实验二 细菌涂(抹)片的制备和革兰氏染色

1、实验二实验二细菌涂（抹）片的制备和革兰氏染色细菌涂（抹）片的制备和革兰氏染色 目的要求：目的要求：1 1、掌握细菌抹片的制备方法和常用染色方法。、掌握细菌抹片的制备方法和常用染色方法。2 2、认识革兰氏染色和抗酸性染色的反应特性。、认识革兰氏染色和抗酸性染色的反应特性。实验内容：实验内容：1 1、 细菌抹片的制备：细菌抹片的制备：l玻片准备：透明、洁净、无油渍。玻片准备：透明、洁净、无油渍。l抹片：液体材料、非液体材料、组织脏器材料的抹片方法讲解、示范。抹片：液体材料、非液体材料、组织脏器材料的抹片方法讲解、示范。l干燥固定：火焰固定和化学固定的示范。讲解其目的及注意事项。干燥固定：火焰固定和

2、化学固定的示范。讲解其目的及注意事项。2 2、 细菌涂片的制备：讲解并示范涂片、干燥、固定的方法。细菌涂片的制备：讲解并示范涂片、干燥、固定的方法。3 3、 细菌常用染色方法：细菌常用染色方法：革兰氏染色法革兰氏染色法细菌抹片细菌抹片 的制备的制备革兰氏染色法：革兰氏染色法：1. 1. 制片：取待检病料或细菌培养物常规抹（涂）片、干燥、制片：取待检病料或细菌培养物常规抹（涂）片、干燥、固定。固定。 2. 2. 初染：滴加结晶紫，染色初染：滴加结晶紫，染色1-21-2分钟，水洗。分钟，水洗。 3. 3. 媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1 1分钟，水洗。分

3、钟，水洗。 4. 4. 脱色：用滤纸吸取或甩去载玻片上的残水，将载玻片倾脱色：用滤纸吸取或甩去载玻片上的残水，将载玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加斜，在白色背景下，用滴管流加95%95%乙醇脱色，直至流出的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时（乙醇无紫色时（20203030秒），立即水洗。秒），立即水洗。 5.5.复染：用复红液复染约复染：用复红液复染约2 2分钟，水洗。分钟，水洗。6. 6. 镜检：用滤纸吸水，干燥后，显微镜油镜观察。镜检：用滤纸吸水，干燥后，显微镜油镜观察。GG+ +菌与菌与GG- -菌细胞壁的区别菌细胞壁的区别细胞壁细胞壁革兰阳性菌革兰阳性菌革兰阴性菌革兰阴性菌强强度度较坚

4、韧较坚韧较疏松较疏松厚厚度度2180nm1015nm肽聚糖层肽聚糖层可达可达50层层12层层肽聚糖量肽聚糖量50%80%5%80%糖类量糖类量约约45%15%20%脂类量脂类量1%4%1122%磷壁酸磷壁酸外外膜膜革兰氏染色法过程示意图革兰氏染色法过程示意图革兰氏染革兰氏染 色法动画色法动画革兰阳性菌革兰阳性菌革兰阴性菌革兰阴性菌革兰氏革兰氏 染染 色法色法革兰氏染革兰氏染 色法动画色法动画实验报告：实验报告：1 1、细菌抹片或涂片革兰氏染色的显微镜观察结果。、细菌抹片或涂片革兰氏染色的显微镜观察结果。2 2、革兰氏染色法的具体程序和注意事项。、革兰氏染色法的具体程序和注意事项。涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色12min水洗、吸干镜检镜检细菌的单染色细菌的单染色细菌抗酸染色细菌抗酸染色1. 初染初染:用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲