volumeof sample loopLoop injectionPartialinjection第20页/共40页第二十一页，共40页。手动进样器的原理图手动进样器的原理图 装填(zhun tin)状态

8、进样状态进样状态(zhungti)第21页/共40页第二十二页，共40页。微量注射器微量注射器 红色红色(hngs)表示残留样品表示残留样品第22页/共40页第二十三页，共40页。第23页/共40页第二十四页，共40页。第24页/共40页第二十五页，共40页。第25页/共40页第二十六页，共40页。第26页/共40页第二十七页，共40页。色谱色谱(s p)柱的类型及适用范围柱的类型及适用范围硅胶基底硅胶基底聚合物基底聚合物基底pH 范围范围2 - 7宽范围宽范围有机溶剂有机溶剂所有所有有限制有限制压力压力 200 kgf/cm2低压低压温度温度宽范围宽范围60C第27页/共40页第二十八页，共

9、40页。分分 析析 柱柱 的的 维维 护护1.在使用新柱之前，最好用强溶剂如甲醇在低流量下在使用新柱之前，最好用强溶剂如甲醇在低流量下 (0.2-0.3 ml/min)冲洗冲洗 30 mins，长时间未用的分析柱也要同样处理，长时间未用的分析柱也要同样处理2.定期使用强溶剂冲洗柱子定期使用强溶剂冲洗柱子(zh zi)3.3、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗4.4、净化样品、净化样品5.5、分离条件、分离条件6.6、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯第28页/共40页第二十九页，共40页。症状：系统

10、高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰）症状：系统高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留时间，保留时间(shjin)的改变的改变延长柱寿命方法：延长柱寿命方法： 修补柱头修补柱头 换过滤片换过滤片 倒冲柱倒冲柱第29页/共40页第三十页，共40页。第30页/共40页第三十一页，共40页。的物质的物质第31页/共40页第三十二页，共40页。二极管阵列二极管阵列(zhn li)检测器检测器第32页/共40页第三十三页，共40页。第33页/共40页第三十四页，共40页。样品样品(yngpn)池池二极管阵列二极管阵列(zhn li)光栅光栅(gungshn)D2 / W 灯灯每一组分可在每一波长处得到一吸光度值每一组分可在每一波长处得到一吸光度值二极管阵列检测器二极管阵列检测器第34页/共40页第三十五页，共40页。第35页/共40页第三十六页，共40页。第36页/共