分离科学GCLCMS

1、期末总结期末总结 1. 色谱法色谱法 2. GC 3. LC 4. GC-MS 5. LC-MS 6. MS-MS目目 录录色谱法色谱法1.原理 试样中各组分在色谱柱中的流动相和固定相间不断进行着分配，不同性质的组分在柱中的滞留时间不同，从而使各组分分离。2.术语 相对保留值 r21 = t R2 / t R1 （柱温、固性） 分配系数 K = CS / CM （柱温、固性、试样、k）分离度 R = 1.5 两峰完全分离标准3.定性 纯物质：保留值、加入法 保留指数（IX） ：正构烷烃 仪器联用：GC-MS、LC-MS4.定量-组分含量与峰面积成正比 m = fA 归一化法：全部出峰 标准曲线

2、法 ：需组分纯物质系列标液制成曲线，适用于大批量样品 内标法：需要标样和内标物，不适合大批量样品100)(100%121 niiiiiniiAfAfmmmmc常数SiiAAc %内标物：试样中不含有该物质；与被测组分性质接近；不与试样发生化学反应；出峰位置应位于被测组分附近。5.色谱方法分析验证 准确度：多次重复测定 平均值 真值 符合程度回收率 = (C-A)/B (内标法) 精密度：多次重复测定 测定值 彼此 符合程度RSD = S / X 检测限（LOD）：被检出的最低量 信噪比：3:1 定量限（LOQ） ：被定量测定的最低量 信噪比：10:1 线性范围：气相色谱法气相色谱法1.结构2.

3、GC条件选择载气系统干燥、净化，H2 、N2 、He进样系统进样+汽化色谱柱填充柱、毛细管柱检测系统TCD、FID记录系统色谱工作站温度控制系统汽化室、分离室、检测室进样手动、自动气化温度等于或稍高于样品的沸点固定相相似相溶（出峰顺序：非极沸点低、极性极性小）柱温柱温-挥发度-低沸点重叠-tR；柱温-低沸点易分离-tR；程序升温检测器温度防止冷凝高效液相色谱法高效液相色谱法1.结构高压输液泵固定相颗粒极细，必须配备有高压输液系统进样装置六通阀、色谱柱一般为C18柱检测器紫外（可梯洗）、光电二极管阵列、示差折光（不可梯洗）、荧光过滤装置防止堵塞、保护仪器2.LC分离类型 液-液分配色谱 原理 液

4、液萃取 溶解度类型 正相色谱（流弱）流出顺序：极性小的先流出，极 性大的后流出反相色谱（流强）流出顺序：极性大的先流出，极 性小的后流出反相色谱 固定相：C18 流动相:甲醇、乙腈、水 极性顺序：水（超纯水）乙腈甲醇 洗脱顺序：水甲醇乙腈 有机相比例减小： 溶剂极性-洗脱能力-tR，R 梯度洗脱：按一定程序连续地改变流动相的配比和极性，用来优化分离。 离子色谱原理 利用离子对离子交换树脂的亲和力差异而进行分离方式 添加抑制柱，降低流动相本底电导影响，提高目标离子灵敏度 离子对色谱原理 将对离子或加到流动相中，使其与溶质离子结合形成离子对，从而控制溶质离子保留行为 体积排除色谱原理 基于试样分子

5、的尺寸和形状不同来实现分离GC-LC 对比对比GCLC流动相气体液体流动相作用运载运载与选择分离适用对象低沸点、热稳定、中小分子高沸点、热温差、大分子、强极性进样方式高温汽化六通阀柱温较高室温检测器TCD、FID、ECD紫外、二极管、差示、荧光GC-MS 联用联用1.流程GC：MS的进样器，纯化样品，提高分析效率MS：GC的检测器，定性专一作用：将GC与MS联接，除去载气、降低气压,富集输送试样 直接插入式接口直接插入式接口 喷射式分子分离器喷射式分子分离器进样系统进样系统离子源离子源真空系统真空系统质量分析器质量分析器检测器检测器2.结构 1.载气：高纯He 2.进样口：分流/不分流、填充柱

6、进样口 3.色谱柱：固定相选择分流比：液体样品蒸发后，少部分蒸汽进入柱子而大部分从分流 、 吹扫口流出，两者的比例为分流。EI CI 1.单聚焦 2.四极杆 3.飞行时间 真空原因： 1.氧会烧坏离子源的灯丝； 2.高压会引起放电； 3.引起额外的离子分子反应，谱图复杂化。组分组分固定相固定相出峰顺序出峰顺序非极非极沸点，沸点低先出峰极性极性极性，极性小先出峰混合极性极性，非极性组分先出峰固定相选择3.MS中离子类型分子离子分子失去一个电子所形成的离子，也叫母离子，m/z值为分子质量准分子离子加合离子，CI源产生较多，如：M + H、M + Na、 M + K碎片离子能量较高电离源轰击分子，使

7、分子进一步碎裂，如EI源同位素离子分子离子峰的右边1-2个质量单位，常出现含重同位素的分子离子峰多电荷离子形成m/2e，m/3e等多电荷离子，常用于分析大分子量化合物4.MS中离子化方式EICI电子直接与样品分子作用样品分子电离经过分子离子反应分子离子，多碎片离子准分子离子，碎片少 ( 软电离) 有利于测定结构有利于测定分子量有标准谱库无标准谱库5.图谱类型总离子流色谱图全扫描，检测质量范围内的所有离子，得到 t-离子流强度 图，图中的峰可进一步得到该组分质谱图选择离子流色谱图只选择特定质量离子进行检测，用于定量分析质谱图不同质荷比的离子经质量分析器分开后，得到 m/z-离子流强度 图LC-M

8、S 联用联用1.LC-MS接口技术作用： 1.去溶剂化 2.阻隔大气压与真空系统 3.离子化 4.去除中性物质和反极性电荷 ESIAPCI2.LC-MS 条件优化 离子源APIESIAPCI低分子量单电荷离子高分子量多电荷离子一般只生成单电荷离子热不稳、难汽化、极性化合物热稳定、易汽化，极性较低化合物（加热模块）离子子在液体中生成离子子在气体中生成几乎无碎片离子可能生成加合物 离子模式正离子适用与碱性样品，可用乙酸或甲酸对样品酸化负离子适用与酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品酸化 流动相 水、甲醇、乙腈 缓冲液避免不挥发，易结晶。 流量和色谱柱3.样品预处理反相固相萃取 作用：净化、富集、转换溶

9、剂、保护色谱柱 步骤：预处理 上样 洗去杂质 洗脱收集分离物 模式：目标物在柱上保留后被洗脱 干扰物在柱上保留后被洗脱GC-MS LC-MS 对比对比GC-MSLC-MS适用对象易挥发、热稳定、小分子 高沸点、热温差、大分子、强极性常用离子化方式EI、CIESI、APCI有无标准谱库有无MS-MS 联用联用1.分类空间串联：四级杆串联质谱（QQQ）、四级杆和飞行时间串联（Q-TOF）时间串联：离子阱两种模式都需碰撞活化室2.QQQ结构离子源第一分析器Q1第二分析器Q3接收室碰撞室Q33.工作方式子离子扫描 结构分析母离子扫描 结构、分子量分析中性丢失扫描 相差固定质量离子多离子反应监测 定量分析 4.扫描模式扫描模式扫描模式QIQ2Q