动物生物化学实验ppt课件

1、动物生物化学实验主讲：伍红西南民族大学生命科学与技术学院.动 物 生 物 化 学 实 验实验一 实验室根本知识实验二 氨基酸纸层析实验三 血清蛋白含量测定实验四 影响酶活性的要素实验五 脂质的薄层层析实验六 凝胶层析法根本练习实验七 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验八 动物组织中DNA提取.实验一 实验室根本知识一、实验室规那么二、实验室常用量器及仪器设备引见三、试剂配制四、实验误差与抑制五、实验室平安知识简介六、实验记录及实验报告.一、实验室规那么1. 实验前仔细预习实验内容。2. 实验时遵守课堂纪律，不大声喧哗。3. 严厉按操作规程操作。4. 维护实验室各种器具及仪器设备，如有损坏，及时报告，

2、并按规定赔偿。5. 公用试剂用后放回原处，瓶盖随开随盖防止污染。6. 留意平安，不得将易燃试剂接近火焰，严禁用口汲取有毒药品和试剂，凡发生烟雾，有毒气体和不良气味的实验应在通风橱内进展。7. 坚持实验室整洁，每次实验毕，由三个组同窗清扫及整理实验室。.二、实验室常用量器及仪器设备引见1. 常用量器1容量瓶 凡要求准确0.01)配制一定浓度的溶液时，必需运用容量瓶。以容量瓶配制试剂时的操作.2刻度吸管.3移液器.2.常用仪器设备1离心机 承载离心管，并以离心力使管内物质沉降进而呵斥固体和液体分别的机具。高速冷冻离心机.离心技术简介 离心技术在生物科学，特别是在生物化学和分子生物学研讨领域，已得到

3、非常广泛的运用，每个生物化学和分子生物学实验室都要配备多种型式的离心机。 离心技术主要用于各种生物样品的分别和制备。 生物样品悬浮液在高速旋转下，由于宏大的离心力作用，使悬浮的微小颗粒细胞器、生物大分子的沉淀等以一定的速度沉降，从而与溶液得以分别，而沉降速度取决于颗粒的质量、大小和密度。. 离心力：当一个粒子生物大分子或细胞器在高速旋转下遭到离心力作用时，此离心力“F由下式定义，即： F = ma =m.V2/r= m2 r a 粒子旋转的加速度， m 沉降粒子的有效质量，粒子旋转的角速度， r粒子的旋转半径( cm )。离心的根本原理 .相对离心力： 离心力常用地球引力的倍数来表示，因此称为

4、相对离心力 “ RCF 。或者用数字乘“g来表示。 相对离心力是指在离心场中，作用于颗粒的离心力相当于地球重力的倍数，单位是重力加速度“g 980cm/sec2， 相对离心力RCF可用下式计算： RCF = 1.119105(rpm)2 r ( rpm revolutions per minute每分钟转数，r/min ). 由上式可见，只需给出旋转半径r，那么RCF和rpm之间可以相互换算。但是由于转头的外形及构造的差别，使每台离心机的离心管，从管口至管底的各点与旋转轴之间的间隔是不一样的，所以在计算时规定旋转半径均用平均半径“ra v替代： ra v=( r minrmax) / 2 Rm

5、in旋转轴RaveRmaxr的丈量. 离心机可分为工业用离心机和实验用离心机 实验用离心机又分为： 制备型离心机：主要用于分别各种生物资料，每次分别的样品容量比较大. 分析型离心机：普通都带有光学系统，主要用于研讨纯的生物大分子和颗粒的理化性质，根据待测物质在离心场中的行为用离心机中的光学系统延续监测，能推断物质的纯度、外形和分子量等。 分析性离心机都是超速离心机。 工业离心机：主要用于工业上的分别。离心机的主要类型. 制备性离心机可分为三类：普通离心机：最大转速6000 rpm左右，最大相对离心力近6000g，容量为几十毫升至几升， 高速冷冻离心机：最大转速为2000025000rpmr/m

6、in，最大相对离心力为89000g，最大容量可达3升， 超速离心机：转速可达5000080000 rpm，相对离心力最大可达510000g，最著名的消费厂商有美国的贝克曼公司和日本的日立公司等，离心容量由几十毫升至2升.超速离心机.2分光光度计 分光光度计是现代生化及分子生物学实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。 .根本原理 溶液中的物质在光的照射下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光经过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合比色原理兰伯特-比耳定律.3

7、电热恒温水浴锅.三、试剂配制1.确定所配试剂浓度分量浓度：单位体积中所含溶质的分量。表示为克/升g/L，或毫克/升mg/L，微克/升ug/L百分浓度：%，需注明W/W, W/V, V/V摩尔浓度：每升溶液中所含溶质的摩尔数。mol/L, mmol/L, umol/L.2. 准确称量、量取.3. 溶解4. 定容.四、实验误差与抑制 由于外界条件的影响、仪器的优劣以及觉得器官的限制，实验测得的数据只能到达一定的准确度。 实验测得的数据与真实值之间的差就是实验误差 实验误差普通可分为系统误差、偶尔误差和过失误差。. 在一样条件下多次丈量同一物理量时，丈量误差的大小和符号都不变；在改动丈量条件时，它又

8、按照某一确定规律而变化的丈量误差称为系统误差。 系统误差的特点： 和偶尔误差不同，它不具有抵偿性，即在一样条件下反复多次丈量，系统误差无法相互抵消。 产生系统误差的诸要素是可以被发现和加以抑制的。系统误差.消除产生系统误差的根源 从产生误差的根源上消除系统误差是最根本的方法。经过对丈量过程中能够产生系统误差的各种环节作仔细分析，找出缘由并在丈量前加以消除。 假设系统误差是由外界条件变化引起的，应在外界条件比较稳定时进展丈量。系统误差的减小和消除.采用修正法消除系统误差 预先将仪器的系统误差检定出来或计算出来，做出误差表或误差曲线，然后取与误差数值大小一样、符号相反的值作为修正值，进展误差修正。

9、 即：x真=x测+x修 如天平砝码不准，应采用规范砝码进展校核，确定每个砝码的修正值。在称量时就应加上相应砝码的修正值，容量瓶、滴定管、移液管等容量仪器均可用水分量法求出各自的修正值。. 对消法消除系统误差 进展两次丈量，使两次读数时出现的系统误差大小相等、符号相反。两次丈量值的平均值作为丈量结果，以消除系统误差。 例如，由于仪器灵敏度的限制，丈量仪器的旋钮由右边调近丈量值与由左边调近丈量值的结果往往不同。这时，可取两个读数的平均值作为丈量值。 系统误差的消除很难找到一个普遍有效的方法。这是由于呵斥系统误差的各个要素，没有内在的联络。要抑制它们，只能详细问题详细分析。. 在实验时即使采用了最完

10、善的仪器、选择了最恰当的方法、经过了非常精细的观测，所测得的数据也不能够每次反复，这样的误差即为偶尔误差偶尔误差.偶尔误差的抑制 偶尔误差是由于相互制约、相互作用的一些偶尔要素所呵斥的，它有时大、有时小、有时正、有时负，方向不一定，大小和符号普通服从正态分布规律。偶尔误差可采取多次丈量，取平均值的方法来消除，而且丈量次数越多在没有系统误差存在的情况下，平均值就接近于真值。.五、实验室平安知识简介一实验室平安1. 平安用电2. 水火无情3. 严防中毒4. 防止损伤5. 生物危害6. 射线损伤.二实验室灭火1. 切断室内一切电源，火源2. 报警3. 导线着火时，切断电源或运用四氯化碳灭火器，不能用水及二氧化碳灭火器，以免触电4. 可燃性液体着火时，可用湿布或沙土覆盖，隔绝空气灭火。不能用水灭火，这样会扩展熄灭面积。5. 金属钠着火时可用砂子覆盖6. 衣服着火切忌奔走，应卧地滚动灭火。.三实验室急救1. 触电2. 玻璃割伤及其他机械损伤3. 烫伤4. 化学试剂灼伤5. 汞中毒.六、实验记录及实验报告 每次实验要做到课前仔细预习，实验操作中仔细察看并照实记录实验景象与数据，课后及时完成实验报告。.课前预习 实验课前要将实验称号、目的和要求、实验内容与原理、操作方法和步骤等简单扼要地写在记录本中，做到心中有数。.实验记录 预备一本正规的笔记本作为实验记录本。 将实验条件下察看到的景