浅谈淀粉样变性肾病的染色方法体会3100字

1、浅谈淀粉样变性肾病的染色方法体会3100字 目的 讨论淀粉样变性肾病的染色方法及体会。方法 对15例淀粉样变性肾病患者的活检标本进展常规染色、刚果红、高锰酸钾氧化刚果红染色后以偏振光显微镜观察， 同时予以免疫荧光、免疫组化染色， 使用透视电镜观察， 分析淀粉样变性肾病的染色方法及效果。结果 15例标本可见淀粉样蛋白沉积区HE呈均质、淡染的嗜伊红状， PASM染色呈毛刷样构造， 刚果红染色呈砖红色、偏振光下呈青绿色。免疫组化染色中AA染色均为阴性， 染色显示14例为阴性， 染色显示14例为阳性。电镜下观察有纤维状构造且排列紊乱。结论 对淀粉样变性肾病需采用多种染色方法结合效果较好， 使用碱性刚果

2、红染色较为便利使用， 使用免疫组化染色后透视电镜观察有助于发现早期不典型病变。 毕业 淀粉样变性肾病；病理技术；染色方法DOI：10.14163/j ki.11-5547/r.2022.05.088肾脏是淀粉样变性常见的受累器官， 约占肾活检的1.25%， 多发生于年龄在50岁以上的老年人群中。淀粉样变性肾病是指淀粉纤维大量沉积于肾脏引起的病变， 随着我国人口老龄化的进程不断加快， 其发病率也呈逐年上升的趋势1。而关于淀粉样变性肾病的诊断率一直较低， 确诊率低， 更需要探寻更佳的病理技术进展诊断。本文主要讨论淀粉样变性肾病的染色方法及体会， 旨在进步病理技术， 报告如下。1 资料与方法1. 1

3、 一般资料 选取本院2022年3月2022年12月收治的淀粉样变性肾病患者的活检标本共15例作为本次实验的实验标本。1. 2 方法1. 2. 1 对15例标本进展常规染色及特殊染色。标本的常规处理。首先使用10%福尔马林进展固定， 并给予梯度酒精脱水， 每个步骤进展30 min， 使用二甲苯透明10 min2， 给予60浸蜡后进展石蜡包埋。切片厚度为5 m， 并置于45水浴展开， 枯燥时间为20 min。脱蜡至水。染色配置分别为：HE、储藏液、碱性工作液、碱性刚果红工作液、酸性高锰酸钾溶液、5%草酸溶液。碱性刚果红染色方法：使用mayer氏苏木素液进展内染色10 min后蒸馏水洗， 给予盐酸乙

4、醇分化再用蒸馏水洗， 随后放入到碱性工作液内进展染色20 min， 再放入碱性刚果红工作液内20 min， 进展无水乙醇三次脱水， 二甲苯透明后固封。酸性高锰酸钾氧化刚果红染色。1. 2. 2 免疫组织化学染色。首先对标本进展常规处理， 包括对标本进展固定、以石蜡包埋、冰冻切片、脱蜡至水、抗原修复并TBS洗5 min3。再利用3%双氧水阻断内源性过氧化物酶， TBS洗5 min3。其次， 进展抗体颜色， 使用抗鼠抗人淀粉样蛋白A、兔抗人轻链蛋白、兔抗人清点蛋白， 孵育1 h；TBS洗5 min3；滴入EnVision， TBS洗5 min后加色源底物DAB。使用蒸馏水漂洗， 进展苏木素的比照颜

5、色， 封片， 观察。标本使用偏振光显微镜观察和透视电镜观察。2 结果2. 1 15例淀粉样变性肾病患者的标本通过HE切片可以观察到特殊蛋白沉淀， 出现肾小球的部分阶段性均质粉染， 且无构造；部分标本小动脉壁也有特殊蛋白的沉淀。通过PAS染色显示为红色；Masson染色为9例浅绿色、6例粉色；PASM套染Masson染色为灰绿。碱性刚果红染色出现15例阳性， 光镜下观察有肾小球系膜区域和毛细血管壁， 小动脉有砖红色团块， 使用偏振光镜检查为苹果绿。使用酸性高锰酸钾氧化处理后标本仍均为阳性。2. 2 免疫组化染色中， AA染色均为阴性， 染色显示14例为阴性， 染色显示14例为阳性。电镜下观察有纤

6、维状构造且排列紊乱。染色、染色阳性表现为小动脉壁、毛细血管壁和或肾小球系膜区有团块沉淀， 直径为9 nm左右， 且无分支。3 讨论淀粉样变性主要可以分为两种， 即局灶性和系统性淀粉样变性， 系统性淀粉样变性主要包括血清淀粉样物质、免疫球蛋白轻链、衰老性、家族性的淀粉样变性以及透析性的淀粉样变性；局灶性淀粉样变性主要包括快速性进展相关的疾病克雅病等、帕金斯病以及局灶的免疫球蛋白轻链淀粉样变性。近年来， 随着免疫和分子生物学的进展， 临床上对淀粉样变性肾病已有较为明晰的认识， 关于淀粉样蛋白的检验技术日趋先进2。而对淀粉样病变的生化研究也别离出17种， 其中以轻链蛋白最为常见， 其次为淀粉样蛋白A

7、。HE染色是光镜检查肾标本中必备的染色方法之一， 能充分显示肾小管上皮细胞的损伤和炎细胞浸润程度， 还能显示肾小球的细胞增生情况3。PAS染色不仅具有HE染色的功能， 同时还能很好的显示基底膜， 区分内皮细胞、系膜细胞和上皮细胞， 可使检测者理解基底膜增生情况和毛细血管塌陷情况。PASM染色能明晰的观察到肾小球各种细胞及免疫复合物的成分和沉积情况， 并能帮助判别膜性肾病、淀粉样肾病、膜增生性肾小球肾炎4。Masson染色较为繁琐， 但染色效果较好， 可区分肾间质水肿和肾间质纤维化， 显示肾小球内沉积或聚集的IC或其他血浆蛋白成分。刚果红主要是观察肾淀粉样变性肾病， 染色方法简单5， 6。在以往

8、的临床研究中， 免疫组化法一直较多被用于诊断AA型， 并获得较好的效果， 但在诊断AL型时可能会发生轻链断裂的现象， 导致部分抗原决定簇缺失， 对抗体无任何反响， 出现误诊。因此， 在检测时可应用多种抗体进展免疫组化染色， 将轻链蛋白、淀粉样蛋白A结合使用， 使得诊断更为准确。而在病理染色的过程中本研究认为， 碱性刚果红染色出15例阳性， 且没有过多的分化步骤， 不会因为过度分化导致染色结果受到影响， 因此更为可靠， 加之使用偏振光显微镜使用， 可信度较高。但免疫组化染色使用透视电镜观察， 可以更好地发现淀粉样纤维， 对刚果红染色不明显的标本可以做补充观察。综上所述， 对淀粉样变性肾病需采用多

9、种染色方法结合效果较好， 使用碱性刚果红染色较为便利， 使用免疫组化染色后透视光镜观察有助于发现早期不典型病变。参考文献1 张燕， 陈剑， 刘海静， 等.石蜡切片免疫荧光法在肾病穿刺组织中的应用.北京大学学报医学版， 2022， 436：900-902.2 李敏， 姚梅宏， 曾玲， 等. PASM-Masson染色法在肾穿刺活检特殊染色中的应用与体会.临床与实验病理学杂志， 2022， 306：693-694.3 吕增华， 张杨杨， 朱玉红， 等.肾穿刺活检六胺银染色套染Masson染色方法的改进.临床与实验病理学杂志， 2022， 2811：1289-1290.4 郭海旺. HE染色和双酶染色观察大鼠肾的脉管构筑特点.中国美容医学， 2022， 21z2：47-48.5 豆文