无菌薄膜过滤法（模版）

1、公司*产品无菌检査方法适用性试验1、样品信息样品名称生产厂家规格型号批号2、培养基及试剂名称生产厂家批号硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆陈液体培养基胰酪大豆腺琼脂培养基0.9%无菌氯化钠溶液沙氏葡萄糖液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基冲洗液及稀释液3、菌种基本宿息:菌种名称菌种来源菌种编号菌种代数金黄色葡萄球菌CMCC (B) 26003大肠埃希菌CMCC (B) 44102生抱梭菌CMCC (B) 64941枯草芽砲杆菌CMCC (B) 63501白色念珠菌CMCC (F) 98001黑曲霉CMCC (F) 980034、菌液制备：2.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽砲杆菌的新鲜培养物至胰酪

2、大豆 腺培养基中或胰酪大豆腺脂培养基上,3035C培养1824小时，培养物用0.9% 无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数小于lOOcfu的菌悬液。2.2接种生抱梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，3035C培养18 24小时，培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数小于lOOcfu的菌悬液。2.3接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或沙氏葡萄糖琼脂斜 面培养基上，2025C培养2448小时，培养物用().9%无菌氯化钠溶液制成每 lml含菌数小于lOOcfu的菌悬液。2.4接种黑曲霉菌的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，2025C 培养57天，加入35ml含0

3、.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠 溶液，将孑包子洗脱。然后，采用适宜的方法吸岀抱子悬液至无菌试管内，用含 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数小于lOOcfu 的菌抱子悬液。5、菌落计数:菌种名称稀释级别菌落计数cfu/ml金黄色葡萄球菌大肠埃希菌生抱梭菌枯草芽砲杆菌白色念珠菌黑曲霉6、无菌检查薄膜过滤法方法适用性试验：6供试液准备：描述供试液制备过程(每个试验菌取样品1()个)。6.2试验组：取1个封闭式薄膜过滤器，每个过滤器取 上述6.1屮制备的供试 液总量进行薄膜过滤后,用进行冲洗，冲洗次，每次ml,在最后一次的冲洗液屮加

4、入小于lOOcfu的金黄色葡萄球菌、过滤，加入100ml 硫乙醇酸盐流体培养基至滤筒内；大肠埃希菌、生抱梭菌、枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲霉按照上述步骤操作， 其中大肠埃希菌、生抱梭菌加入硫乙醇酸盐流体培养基，枯草芽抱杆菌、白色念 珠菌、黑曲霉加入100ml胰酪大豆腺液体培养基。6.3对照组：另取6个封闭式薄膜过滤器，其中3个滤筒内分别加入100ml硫乙 醇酸盐流体培养基，并在每个滤筒内分别加入小于lOOcfu的金黄色葡萄球菌、 大肠埃希菌、生抱梭菌；另3个滤筒分别加入小于lOOcful枯草芽抱杆菌、白色 念珠菌、黑曲霉，并在每个滤筒分别加入胰酪大豆腺液体培养基。注：6. 1和6.2中供试液

5、的制备过程、每个滤筒内过滤供试液的量、冲洗液种 类、冲洗次数、每次冲洗量由企业根据产品的特性和药典的要求确定。6.4培养：上述培养基置规定的温度培养，培养时间不超过5天，逐日观察记录各管试验菌 生长情况。6. 5验证结果:培养基硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆月东液体培养基培养时间(d)1234512345金黄色葡萄球菌试验组/对照组/大肠埃希菌试验组/对照组/生總梭菌试验组/对照组/枯草芽砲杆菌试验组/对照组/白色念珠菌试验组/对照组/黑曲霉试验组/对照组/“/”表示不适用；“-”表示试验菌生长微弱、缓慢或不生长；“+”表示试验菌生长良好与对照管相比，含供试品各容器中的试验菌均生长良好，表明 経

6、和产品的检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽 略不计，照此检查方法和检査条件进行供试品的无菌检查。6. 6供试品无菌检查方法的确定：取供试品20个，以无菌操作拆开每个包装，供试液制备方法（同6. 1）,取两个封闭式薄膜过滤器进行过滤，每个滤筒过滤ml的供试液后用进行冲洗，冲洗次，每次冲洗 ml,滤筒内分别加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基和100ml胰酪大豆腺液体培养基。另取供试品10个，以无菌操作 拆开每个包装，供试液制备方法（同6. 1）,用一个封闭式薄膜过滤器进行过滤， 每个过滤器过滤ml的供试液后按上述方法进行培养，并接种小于lOOcfu的作为阳性对照。按中华人民共和国药典2015年版四部