《化学生物学》课件Part 1

1、2022/7/1012022/7/102 1833年，Payen和Persoz分离出淀粉酶。1864年，Hoppe-Seyler从血液分离出血红蛋白，并将其制成结晶。19世纪末，Fischer证明蛋白质是由氨基酸组成的，并用氨基酸合成了多种短肽 。 1938年，德国化学家Gerardus J. Mulder引用“Protein” 一词来描述蛋白质。 2022/7/1031951年, Pauling采用X（射）线晶体衍射发现了蛋白质的二级结构-螺旋(-helix)。 1953年，Frederick Sanger完成胰岛素一级序列测定。 1962年，John Kendrew和Max Perutz确

2、定了血红蛋白的四级结构。20世纪90年代以后，后基因组计划。2022/7/104分布广：所有器官、组织都含有蛋白质；细胞的各个部分都含有蛋白质。含量高：蛋白质是细胞内最丰富的有机分子，占人体干重的45，某些组织含量更高，例如脾、肺及横纹肌等高达80。蛋白质的生物学重要性1. 蛋白质是生物体重要组成成分2022/7/1051）作为生物催化剂（酶）2）代谢调节作用3）免疫保护作用4）物质的转运和存储5）运动与支持作用6）参与细胞间信息传递2. 蛋白质具有重要的生物学功能3. 氧化供能2022/7/106什么是蛋白质? 蛋白质（protein）是由许多氨基酸（amino acids）通过肽键（pep

3、tide bond） 相连形成的大分子含氮化合物。2022/7/107内容第一节 氨基酸第二节 多肽第三节 蛋白质2022/7/108氨基酸的结构与分类一氨基酸的性质二氨基酸的应用三第一节 氨基酸氨基酸的化学反应四2022/7/109一、氨基酸的结构与分类存在自然界中的氨基酸有300余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种，且均属 L-氨基酸（甘氨酸除外）。L-氨基酸的通式 （R为侧链）R2022/7/10102022/7/1011氨基酸分类疏水性氨基酸极性氨基酸中性氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸脂肪族氨基酸芳香族氨基酸2022/7/1012此类氨基酸在水溶液中溶解度小脂肪族氨基酸2022/7/1

4、013芳香族氨基酸2022/7/1014含羟基或硫氨基酸2022/7/1015可发生质子化，使之带正电荷碱性氨基酸2022/7/1016解离而带负电荷酸性氨基酸及其酰胺2022/7/10172022/7/1018几种特殊氨基酸脯氨酸（亚氨基酸）Proline Pro P2022/7/1019半胱氨酸 +胱氨酸二硫键-HH2022/7/1020修饰性氨基酸羟赖氨酸HO-Lys羟脯氨酸HO-Pro苏氨酸、丝氨酸、酪氨酸磷酸化丝氨酸糖基化天冬酰胺糖基化2022/7/10211光学性质2离解性质3参与的化学反应二、氨基酸的性质2022/7/10221.光学性质光学活性（旋光性）2022/7/1023含

5、共轭双键的氨基酸具有紫外吸收性质 光吸收性质 2022/7/1024大多数蛋白质含有这两种氨基酸残基，所以测定蛋白质溶液280nm的光吸收值是分析溶液中蛋白质含量的快速简便的方法。2022/7/1025氨基酸是两性电解质，其解离程度取决于所处溶液的酸碱度。2.解离性质2022/7/1026pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸的兼性离子 阳离子阴离子2022/7/1027等电点 (isoelectric point, pI)在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性。此时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点。2022/7/1028甘氨

6、酸滴定曲线2022/7/10292022/7/1030当溶液的pH大于等电点时，氨基酸带净负电荷；当溶液的pH小于等电点时，氨基酸带净正电荷。2022/7/10313.氨基酸的应用医药工业化妆品工业食品工业化学工业2022/7/10324.氨基酸的反应Schiff碱 醛氨基酸Schiff碱反应 2022/7/1033茚三酮反应氨基酸与茚三酮水合物共热，可生成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在570nm处。由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。2022/7/1034 氨基酸的-羧基与另一个氨基酸的-氨基脱水缩合而生成二肽，多个氨基酸缩合生成多肽。2022/7/1035

7、+-HOH肽键2022/7/1036多肽的结构一多肽的性质二天然存在的重要多肽三第二节 多肽多肽的化学合成四2022/7/1037一、多肽的结构肽键是由一个氨基酸的-羧基与另一个氨基酸的-氨基脱水缩合而形成的化学键。2022/7/1038+-HOH甘氨酰甘氨酸肽键2022/7/1039色氨酰蛋氨酰天冬氨酰苯丙氨酸2022/7/1040丝氨酰甘氨酰酪氨酰丙氨酰亮氨酸2022/7/1041牛核糖核酸酶2022/7/1042肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。两分子氨基酸缩合形成二肽，三分子氨基酸缩合则形成三肽肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残基(residue)。由十个以

8、内氨基酸相连而成的肽称为寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相连形成的肽称多肽(polypeptide)。2022/7/1043氨基末端（amino terminal）或 N 末端：多肽链中有自由氨基的一端羧基末端（carboxyl terminal）或C 末端：多肽链中有自由羧基的一端多肽链有方向性：多肽链从氨基末端走向羧基末端。2022/7/1044N末端C末端2022/7/1045二、多肽的性质 两性离解性质 水解性质122022/7/1046三、天然存在的多肽四1谷胱甘肽2激素类肽3神经肽2022/7/1047 1.谷胱甘肽是体内重要的还原剂 谷胱甘肽(glutathion

9、e, GSH)2022/7/10482.体内有许多激素属寡肽或多肽2022/7/10493. 神经肽是脑内一类重要的肽 在神经传导过程中起重要作用的肽类称为神经肽(neuropeptide)。酪氨酰甘氨酰甘氨酰苯丙氨酰蛋氨酸2022/7/1050四、多肽的化学合成全自动多肽合成系统多肽固相合成法2022/7/1051蛋白质结构一蛋白质分类二蛋白质性质三第三节 蛋白质蛋白质分离四2022/7/1052一、蛋白质结构四1一级结构2二级结构3三级结构4四级结构2022/7/1053高级结构或空间构象(conformation)一级结构(primary structure)二级结构(secondary

10、 structure)三级结构(tertiary structure)四级结构(quaternary structure)2022/7/1054胰岛素的三维结构2022/7/10551.一级结构蛋白质一级结构(primary structure)是指蛋白质分子中，从N端到C端的氨基酸排列顺序。形成一级结构的化学键：肽键（主要化学键）二硫键2022/7/1056一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础，但不是决定蛋白质空间构象的唯一因素。2022/7/1057化学或反向遗传学方法分析或演绎多肽链的氨基酸序列分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成（离子交换层析）测定多肽链的氨基末端与羧基末端为何种

11、氨基酸残基把肽链水解成片段，分别进行分析测定各肽段的氨基酸排列顺序，一般采用Edman降解法 一般需用数种水解法，并分析出各肽段中的氨基酸顺序，然后经过组合排列对比，最终得出完整肽链中氨基酸顺序的结果。2022/7/1058例：镰刀形红细胞贫血重要蛋白质氨基酸序列的改变可引起疾病2022/7/10592022/7/10602.二级结构 蛋白质二级结构(secondary structure)是指蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象 。2022/7/1061肽键是一个刚性的平面参与肽键的6个原子C1、C、O、N、H、C2位于同一

12、平面，C1和C2在平面上所处的位置为反式(trans)构型，此同一平面上的6个原子构成了所谓的肽单元 (peptide unit) 。2022/7/1062 -螺旋 ( -helix ) -折叠 ( -pleated sheet ) -转角 ( -turn ) 无规卷曲 ( random coil ) 蛋白质二级结构的主要形式：维系二级结构的主要化学键： 氢键2022/7/1063-螺旋是常见的蛋白质二级结构2022/7/1064-螺旋连续排列的酰胺平面旋转形成面螺旋右手螺旋酰胺平面与螺旋的长轴平行一个AA0.15nm,每3.6个为一圈(0.54nm)螺旋借助相邻两圈之-NH-CO-稳定AA的

13、侧链伸向螺旋外侧AA的大小和电荷可以影响螺旋的形成2022/7/1065-折叠使多肽链形成片层结构2022/7/1066平行式：所有参与-折叠的肽链的N端在同一方向。 反平行式：肽链的极性一顺一倒，N端间隔相同 2022/7/1067-折叠较为伸展,酰胺平面以锯齿状排列两个片段可以是平行或反平行AA间距 平行 0.65nm 反平行 0.67nm只有片段间氢键,无片段内氢键AA的侧链伸向锯齿状结构的外侧小侧链的AA有利于-折叠的生成2022/7/1068-转角和无规卷曲在蛋白质分子中普遍存在-转角2022/7/1069无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。 2022/7/1070应用

14、物理学、生物信息学原理可进行蛋白质空间结构测定或预测通常采用圆二色光谱(circular dichroism，CD)测定溶液状态下的蛋白质二级结构含量。 -螺旋的CD峰有222nm处的负峰、208nm处的负峰和198nm处的正峰三个成分；-折叠在216nm处有一负峰，在185nm-200nm处有一正峰。而-转角CD谱不很固定。 二级结构测定2022/7/1071SP175参考蛋白库CD光谱2022/7/1072氨基酸残基的侧链可影响二级结构的形成蛋白质二级结构是以一级结构为基础的。一段肽链其氨基酸残基的侧链适合形成-螺旋或-折叠，它就会出现相应的二级结构。这是氨基酸残基的侧链的相互作用可稳定或

15、去稳定相应的二级结构的原因。 2022/7/1073一段肽链有多个酸性氨基酸残基相邻，则在pH7.0时这些残基的游离羧基都带负电荷，彼此相斥，妨碍-螺旋的形成。同样，多个碱性氨基酸残基在一肽段内，由于正电荷相斥，也妨碍-螺旋的形成。天冬酰胺、亮氨酸的侧链很大，也会影响-螺旋形成。脯氨酸的结构不利于形成-螺旋。形成-折叠的肽段要求氨基酸残基的侧链较小，才能容许两条肽段彼此靠近。2022/7/1074超二级结构在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个特殊的空间构象，并发挥专一的功能 。超二级结构：2个或2个以上二级结构组合， ，2022/7/1075细胞色

16、素C 细胞核抗原 纤溶酶原 2022/7/1076 蛋白质的三级结构(tertiary structure)是指整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置。即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。三级结构是指整条多肽链的空间分布多肽链在二级结构基础上进一步折叠形成蛋白质三级结构3.三级结构2022/7/1077肌红蛋白 (Mb) 的三级结构 N 端 C端153 氨基酸残基1 HemeAH八段-螺旋无-S-S-键功能：储存O22022/7/1078 维持三级结构稳定主要依靠非共价键 蛋白质三级结构的形成和稳定主要靠弱的相互作用力或称非共价键、次级键，主要有氢键、 Van der Waals力、疏水作用

17、、和离子键等。2022/7/10792022/7/1080三级结构可含有功能各异的结构域大分子蛋白质的三级结构常可分割成一个或数个球状或纤维状的区域，折叠得较为紧密，各行使其功能，称为结构域(domain) 。2022/7/1081结构域与功能功能相近者具有相似的结构域不同结构域具有不同功能多功能要求多结构域2022/7/1082三维空间结构测定X射线衍射法(X-ray diffraction)和核磁共振技术(nuclear magnetic resonance, NMR)是研究蛋白质三维空间结构最准确的方法。 2022/7/1083用分子力学、分子动力学的方法，根据物理化学的基本原理，从理论

18、上计算蛋白质分子的空间结构。 根据蛋白质的氨基酸序列预测其三维空间结构：通过对已知空间结构的蛋白质进行分析，找出一级结构与空间结构的关系，总结出规律，用于新的蛋白质空间结构的预测。2022/7/1084亚基之间的结合力主要是疏水作用，其次是氢键和离子键。蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，称为蛋白质的四级结构。有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一条多肽链都有完整的三级结构，称为蛋白质的亚基 (subunit)。4.四级结构2022/7/1085血红蛋白的四级结构亚基通过亚基间的相互作用联系在一起由四个亚基组成的蛋白质四级结构。 2022/7/1086生物体内有很多由

19、多亚基组成的蛋白质生物体内许多蛋白质往往由多个亚基组成，亚基之间凭借次级键形成蛋白质四级结构。 胰岛素受体：由4个亚基组成(22) ，亚基与亚基形成单体(monomer)，2个单体形成二聚体(dimer)。 2022/7/1087血红蛋白的一、二、三、四级结构2022/7/1088蛋白质构象改变可导致构象病蛋白质构象疾病：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。2022/7/1089蛋白质构象改变导致疾病的机制：有些蛋白质错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变

20、。这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨丁顿舞蹈病、疯牛病等。2022/7/1090疯牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一组人和动物神经退行性病变。正常的PrP富含-螺旋，称为PrPc。PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为-折叠的PrPsc，从而致病。PrPc-螺旋PrPsc-折叠正常疯牛病疯牛病2022/7/10911依蛋白质组成分2依蛋白质外形分3依蛋白质功能分二、蛋白质的分类2022/7/1092组成蛋白质的元素：主要有C、H、O、N和S。有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼，个别蛋白质还含有碘 。1.依蛋白质组成分2022

21、/7/1093 各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16。 由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此，只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量：样品中蛋白质的含量 ( g % )= 每克样品含氮克数 6.25100%100/16蛋白质元素组成的特点：2022/7/1094单纯蛋白质（simple protein）结合蛋白质 = 蛋白质部分 + 非蛋白质部分（conjugated protein）辅基（prosthetic group）根据分子组成分为单纯蛋白质和结合蛋白质两类分类辅基举例脂蛋白脂类血浆脂蛋白（VLDL、LDL、HDL等）糖蛋白糖基或糖链胶原蛋白、纤连蛋白等核

22、蛋白核酸核糖体磷蛋白磷酸基团酪蛋白（casein）血红素蛋白血红素（铁卟啉）血红蛋白、细胞色素c黄素蛋白黄素核苷酸（FAD、FMN）琥珀酸脱氢酶金属蛋白铁铁蛋白锌乙醇脱氢酶钙钙调蛋白锰丙酮酸羧化酶铜细胞色素氧化酶2022/7/1095结合蛋白质及其辅基 2022/7/10962.依蛋白质形状分类纤维状蛋白质球状蛋白质形状决定性质2022/7/1097调节作用输运作用贮藏作用防御作用催化作用蛋白质3.依蛋白质功能分类2022/7/1098四1两性解离性质2胶体性质3变性与复性性质4显色反应三、蛋白质的性质2022/7/1099 1.蛋白质具有两性电离性质蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基

23、酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。蛋白质的等电点( isoelectric point, pI) 2022/7/101002022/7/101012.蛋白质具有胶体性质蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万之间，其分子的直径可达1100nm，为胶粒范围之内。 2022/7/10102在等电点的蛋白质水化膜酸碱酸碱酸碱脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉2022/7/10103蛋白质胶体稳定的因素：颗粒表面电荷水

24、化膜2022/7/101043.很多因素可引起蛋白质变性在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，也即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。蛋白质的变性(denaturation)2022/7/10105造成变性的因素变性的本质 破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白质的一级结构。如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等 。 2022/7/10106应用举例临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。此外, 防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。 2022/7/10107若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质

25、仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性 。蛋白质的复性(renaturation) 2022/7/10108天然状态，有催化活性 尿素、 -巯基乙醇 去除尿素、-巯基乙醇非折叠状态，无活性2022/7/10109在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。 蛋白质沉淀2022/7/10110蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。 蛋白质的凝固作用(protein coagulation) 2022/7/101114.蛋白质呈色反应可用于溶液蛋白质测定蛋白质经水

26、解后产生茚三酮反应 蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应(ninhydrin reaction) 。2022/7/10112肽链中的肽键可与双缩脲试剂反应 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色，此反应称为双缩脲反应(biuret reaction) 。双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。2022/7/10113四1透析与超滤2沉淀与盐析3利用带电性质4相分配原理5超速离心四、蛋白质的分离2022/7/101141.透析及超滤法可清除蛋白质溶液中的小分子化合物利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。超滤法 透析(dialysis)2022/7/101152.丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀是常用的蛋白质沉淀方法 使用丙酮沉淀时，必须在04低温下进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。 2022/7/10116 盐析(salt precipitation)是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。 2022/7/10117将某