生物化学检验试验教案

1、单位教研室姓名课程名称时 间哪随瞽粤悦教案:哪阳医学院药检学院检验系临床生物化学与:分子生物学检验教研室:丁妍临床生物化学与检验*2009.02.10实验名称可见光光谱分析基本技术（双缩月尿法测定总蛋白）教材 选用临床生物化学及生物化学检验实验指导钱士均主编，人民卫生出版社，第3版授课章节第一章实验、第七章实验授课对象2005级检验学时3时间120分钟授课地点药检学院第三实验室教材临床生物化学及生物化学检验实验 指导第三版实验目的 与要求1掌握可见光光谱分析基本技术、原理、操作方法。2双缩月尿法测血清总蛋白的原理、操作方法及临床意义。实验器材与试 剂微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂

2、、蜡笔、力口样器、纱布、 半自动生化分析仪（GF-D600型）实验标本已采集的肝素钠抗凝的全血标本实验主 内容 及步骤介绍本章介绍应用吸收光谱原理进行分析，可见光光谱分析基本技术、 双缩月尿法测血清总蛋白的原理、操作方法及临床意义。简单介绍其它方法1）凯氏定氮法：根据蛋白质平均含氮量16#算，是 公认的参考方法，但该方法操作复杂，不适常规测定.2）酚试剂法呈色灵敏 度达双缩月尿法100倍左右，有利检出较微量的蛋白质，本法适合测定纯单一 蛋白质，易受还原性化合物的干扰如糖，酚等.3）紫外分光光度法：尿酸和胆 红素在280nm付近有干扰,不适合血清等复杂的蛋白质测定,适合较纯酶,免 疫球蛋白等测定

3、.4）染料结合法优点灵敏快速简单，缺点是不同蛋白质与染 料结合不一致，试剂对比色杯有吸附作用.5）比浊法如磺基水杨酸法：该法 优点是操作简单灵敏度高，缺点是影响因素多，一般用于测定尿液及脑脊液 等蛋白质浓度较低的样品.1）双缩月尿法测血清总蛋白的原理：凡分子中含有两个氨基甲酰基（-CONH-） 的化合物，在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的化合物的方法称为 双缩月尿法.而蛋白质中的肽键（-CONH-）也能在碱性溶液中与铜离子作用 形成紫红（蓝）色的复合物，显色强度与样品中蛋白浓度呈正比，故称 为双缩月尿法。此法简便，灵敏度不高，但对血浆中总蛋白质浓度测定较适 用.分析类型为终点法。2）试剂R1

4、:双缩胭试剂（双试剂内含洒石酸甲钠作用为溶解 CUSO祺中1为N aOH,2为硫酸铜）R2:校准物53.6 g/L R3:蒸储水3）操作方法:加入物B（空白管）S（校准物）T（则定管）R1双缩月尿R2校准物R3蒸储水 待测物1000N l20仙l1000 n20口1000/20小混匀后，置37度水浴10分钟，比色杯光径1.0cm.用540nm波长进行比 色，以空白管调零，读取各管吸光度数.4）计算T （总蛋白产T总 A/S校 A*S校（g/L）参考范围 成人66-88 g/L5）临床意义:血浆中总蛋白质浓度 增高见：血清中水分减少使总蛋白质浓度相对增高（如呕吐，腹泻，高热及慢性炎症疾病等）o血

5、清蛋白质合成增加（多见骨髓 瘤病人,主要是球蛋白增加）。血浆中总蛋白质浓度 降低见于：水盐滞留血液稀释。摄入不足。消耗 性疾患（严重结核，月中瘤）。合成障碍（肝功能受损）。丢失增高（如严重 烧伤，失血，肾病综合症等）。操作方法及注意事项6）注意事项：双缩月尿法测总蛋白只能用于血清（血浆）。该方法并非为 蛋白质所特有。 血清胆红素在540nm波长有最大吸收峰，故黄胆标本应 作血清空白对照来校正再进行比色。 高脂血清加入双缩月尿试剂如出现混 浊可用用乙醴抽提一次后再进行比色。静脉滴注大量右旋糖酊的病人血清（浆）使结果明显增高。7）示范操作及小结思考题1光谱分析技术基本原理及注意事项.总蛋白测定的方

6、法学评价实验名称白蛋白、血和脑脊液葡萄糖的测定教材 选用临床生物化学及生物化学检验实验指导钱士均主编，人民卫生出 版社，第3版授课章节第七章糖及其代谢物的测定授课对象2005级检验学时3时间120分钟授课地点药检学院第三实验室教材临床生物化学及生物化学检 验实验指导第三版实验目的 与要求掌握血糖、脑脊液糖测定的原理、操作方法、及方法学评价。 了对糖尿病诊断的临床意义实验器材与试 剂微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂、蜡笔、力口样器、 纱布、半自动生化分析仪（GF-D600型）实验标本已采集的肝素钠抗凝的全血标本实验主要 内容 及步骤概述大课中白蛋白测定及糖测定的一些基本情况及实验室常

7、规检 查。一澳甲酚绿测定血清白蛋白的原理、操作方法及临床意义（只讲解不操作）。二糖测定的原理：葡萄糖+O2+H2O在葡萄糖氧化酶的作IT下生成葡 萄糖酸 +4H2O , H2O2+4-Aminophenaxone+Phenol 在过氧化物酶作 IT下生成酶亚胺+4H2O。颜色的变化与葡萄糖的浓度成比例，在 505 nm外测其吸光度的增加与样本中葡萄糖的浓度成正比。三试验中所需试剂试剂R1 :葡锢糖混合单试剂。试剂 R2: 5.55mmol/L标准液（100小 mol/L）四操作步骤实验实际操作讲解加入物卜lBSTR1试剂100010001000校准物10H2O10待测物10仪器波长546nm，

8、比色杯1.0cm。反应温度37.0摄氏度10分钟， 得到标准管 A/min和测定管 A/min ,计算待测物=测定管 A/min/ 标准管 A/min*5.55mmol/L五实验中注意事项样本中浓度超过线性，用生理盐水稀释样本。本试剂盒中含有叠氮钠，勿吞食及接触皮肤和黏膜。标本采集应尽量在2小时内测定。六实验临床意义与小结正常范围在4.26.4mmol/l,血糖结果7.1可确诊为糖尿病。七示范操作。实验名称血清（浆）脂类及脂蛋白测定教材 选用临床生物化学及生物化学检验实验指导钱士均主编，人民卫生出版社， 第3版授课章节第八章 血清（浆）脂类及脂蛋白测定授课对象2005级检验学时3时间120分钟

9、授课地点药检学院第三实验室教材临床生物化学及生物化学检验实验 指导第三版实验目的 与要求掌握血脂测定的原理、注意事项及临床意义。实验器材与试 剂微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂、蜡笔、力口样器、纱布、半 自动生化分析仪（GF-D600型）实验标本已采集的肝素钠抗凝的全血标本实验主 内容 及步骤一 概述，回顾理论课第五章血脂代谢及实验室常规检查项目方法。二检测TG酶法（GPO-PAP法）三原理血清中的甘油三酯（TG）在脂蛋白脂肪酶的作用下水解成甘油与脂肪酸，用甘油激酶（GK）及三磷酸腺甘（ATP）将甘油磷酸化，生成 3-磷酸甘油（G-3-P）,在磷酸甘油 氧化酶（GPO）的作用下 G

10、-3-P被氧化，产生磷酸二羟丙酮和过氧化氢（ H2O2）。在 色原性氧受体（如联大茴香胺，4-氨基安替比林偶联酚）的存在下，过氧化物酶（POD） 催化过氧化氢，氧化色素原，生成有色化合物。反应式如下TG + 3H2O甘油 + 3-RCOOHGK Mg甘油 + ATPG-3-P+ADPGK MgG-3-P + O2磷酸二羟丙酮+ H2O22H2O2 + 4-氨基安替比林十酚POD 醍亚胺+ 4H2O四试剂五操作主要参数见下表加入物测定管标准管空白管血清（1 l）20标准液（“）20蒸储水（”）20混合试剂（”）200020002000混匀，37 C,孵育5min,波长500nm，比色杯光径1.0

11、cm,以空白管调零，分别读取 标准管及测定管吸光度。六计算测定管A血清TG （ mmol/L ）=标准管A x TG标准液浓度 七参考值正常人TG水平受生活条件影响，我国人低于欧美人， 成年以后随年龄上升。TG水平的个体内与个体间差异都比TC大，人群调查的数据比较分散，呈明显偏正态分布。营养良好的中青年平均值以去除FG计约0.901.10mmol/L ,老年前期与老年人平均超过1.13mmol/L , 95百分位数在中青年约为1.69mmol/L ,老年约为 2.26mmol/L。美国国家胆固醇教育计划对空腹TG水平划分界限的修订意见（1993）是：TG 正常:v 2.23 mmol/L（20

12、0mg/dl）增高的边缘：2.34.5mmol/L高 TG 血症： 4.5mmol/L 胰腺炎高危： 11.3mmol/L 八临床意义高TG血症也有原发与继发两类，前者多有遗传因素，其中包括家族性高 TG血症与 家族性混合型高脂（蛋白）血症等。继发的见于糖尿病、糖原累积病、甲状腺机能不 足、肾病综合症、妊娠、口服避孕药、酗酒等，但不易分辨原发或继发。高血压病、 脑血管病、冠心病、糖尿病、肥胖与高脂蛋白血症等往往有家族聚集现象，其间可能 有因果关系，但也可能仅仅是伴发现象；例如糖尿病患者胰岛素与糖代谢异常可继发 TG （或同时有TG）升高，但也可能同时有糖尿病与高TG两种遗传因素。冠心病患者TG

13、偏高的比一般人群中多见，但这种患者LDL-C偏高的比一般人群中多见，但这种患者LDL-C偏高与HDL-C偏低也多见。一般认为单独有高TG不是冠心病的独立危险因素，只有伴有高TC、高LDL-C、低HDL-C等情况时才有病理意义。操作方法及注意事 项酶法（CHOD-PAP）测定血清中的胆固醇 一）原理血清中的胆固醇酯（CE）被胆固醇酯水解酶水解成游离的胆固醇（CHOL）,后者被胆固醇氧化酶（CHOD ）氧化成A 4-胆管烯酮并产生过氧化氢。在色原性氧受体（如联大茴香胺，4-氨基安替比林偶联酚）的存在下，过氧化物酶催化过氧化氢，氧化色 素原，生成有色化合物。反应式如下CEH胆固醇酯+ 2H2O胆固醇

14、+游离脂肪酸胆固醇+ O2 CHODA 4-胆管烯酮+ 2H2O22H2O2 + 4-氨基安替比林十酚 二）试剂POD醍亚胺+ 4H2O三）操作主要参数见下表加入物测定管标准管空白管血清(1 l)20标准液（“）20蒸储水（”）20混合试剂（”）200020002000混匀，37C,孵育5min,用分光光度计，波长500nm比色杯光径1.0cm,以空白管调零，分别读取标准管及测定管吸光度。四）计算测定管A血清总胆固醇mmol/L=标准管Ax胆固醇标准液浓度五）参考值40岁以上人群TC参考范围大致可定为：正常v 5.17 mmol/L（200mg/dl）轻度增高（或边缘水平）5.176.47mm

15、ol/L高胆固醇血症6.47mmol/L严重高胆固醇血症7.76mmol/L六）临床意义1、影响TC水平的因素有：年龄与性别，往往随年龄上升，但到70岁或80岁后有所下降，中青年女性低于男性，50岁后女性高于男性；长期高胆固醇、高饱和脂肪和高热量饮食使 TC升高；遗传因素；其他，如缺少运动、脑力劳动、精神紧张 等可能使TC升高。2、TC血症是冠心病的主要危险因素之一。病理状态下高TC血症有原发和继发的两类。原发的如家族性高 TC血症（低密度脂蛋白受体缺陷）、家族性ApoB缺陷症、多 源性高TC、混合性高脂蛋白血症。 继发的见于肾病综合征、甲状腺机能减退、糖尿病、妊娠等。3、低TC血症也有原发和

16、继发的两类，前者如家族性的无3或低3脂蛋白血症；后者如甲亢、营养不良、慢性消耗性疾病等。 低TC容易发生脑出血，也可能易患癌症（未 证实）4、肝脏是胆固醇及胆固醇卵磷脂酰基转移酶（ LCAT）合成的器官，严重的肝病患者 血清TC不一定很低，（1由于血清LCAT活力低下，血清胆固醇酯占TC的比例可低达50%以下。实验名称血清（血浆）丙氨酸匆基转移酶的测定教材 选用临床生物化学及生物化学检验实验指导钱士均主编，人民卫生出版社，第3版授课章节第十三章常用酶类测定授课对象2005级检验学时3时间120分钟授课地点药检学院第三实验室教材临床生物化学及生物化学检验实验 指导第三版实验目的 与要求掌握酶法测

17、定血浆ALT的原理、注意事项及临床意义。实验器材与试 剂微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂、蜡笔、力口样器、纱布、 半自动生化分析仪（GF-D600型）已采集的肝素钠抗凝的全血标本实验标本实验主要内容 一概述，回顾大课中第九章肝脏的一些基本情况及实验室常规检查项目方 及步骤法。二 检测原理：在ALT连续临测法测定中酶偶联反应式为：L-丙氨酸+ a-酮戊二酸 LT丙酮酸+L-谷氨酸丙氨酸 +NADH + H+LDH L-孚L酸+NAD+上述偶联反应中，NADH勺氧化速率与标本中酶活性呈正比，在此 340nM波长 处，NADHg现特征性吸收峰，而 NADM没有。因此，可在340nM监测吸

18、光度 的下降速率（A A/min）,计算出ALT的活力单位。试剂：LABCft化试剂按5: 1配成应用液，试剂成分：试齐IITris缓冲液100mmol/LL-丙氨酸500mmol/LNADH0.18mmol/LpH7.3试剂IIa -酮戊二酸15mmol/L三实验实际操作讲解 仪器波长340nm,比色杯1.0cm,反应温度37.0 C ,按 卜表操作：加入物待测标本（）200试剂（口）2000在37.0 C水浴，每隔1min读一次吸光度，共读三次，计算平均A A/min。计 算待测标本血浆：U/L=1746* A A/min。参考值 0-45U/L四实验中注意事项1、必须严格控制反应时间2、

19、控制反应温度3、血清中存在的a-酮酸（如丙酮酸）能消耗NADH血清中谷氨酸脱氢酶（GLDH 增高时，在有氨存在的条件下，亦能消耗 NADH上述副反应都能消耗NADH 使340 nm处吸光度下降值（A A/min）增加，使测定结果偏高。因此，在单 试剂法中必须要有足量的LDH才能保证a-酮酸（尤当遇到丙酮酸含量升高 的标本）引起的副反应在规定的延滞期内进行完毕。标本中ALT活性太高，测定应稀释5-10倍。五实验临床意义：1、肝胆疾病：传染性肝炎、肝癌、肝硬变活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆 管炎和胆囊炎等水平升高（ALT水平升高）。2、心血管疾病：心肌梗塞、心肌炎、心力衰竭时的肝脏瘀血、脑出血等。

20、ALT 水平升高。3、骨骼疾病、多发性肌炎、肌营养不良等。ALT水平升高。4、某些药物和毒物可引起 ALT活性升高.如：氯丙嗪、异菸肥、奎宁、水杨酸 制剂及酒精、铅、汞。ALT水平升高。实验名称血清（血浆）总胆红素的测定教材 选用临床生物化学及生物化学检验实验指导钱士均主编，人民卫生出版社，第3版授课章节第十三章非蛋白含氮化合物及总胆汁酸测定授课对象2005级检验学时3时间120分钟授课地点药检学院第三实验室教材临床生物化学及生物化学检验 实验指导第三版实验目的 与要求掌握酶法测定血浆ALT的原理、注意事项及临床意义。实验器材与试 剂微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂、蜡笔、力口样器

21、、纱布、 半自动生化分析仪（GF-D600型）实验标本已采集的肝素钠抗凝的全血标本实验主要内容 及步骤一总胆红素（TBI ）重氮法测定一）原理：总胆红素（TBI）在二甲亚碉等加速剂作用下，在酸性溶液中与重氮苯磺酸 作用生成紫色的偶氮胆红素，与经过同样外理的校准液比校，即可计算出样品中总红素 的含量。二）试剂：（R1:R2按50: 1）R1 : HCL、对氨基苯磺酸、二甲亚碉R2:亚硝酸钠（72mmol/L ）三）操作（终点法）加入物（“）测定管标准管空白管血清（浆）50标准液50蒸储水50混合试剂800800800混匀，37 C,孵育5min,用分光光度计，波长 560nm、比色杯光径1.0c

22、m,以工作液 调零，测定各管吸光度值。测定管A四）计算：血清胆红素 mmol/L=标准管Ax胆红素校准液浓度五）参考范围：5.119 pmol/L二直接胆红素（DBi ）重氮法测定原理：直接胆红素在酸性溶液中与重氮苯磺酸作用生成紫色的偶氮胆红素，与经过同样外理的校准液比校，即可计算出样品中直接红素的含量。试齐J: R1:同上TBI , R2:亚硝酸钠（25mmol/L ）操作加入物（“）测定管标准管空白管血清（浆）50标准液50蒸储水50混合试剂800800800混匀，37 C,孵育2min,用分光光度计，波长560nm、比色杯光径1.0cm,以工作液调零， 测定各管吸光度值。测定管A四）计算

23、：血清直接胆红素mmol/L=标准目Ax直接胆红素标准液浓度五）参考范围：1.76.8 mol/L六）临床意义：1是后尢黄疸及黄疸程度的鉴别，2是肝细胞损害程度和预后的判断如胆汁淤积型，肝细胞受累轻，血清胆红素却可升高。3直接胆红素与总胆红素的比值可用于鉴别黄疸的类别。比值 60 %为阻塞性黄疸，后两类之间有重叠。4再障及其它继发贫血，血清总胆红素减少。七）注意事项：本度剂盒不适于肝素抗凝血浆。严重溶血时可使测定结果低，脂血有干扰。直接胆红素至今无候选参考方法。直接分光光度法主要用于3个月龄前的新生儿血清总胆红素测定，微量而快速。胆红素对光敏感，标本液及标本均应尽避光保存。 叠氮钠能破坏重氮试

24、剂，终止偶氮反应。总胆与直胆测定利用它们反应时间的不同。八）示范操作讲解：实验名称血清（血浆）钙离子的测定教材 选用临床生物化学及生物化学检验实验指导钱士均主编，人民卫生出版社，第3版授课章节第九章血清无机离子及微量兀素测定授课对象2005级检验学时3时间120分钟授课地点药检学院第三实验室教材临床生物化学及生物化学检验实验 指导第三版实验目的 与要求掌握钙离子的测定的原理、 操作方法、注意事项及临床意义实验器材与试 剂微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂、蜡笔、力口样器、纱布、 半自动生化分析仪（GF-D600型）已采集的肝素钠抗凝的全血标本实验标本实验主 要内容 一）概述，回顾理论

25、课第八章体液平衡及实验室常规检查项目及步骤二）血清总钙测定（邻-甲酚酬:络酮比色法）原理：在碱性条件下，样品中钙离子与邻-甲酚Mt络合酮生成（紫）红色络合物，颜色的深浅与钙离子的浓度成正比。邻-甲酚血:络合酮是金属络合指示剂， 同时也是酸碱指示剂， 在碱性溶液中与钙及 镁螯合，生成紫红色螯合物。作车测定时，在试剂中加入8-羟基唾咻以消除标本中镁离子的干扰。三）试剂：R1 :乙醇胺缓冲液 R2:邻甲酚酬:络合酮显色剂、8-羟基唾咻，钙标准液 工作液R1+R2 四）操作：加入物（“）测定管标准管空白管混合试剂100010001000标准液20蒸储水20血清（浆）20混匀，保温5min后，分光光度计

26、波长 600nm , 1.0cm光径比色杯用空白管调零，读取 各管吸光度。（试剂空白0.3五）计算测定管A血清钙mmol/L=标准管A x 2.5六）参考值 成人：2.03 2.54mmol/L （8.11 10.15mg/dl） 儿童：2.25 2.67mmol/L （8.98 10.78mg/dl）七）注意事项：样品中钙超过3.75mmol/L要稀释。测定前仪器管道及比色杯等必 须用清洗液清洗以免钙的污染。如标本混浊、黄疸或溶血，需做校正试验，于空白管中各加入（蒸储水 1ml+50（ “），再测吸光度，两次读取的吸光度差，即为校正吸光 度。用血清或肝素抗凝血浆标本，不能用钙螯合剂（ EDT

27、A-Na2 ）及草酸盐作抗凝剂 的标本。邻-甲酚络合酮试剂灵敏度很高，所用的试剂和器皿如有微量的钙污染亦会引起测定误差，故此测定最好用一次性使用的塑料管，所有试剂应在聚乙烯瓶内保存。如果条件 不允许而用玻璃试管和器皿时，一定要经稀盐酸泡洗，再用去离子水冲净后方可使用。原子吸收光谱法（AAS ）为钙血浆测定的参考方法。用来作血清总钙测定的碱性缓冲液较多，可根据条件选用。常用的有乙二胺-氧化钾、乙二胺-醋酸钾-盐酸、乙二胺-乙二醇、乙醇胺硼酸、2-氨基-2-甲基-1-丙醇等。用乙二月安-乙二醇缓冲液测定较稳定。乙醇胺硼酸缓冲液缓冲容量较大，并能使空白试剂的吸光度保持较低读数。2-氨基-2-甲基-1

28、-丙醇无毒，无刺激性，也能使空白管有较低的读 数。若试剂吸光度较高时，则标准曲线不通过零点，产生负截距。遇此情况，可在试剂中加入适量的 EDTA-Na2 （注意：试剂 应呈淡紫色，不可无色）或用 1.25、2.5mmol/L 标准液作二点定标.。临床意义：钙升高见于：甲亢、代谢性酸中毒、肿瘤、维生素 D过多症等。钙离子降低见于：甲减、慢性肾衰、云肾移植或进行血液透析患者、维生素D缺乏症、呼吸性或代谢性碱中毒、烧伤或手术、脓毒血症、新生儿低钙血症等。实验名称血清（血浆）尿素的测定教材 选用临床生物化学及生物化学检验实验指导 钱土土匀主编，人民卫生出版社，第3 版授课章节第十二章非蛋白含氮化合物及

29、总胆汁酸测定授课对象2005级检验学时3时间120分钟授课地点药检学院第三实验室教材临床生物化学及生物化学检验 实验指导第三版实验目的 与要求掌握尿素的测7E的原理、操作方法、注息事项及临床息义实验器材与 试齐微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂、蜡笔、加样器、纱布、半自动生化分析仪（GF-D600型）实验标本已采集的肝素钠抗凝的全血标本实验主要内 容及步骤酶法测定血清尿素氮测定：尿素是蛋白质分解代谢的含氮终产物，区别肾前和肾后氮血症可同时检测尿素和肌酊。一尿素浓度测定（尿素bi法）原理：尿素在月尿酶的催化作m下生成两个分子的 氨离子，在a-酮戊二酸和NADH （还原型辅酶1）经过合氨

30、酸脱氢酶的作用卜 生成L 谷氨酸和氧化型辅酶I （NAD+）,引起吸光度的下降，在固定的时间内 吸光度卜降的比例与标本中尿素的浓度成正比。二试剂：1试剂1 （R1）成份：缓冲液PH7.8、a-酮戊二酸、ADP、月尿酶、 谷氨酸脱氢酶（GLDH ）试齐1J 2 （R2）成份：NADH0.25mmol/L标准品：尿素8.33mmol/L三操作方法：仪器波长510nm,比色杯1.0cm.反应温度37.0摄氏度将试剂R1 与试剂R2按4比1混合。操作同肌样，样本与试剂 1: 101,如上表。方 法为两点法。四实验临床意义：区别肾前性和肾后性氮血症及肾实质性疾病，常与肌酊同时 测定。五注息事项a）试剂中

31、含叠氮钠为防腐剂，不可入口！避免接触皮肤及粘膜，尿标本应用蒸储水作1+100稀释结果b）俊离子会影响检测结果，勿用肝素胺抗凝。c）尿素测定的敏感性高于肌酊的测定、但受干拢因素多，肌酊的特异 性高于尿素、受影响小。六 思考题：血清尿素氮测定的临床意义及尿素氮代谢的途经。实验名称血清（血浆）肌酊的测定教材 选用临床生物化学及生物化学检验实验指导钱士均主编，人民卫生出版 社，第3版授课章节第十二章非蛋白含氮化合物及总胆汁酸测定授课对象2005级检验学时3时间120分钟授课地点药检学院第三实验室教材临床生物化学及生物化学检 验实验指导第三版实验目的 与要求掌握肌酊的测定的原理、操作方法、注意事项及临床

32、意义实验器材与试 剂微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂、蜡笔、力口样器、纱布、半自动生化分析仪（GF-D600型）实验标本已采集的肝素钠抗凝的全血标本实验主要内容 及步骤概述：回顾大课中第十章肾脏的一些基本情况及实验室常规检查项目方法 一碱性苦味酸速率法测定：肌酊是通过肾脏由肾小球滤过作用排泄的废 物。健康人血浆中肌酊的浓度相当稳定，与每天水的摄取量、活动和生成 尿量无关。因此血浆肌酊水平升高常才旨示排泄量的降低，即肾功能受损。 二实验实际操作讲解（速率两点法），仪器波长490-510nm比色杯1.0cm. 反应温度37.0摄氏度，按卜表操作，得到校准物 A=标准4A2-标准 A1

33、,待测标本4 A=标准 A2-标准4A1 ,计算待测标本血浆肌酊=测定管 A/min/标准管/ A/min*100加入物S （校准物）T （待测标本）R1试剂苦味酸：1000(1200)小1000(1200) l 1孵育5分钟R2试剂氢氧化钠250(300)/250(300)/S （校准物）100 (BUN10)仙 l100 (BUN10)仙 lT （待测标本）1100 口100仙 l延迟30秒记录吸光度A1A1A160秒时记录吸光度AA2A2计算男值 5 3 106 仙 mol/L女性参考值 44-97 m mol/L三 实验临床意义：反映GFR的后期指标（肾功不全）是诊断尿毒症期非 常重要

34、的指标。Scr:13317 mol/L （代偿期）Scr:178442卜mol/L （失代偿期）Scr:443707卜mol/L （肾衰竭期）Scr: 707 m mol/L （尿毒症期四实验中注思兼项.必须严格控制反应时间，以避免快速或慢速反应假肌酊物质的干扰.溶血产生的红细胞内非特异性物质将干扰反应.胆红素可引起负偏差等等.试剂2中苦味酸，吸入、接触皮肤、吞咽将会中毒。.本试验的呈色反应物异性不图。丙酮干扰此反应，应避免丙酮污染。.尿中肌酊测定应稀释2050倍。.此法特异性差（不能根本消除），但此法即能去蛋白手工操作，也能上 仪器进行自动操作（速率法）临床应用广，肌酊酶法虽好但酶不易取得临

35、 床应用少。五示范操作。六思考题：1血清尿素氮、肌酊和尿酸测定的临床意义。2尿素氮与肌酊代谢的途经。实验名称LDH （乳酸脱氢酶）的测定教材 选用临床生物化学及生物化学检验实验指导钱土土匀主编，人民卫生出版社，第3版授课章节第十三章常用酶类的测定授课对象2005级检验学时3时间120分钟授课地点药检学院第三实验室教材临床生物化学及生物化学检验 实验指导第三版实验目的 与要求掌握LDH （乳酸脱氢酶）的测定的原理、 操作方法、注意事项及临 床意义实验器材与试 剂微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂、蜡笔、力口样器、纱布、半自动生化分析仪（GF-D600型）实验标本已采集的肝素钠抗凝的全血

36、标本实验主 要内容 一）概述，回顾大课中第十一章心脏疾病的生物学标志物及实验室常及步骤规检查项目方法。二）检测原理：连续监测法（LDH-L法）L-孚 I酸+NAD+ -LDH 丙酮酸 +NADH+H+在反应过程中，孚L酸氧化成丙酮酸，同时 NAD+还原成NADH ,引起340nm吸光 度的增高，吸光度的增高速率与样本中LDH活性呈正比关系。三）试剂： R1 : NAD（酵母,MW663.4）6.5 mmol/L R2： Tris-HCl 缓冲液 100mmol/L , L-乳酸锂（MW96.01） 52mmol/L , KCL100 mmol/L 。四）操作：取一定量 R2 （参看R1瓶签）加

37、入1瓶R1中，轻轻摇动，并倒置几次，完 全溶解后，即为工作液，工作液预先保温至测试温度。空 白管样 品管工1.1.作液00ml00ml-M- 外 八、0.储水02ml-样0.品-02ml混合均匀，在反应温度保温 30秒钟，读取初始吸光度，同时开始记时，在精确 1, 2, 3分钟时，分别读取吸光度，确定每分钟平均吸光度变化（A/分）。五）计 算：LDH-L（U/L） = （ AA样品/分一 A空白/分）XFVtF = X 1000 = 8095 （Vt=反应总体积 Vs =样品体积）Vs X消光系数【参考值】109-245U/L （37C）六）临床意义：LDH广泛存在于各种组织中，而以肝、心肌、肾脏、骨骼 肌、胰腺和肺最多。血增高见于心肌梗死、心肌炎、肝病、恶性月中瘤、肾病、 肺梗死、贫血、白血病、妊娠等。目前临床测定 LD活性常用于心肌梗死、 肝病和恶性月中瘤的辅助诊断。LDH活性降低目前没有发现重要的临床意义。七）注意事项：. LDH是临床上应用较多的一种脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个重要的酶， 属于氧化还原酶类，催化乳酸氧化成丙酮酸，NAD为氢的受体.正向反应（乳酸 一丙酮酸）最适pH8.8s9.8;逆向反应（丙酮酸一乳酸）最适pH7.47.8.最适pH 随着酶的来源、反应温度以及底物和缓