动物细胞融合与单克隆抗体 (2)

1、2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体1克隆概念：是指从一个共同的祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体不同层次的克隆：a.子水平：如DNA的复制b.细胞水平：动物细胞的培养c.个体水平：“多莉”羊的产生2植物体细胞杂交植物细胞A植物细胞B原生质体A原生质体B原生质体融合杂种细胞组织培养杂种植株1、用什么方法去除细胞壁？2、人工诱导细胞融合常用什么方法？3、原生质体融合依赖的是膜结构的什么特点？4、这里用到了哪些细胞工程技术?5.这里用到了那些原理？34动物细胞融合细胞A细胞B杂种细胞灭活的病毒物理法化学法仙台病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒灭活的病毒具备：丧失了感染活

2、性保留诱导融合的活性5细胞核病毒颗粒细胞核灭活的病毒颗粒黏附在细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿过细胞膜连接细胞融合，形成单核杂种细胞用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程6一、动物细胞融合（细胞杂交）1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成单核的杂交细胞3、原理：细胞膜的流动性4、诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒75、过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、质融合）（核融合）细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核86、意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可

3、能。7、应用： 成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。最有价值的应用制备单克隆抗体910显微镜下细胞融合过程11动物细胞融合杂种细胞愈伤组织杂种植株植物细胞A植物细胞B 原生质体A原生质体B植物体细胞杂交去壁原生质体融合植物组织培养物理法化学法生物法：灭活的病毒动物细胞A动物细胞B杂种细胞常用方法121、动物细胞融合与植物体细胞杂交过程有何不同？它相当于植物体细胞杂交过程的哪一步？2、诱导动物细胞融合与植物原生质体融合的原理和方法是否基本相同？物理法化学法生物法灭活的病毒（仙台病毒）聚乙二醇（PEG）离心、振荡、电刺激13主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学

4、方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较14二、单克隆抗体什么是抗体？由何种细胞产生？主要分布在哪里？起何作用？效应B细胞血清特异性免疫作用抗体：机体受抗原刺激后产生的，并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 15161718读下面一段文字资料，思考以下问题：长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获

5、得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念2、怎样才能获得单克隆抗体？提示1：仅用细胞培养技术可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？用单个B细胞进行无性繁殖（克隆），得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗

6、体。19 设计方案：由于每一种B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，利用单个B淋巴细胞进行体外细胞培养（克隆），这种方式获得的抗体具有专一性。问题？ 这种抗体由于是用单个B细胞克隆得到的细胞群分泌的，其化学性质单一、特异性强，因此这种抗体又叫做单克隆抗体。20接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡短命细胞B淋巴细胞 所以B淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖，而癌细胞是可以无限增殖的。21骨髓瘤细胞 :恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可永远分裂和存活长命细胞。经筛选与驯化，现已建立多种骨

7、髓瘤细胞株没有抗体分泌物。因此可以利用小鼠骨髓瘤细胞与之融合，就可获得既能无限增殖又能产生单一抗体的细胞。22特点：产量低、特异性差、纯度低、反应不够灵敏常规抗体制备一个B淋巴细胞：只分泌一种特异性抗体单克隆抗体杂交瘤细胞 小鼠骨髓瘤细胞：能无限增殖融合 单克隆抗体 培养 向动物体内反复注射抗原，使动物产生抗体，然后从血清中分离所需抗体。优点：特异性强，灵敏度高。23制备过程：一筛二筛24B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞B淋巴细胞- B淋巴细胞B淋巴细胞-骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用

8、的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养3、单克隆抗体的制备过程第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高25免疫小鼠培养骨髓瘤细胞融合骨髓瘤细胞B淋巴细胞注射特定抗原蛋白选择培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体克隆杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞多种杂交细胞杂交瘤细胞有何特点？本过程利用的那些

9、技术？动物细胞融合技术动物细胞培养技术是否注射抗原（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？几种融合细胞？两次筛选的目的分别是什么？3、单克隆抗体制备过程与传统制备的抗体相比具有什么特点？26原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能产生足够数量的单一抗体。过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（ B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体27B BB B瘤 瘤瘤 瘤细胞融合后培养液中有几种细胞筛选杂种细胞已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但

10、一般不分裂增值。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，获得杂种细胞。28比较项目第一次筛选第二次筛选原理在选择性培养基中添加某种药物，特异性杀死骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞自身融合的细胞抗原抗体的特异性结合目标杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞29（1）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？思考： 因为B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下大量增殖的本领，所以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。30（2）单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工

11、程技术手段？动物细胞融合技术动物细胞培养技术31 应用可用于作为诊断试剂： 准确，高效，简易,快速。可用于疾病治疗。可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的 “生物导弹“。位置准确,副作用小,疗效高）“生物导弹”单克隆抗体药物+放射性同位素328下列关于细胞工程的叙述中，错误的是（ ）A植物细胞融合必须先制备原生质体B试管婴儿技术包括人工授精和胚胎移植两方面C经细胞核移植培育出的新个体只具有一个亲本的遗传物质D用于培养的植物器官或组织属于外植体C课堂反馈3310、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的B淋巴细

12、胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞A11、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 （ ）A.容易产生各种变异 B具有更强的全能性C.取材十分方便 D分裂增殖的能力强D12.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于( ) A.培养基不同； B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。A3413、动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合 中有特殊性的是（ ）A、融合的原理 B、融合的优点

13、C、融合的诱导手段 D、融合的过程14、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导 融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培 养基上不能存活、增殖的细胞是（ ）B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞A、 B、 C、 D、 C A3515、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。（1）_技术是单克隆抗体技术的基础。（2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于_培养基。（3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_。（4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用_。（5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的

14、_特点，又具备淋巴细胞的_特点。（6）淋巴细胞是由动物体_中的_细胞分化、发育而来。（7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是_。动物细胞培养选择特异性强,灵敏度高灭活的病毒在体外大量增殖分泌特异性抗体骨髓造血干细胞主动运输36 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 -（ ） A细胞系 B细胞株 C原代细胞 D传代细胞2、动物细胞工程技术的基础是 -（） A.动物细胞融合 B.单克隆抗体 C.胚胎移植 D.动物细胞培养AD373、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 （ ） A.容易产生各种变异 B具有更

15、强的全能性 C.取材十分方便 D分裂增殖的能力强D38 4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-（ ） A.培养基不同； B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。A391、动物细胞融合的目的中最重要的是 （ ） A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞2、 动物细胞融合过程中所用的诱导剂灭活的病毒，抗原性和感染力的有无是 （ ） A.失去抗原性，具有感染力 B.具有抗原性，也具有感染力 C.失去抗原性，也失去感染力 D.具有抗原性，失去感染力B课堂练习D

16、 403、单克隆抗体是指（ ） A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B.单个B淋巴细胞增殖产生的抗体 C.单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体 D.单个抗体通过克隆化，产生大量抗体4、生产单克隆抗体时，在培养液中加入某种试剂能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂（ ） A.能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制 B.能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 C.选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制 D.能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成CC415、“生物导弹”是指 （ ） A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物 D6、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 （ ） A.经过免疫的T淋巴细胞 B.未经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的B淋巴细胞 D.未经过免疫的B淋巴细胞 C427下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：（1）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得_细胞，该细胞能够产生_。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。（2）B过程是一个_过程，该过程的进行需要灭