293T细胞培养标准操作规程_第1页
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文档简介

1、百利药业生物药研发部标准操作规程题目：293T细胞传代培养操作规程编号：SOP-M-e-003-制定者：（签名）日期：年月日批准者：（签名）日期：年月日生效日期：年月日修改和追加记录第1页共3页百利药业生物药研发部编号：SOP-M-e-OO-题目：293T细胞培养操作规程1目的293T细胞是常用于包装和扩增病毒载体的工具细胞，因此做好293T细胞的培养，为保证相关实验的正常进行提供必要条件。2适用范围本部门293T细胞培养3操作方法31将移液器和移液枪、15ml离心管、离心管架、75cm2新的细胞培养瓶放于生物安全柜中，按照生物安全柜的标准操作规程，将生物安全柜的紫外开启半小时。3.2将含10

2、%胎牛血清和100U/ml双抗的DMEM及PBS放于37°C水浴锅中预热。321将已长到80%-90%的293T细胞培养瓶从37C,5%的CO2培养箱中取出，先用75%的酒精喷洒于瓶表面，将细胞培养瓶旋转放于生物安全柜中，用无菌的移液管吸净其中的培养基，加5ml的预热的PBS洗涤一次，吸净PBS。322将含EDTA-0.25%tyption用PBS稀释两陪到五倍，向该75cm2的细胞瓶中加入3ml稀释好的EDTA-0.25%tyption，让其充分平铺于细胞表面。盖好瓶盖，将细胞瓶放在显微镜下观察，直到细胞变圆，加含10%胎牛血清的DMEM终止反应，用移液管轻轻将瓶上的细胞吹下，将细胞液移到15ml无菌的离心管中，1000rpm离心3分钟。323将离心上清吸弃掉，用手指轻轻拍打离心管底将底部细胞分散开，再加3mlDMEM培养基将分散的细胞重悬稀释开，取一定量的细胞液进行n倍稀释后计数，按照细胞计数标准操作规程进行。324计数好之后细胞传代密度按照25X104个细胞/cm2进行传代培养，每个75cm2的培养瓶中加10mlDMEM培养基，放于37C,5%的CO2培养箱中培养。32

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