多酚稳定性检测

1、:间财驱当 :脚衡者 敌工醐：砖耕 燮敌工廓市：燮玛部蛔 :脚间案器报风我洱嵬谜偃多阐番碧爪睡部番弱爪：目碰本勰本硬亦甫1山楂果皮和山楂果肉多酚热稳定性的研究（生物工程）摘要多酚的抗氧化功能对许多慢性病起到预防作用，本实验利用75 %甲醇， 25%丙酮提取山楂果肉和山楂果皮里多酚，利用福林肖卡比色法测定总酚的含 量，考察提取液中的多酚在30C、45*C、60C、75C的热稳定性。结果表明： 温度的变化对山楂果皮和山楂果肉中多酚热稳定性影响很大，其中用75%的甲 醇作为山楂果肉中多酚的提取剂，提取出来的多酚在75C下的含量最高，含量 为3.278mg/l，低于此温度，多酚含量随温度的变化很大，且

2、提取出来的多酚热 稳定性最差；用25%丙酮作为山楂果皮中多酚的提取剂，提取出的多酚在30 下的含量最低，多酚含量为9. 279mg/l，低于或高于此温度，多酚的含量都会升 高，且提取出来的多酚热稳定性最好。关键词：山楂，多酚，热稳定性THE RESEARCH OF HAWTHORN PELL ANDHAWTHORN PULP POLYPHENOLS THERMAI STABILITYChang Linjie(Bioengineering,Class081)AbstractPolyphenols antioxidant function could protect many chronic di

3、seases, this experiment of Polyphenols extract in Hawthorn peel and hawthorn pulp by using 75% methanol and25%acetone , it used Flint shaw card colorimetric method to determine the content of total phenol, Examineing the thermal stability of polyphenols extract in 30 C, 45 C,60C and 75C. The results

4、 showed that: The impaction ofpolyphenols thermal stability was relevant to the change of the temperature of hawthorn peel and hawthorn pulp, With 75% methanol as the extraction agent of polyphenols in hawthorn pulp, the highest concentrations of polyphenols extracted at 75 C, the content of 3.278mg

5、/l, below this temperature, the polyphenol contented variation with temperaturepolyphenol thermal stability, and extracted from the worst; with 25% acetone as the extraction of polyphenols in hawthorn peel agent extracted polyphenol contented at 30 C, the lowest polyphenol content of 9.279mg / l, lo

6、wat or above this temperature, the polyphenol content were increased, and the extracted polyphenols thermal stability of the best.:hawthorn, polyphenols, thermal stability TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark17 o Current Document 引言11材料与方法21.1材料2 HYPERLINK l bookmark11 o Current Document 1.2药品与试剂2 HYP

7、ERLINK l bookmark14 o Current Document 1.3仪器设备21.4实验方法21.4.1山楂果肉和山楂果皮酚类物质的提取2 HYPERLINK l bookmark24 o Current Document 1.4.2总酚含量的测定方法3 HYPERLINK l bookmark27 o Current Document 1.4.2.1标准曲线的绘制3 HYPERLINK l bookmark30 o Current Document 1.4.2.2山楂果皮和果肉提取液中总酚含量的测定3 HYPERLINK l bookmark33 o Current Docu

8、ment 1.5山楂果皮和果肉多酚热稳定性实验3 HYPERLINK l bookmark36 o Current Document 1.6数据处理42结果与分析42.1标准曲线的绘制4 HYPERLINK l bookmark43 o Current Document 2.2山楂果皮和果肉提取的总酚52.3山楂果皮和果肉多酚热稳定性实验62.4利用方差分析结果6 HYPERLINK l bookmark46 o Current Document 3结果9 HYPERLINK l bookmark49 o Current Document 参考文献9 HYPERLINK l bookmark5

9、7 o Current Document 致谢10引言山楂是蔷薇科植物山里红(Crataegus p innatifidaBge. var. major N. E. Br.)或山楂C. p innatifida Bge.的成熟干燥果实，为传统中药材，能开胃消食、 化滞消积、活血化淤、收敛止痢。山楂又是水果,生熟食用均可。近年临床常以 生山楂治疗高血脂、高血压、冠心病等,民间还用以食疗养生、保健益寿【1】。山 楂果实中含有多种化学成分，其中黄酮是山楂中的一大类化合物，是治疗心血管 疾病和抗肿瘤的活性成分，能够降血压，降低胆固醇和血脂在血管壁上的沉积，增 加皮下毛细血管的通透性，对心脑血管系统疾病

10、有明显的疗效。山楂果总黄酮对 正常细胞的生长无明显影响，但对肿瘤细胞的生长却有显著抑制作用。作为盛产 山楂的国家，我国山楂来源尤为充足,成本低，因而充分利用山楂这一可再生的资 源去开发生产新药,其前景广阔。山楂的主要成分是黄酮类物质，对心血管系统 有明显的药理作用。目前，从山楂中分离的黄酮成分有30余种，主要有含碳键 的黄酮苷类、黄酮醇及其苷类、双氧黄酮苷类、聚合黄酮类。另一类较为重要的 成分是三萜类物质，有强心、增加冠脉血流、改善血流循环等重要作用。此外， 山楂中含有机酸如氯原酸、咖啡酸及鞣质、鞣酐、表儿茶酚、胆碱、乙酰胆碱、 0谷甾醇、胡萝卜素及大量Vit C等。药用价值：山楂有重要的药用

11、价值，自古 以来，就成为健脾开胃、消食化滞、活血化痰的良药。山楂以果实作药用， 性微温，味酸甘，入脾、胃、肝经，有消食健胃、活血化淤、收敛止痢之功能。 对肉积痰饮、痞满吞酸、泻痢肠风、腰痛疝气、产后儿枕痛、恶露不尽、小儿乳 食停滞等，均有疗效。中国古代医学家早已重视山楂的软坚消积作用。煮老鸡硬 肉时，加几颗山楂即易烂，说明它有消积肉食的作用。中医成药焦三仙、保 和丸、山楂丸等均以山楂为其主要成分；山楂还有散淤、止血、防暑、提神等作 用。它的药用功能主要有：1、强心、降血脂、降血压：山楂中的总黄酮有扩 张血管和持久降压的作用。临床研究证实，山楂能显著降低血清胆固醇及甘油三 酯，有效防治动脉粥样硬

12、化；山楂还能通过增强心肌收缩力、增加心输出量、扩 张冠状动脉血管、增加冠脉血流量、降低心肌耗氧量等起到强心和预防心绞痛的 作用。2.防癌、抗癌：近年研究发现，山楂中含有一种叫牡荆素的化合物，具 有抗癌的作用。亚硝胺、黄曲霉素均可诱发消化道癌症的发生或加重，而实验研 究表明，山楂提取液不仅能阻断亚硝胺的合成，还可抑制黄曲霉素的致癌作用。 所以，消化道癌症的高危人群应经常食用山楂，对于已经患有癌症的患者，若出 现消化不良时也可用山楂、大米一起煮粥食用，这样既可助消化，又可起到辅助 抗癌的作用。3.治疗痛经、月经不调：中医认为山楂具有活血化淤的作用，是 血淤型痛经患者的食疗佳品。血淤型痛经患者常表现

13、为行经第12天或经前12天发生小腹疼痛，待经血排出流畅时，疼痛逐渐减轻或消失，且经血颜色暗，伴 有血块。患者可取完整带核鲜山楂1000克，洗净后加入适量水，文火熬煮至山楂 烂熟，加入红糖250克，再熬煮10分钟，待其成为稀糊状即可。经前35天开始 服用，每日早晚各食山楂泥30毫升，直至经后3天停止服用，此为1个疗程，连服 3个疗程即可见效。此法也适合月经不调、中医辨证为血淤者。4、开胃消食、消 肉食积滞：很多助消化的药中都采用了山楂，由于山楂含山楂酸等多种有机酸， 味酸甘，并含解脂酶，入胃后，能增强酶的作用，促进肉食消化，有助于胆固醇 转化，所以，对于吃肉或油腻物后感到饱胀的人，吃些山楂、山楂

14、片、山楂水或 山楂丸等，均可消食，为老年人的保键食品，山楂还可利胆汁，促进胃液分泌【4-6】。 影响多酚稳定性的因素有很多，例如光照的强弱、光照时间的长短、提取时所加 入的金属离子的种类的浓度、提取中处理温度的高低等等，利用不同的方法 和技术可以优化山楂多酚提取的工艺技术，推进山楂多酚在医疗和食品等工业方 面的步伐。1材料与方法1.1材料山楂（山里红），市售。1.2药品与试剂福林一肖卡甲醇丙酮其它试剂为分析纯1.3仪器与设备TU-1201紫外可见分光光度计制冰机A1003型电子分析天平摇床101.2AB型电热鼓风干燥箱水浴锅USC一202超声波清洗器1.4实验方法购置于sigma公司天津科密欧

15、化学试剂有限公司天津科密欧化学试剂有限公司北京普析通用仪器有限责任公司 美国WATER公司德国梅特勒公司北京医疗设备总厂BS 200S 天津市泰斯特仪器有限公司 北京医疗设备总厂BS 200S 上海波龙电子设备有限公司1.4.1山楂果肉和山楂果皮酚类物质的提取在低温环境下用刀把山楂肉和山楂皮分开，然后在打碎机上分别打碎，用真 空袋子将山楂果肉和山楂果皮分别包起来，在冰箱等低温下冷冻保存，以备用。 注意冷冻时一定要把袋子封闭好，以免里面结冰影响实验的准确性。准确称取2.0g山楂果皮粉碎物和山楂果肉粉碎物，分别用两支离心管装，共 四支。然后用75%的甲醇和25%的丙酮作为提取剂。山楂果皮：甲醇用5

16、ml，丙 酮用5ml；山楂肉：甲醇用5ml，丙酮用10ml。分别用皮甲、皮丙、肉甲、肉丙标 记。将装好在离心管中的药品在摇床上室温摇床30min,每个样品重复提取3次。1.4.2总酚含量的测定方法总酚含量的测定一般采用福林肖卡比色法，原理是应用酚羟基的还原性、酚 羟基数目与氧化试剂所形成的有色化学物质的量在一定范围内成线性。参考回瑞 华等【7】的方法并有改进。1.4.2.1标准曲线的绘制准确称取2.5 g没食子酸溶于甲醇中，然后定容至100 ml。再取此原液1 ml 稀释至100 ml,即为标准溶液(2.5x10-4 g/ ml )。准确量取0.1 ml、0.2 ml、 0.3 ml、0.5

17、ml、1.0 ml于10 ml容量瓶中，各加6 ml蒸馏水，摇匀，再加0.5 ml 福林消卡试剂充分摇匀，1 min后，加入20% ( w/v ) Na2CO3 1.5 ml摇匀，再用蒸 馏水定容，混合液于75C恒温水浴10 min后，立即冰浴5 min,于760 nm波长下， 1顷比色杯比色，空白用甲醇代替，每个浓度做3个平行试验，取平均值，绘制 标准曲线。1.4.2.2山楂果皮和果肉提取液中总酚含量的测定分别取山楂果皮和山楂果肉的75%甲醇提取液0.5ml和0.1ml,另外再分别取 山楂果皮和山楂果肉的25%丙酮提取液0.5m l和0.4ml,将其分别置于10 ml刻度 管中，加入6 ml

18、蒸馏水，再加0.5 ml福林肖卡试剂，充分混匀，1 min后，加入 20%(w/v)碳酸钠溶液1.5 ml混匀，用蒸馏水定容至10 ml。每组做三个平行。利 用可见分光光度计在760 nm波长下，测吸光值并由标准曲线将吸光值转换成浓 度，绘制曲线。空白分别用75%甲醇和25%丙酮代替样品。1.5山楂果皮和果肉多酚热稳定性实验分别取山楂果皮和山楂果肉的甲醇提取液、山楂果皮和山楂果肉的丙酮提取 液，将提取液分别于30C、45C、60C、75C恒温水浴3h。实验组处理过 程如下：山楂果皮：(75%甲醇)提取液取0.5ml依次加入7.5ml水，0.5ml福林肖卡，1.5ml碳酸钠溶液，然后75C水浴1

19、0min,冰浴5min,在760波长下测吸光 值对照组：取提取剂（75%甲醇）0.5ml依次加入7.5ml水，0.5ml福林肖卡，1.5ml 碳酸钠溶液，然后75C水浴10min，冰浴5min，在760波长下测吸光值山楂果皮：（25%丙酮）提取液取0.5ml依次加入7.5ml水，0.5ml福林肖卡， 1.5ml碳酸钠溶液，然后75C水浴10min,冰浴5min,在760波长下测吸光 值对照组：取提取剂（25%丙酮）0.5ml依次加入7.5ml水，0.5ml福林肖卡，1.5ml 碳酸钠溶液，然后75C水浴10min，冰浴5min，在760波长下测吸光值山楂果肉：（75%甲醇）取提取液0.1ml依

20、次加入7.9ml水，0.5ml福林肖卡， 1.5ml碳酸钠溶液，然后75C水浴10min,冰浴5min,在760波长下测吸光 值对照组：取提取剂（75%甲醇）0.1ml依次加入7.9ml水，0.5ml福林肖卡，1.5ml 碳酸钠溶液，然后75C水浴10min，冰浴5min，在760波长下测吸光值 山楂果肉：（25%）丙酮）取提取液0.4ml依次加入7.6ml水，0.5ml福林肖卡，1.5ml碳酸钠溶液，然后75C水浴10min,冰浴5min,在760波长下测吸光 值对照组：取提取剂（25%丙酮）0.4ml依次加入7.6ml水，0.5ml福林肖卡，1.5ml 碳酸钠溶1.6数据处理利用微软200

21、3版excel将实验组进行热稳定性的方差分析2结果与分析2.1标准曲线的绘制以没食子酸为标准，吸光值为横坐标X,没食子酸浓度为纵坐标Y,线性回 归后得没食子酸浓度Y与吸光值X的关系：由图1可知，决定系数R2=0.9956，说明测得的没食子酸浓度Y与吸光值乂线性 相关性良好，可以用于多酚含量测定的定量。2.2山楂果皮和果肉提取的总酚以样品种类为横坐标，多酚的含量为纵坐标建立坐标系，坐标系显示样品经 过25%丙酮和75%甲醇后处理后提取出来的多酚的含量：口系列1whJ里含酚多图2总酚含量图由图2可知：用75 %的甲醇提取山楂果皮和山楂果肉中的多酚的含量分别 是7.91176mg/l和0.24275

22、mg/l;用25 %的丙酮提取山楂果皮和山楂果肉中的多 酚的含量分别是10.40511mg/l和3.2378mg/l;在山楂果皮中提取出的多酚的含 量比山楂果肉中的多；在山楂果肉中用丙酮作为提取液提取出来的多酚含量是甲 醇作为山楂果肉多酚的提取液提取出来的多酚含量的13倍；在山楂果皮中，用丙酮提取出来的多酚是甲醇提取出来的多酚含量的1.3倍。2.3山楂果皮和果肉多酚热稳定性实验重含酚多图3实验组多酚含量图由图3可以知1、用75%的甲醇作为山楂果皮中多酚的提取剂，提取出来的多 酚在75C下的含量最高，含量为8.573mg/l,低于此温度，多酚含量随温度的升高 而升高；2、用75%的甲醇作为山楂果

23、肉中多酚的提取剂，提取出来的多酚在60C 下多酚的含量最高，多酚含量为3.278 mg/l,低于或者高于此温度，多酚的含量 都会减少；3、用25%丙酮作为山楂果皮中多酚的提取剂，提取出的多酚在30C 下的含量最低，多酚含量为9.279 mg/l,高于或低于此温度，多酚含量均升高; 4、用25%丙酮作为山楂果肉中多酚的提取剂，提取出的多酚在75C下的含量最 高，多酚含量为6.893 mg/l,低于此温度，多酚的含量都会减少。2.4利用方差分析结果表1皮甲方差分析结果SUMMARY组观测数求和平均方差皮甲对照32.37352770.79117590.000779023皮甲（30C）64.40.73

24、333330.000435467皮甲（45C）64.550.75833332.38667E-05皮甲（60C）64.8510.80850.0013163皮甲（75C）64.8730.81216670.000536967方差分析差异源SSdfMSFF0.05F 0.01组间组内0.027333940.013121054 0.006833522 0.000596411.457674582.8167084.313429总计0.0404549926由于FF0.01F0.05,故差异性极显著，说明这四个温度梯度之间存在着极 显著的差异。说明用甲醇作为山楂果皮里面多酚的提取剂热稳定性极不好，由于 温度的变

25、化而使山楂果皮里多酚的含量发生显著的变化，从而能够确定山楂果皮 里多酚的稳定性随时间的变化较大，热稳定性不好。表2皮丙方差分析结果方差分析：单因素方差分析SUMMARY组观测数求和平均方差皮丙对照33.1215341.0405110.00100430C65.1750.86250.01251845C65.3890.8981670.01648560C65.8290.97150.00877675C65.8550.9758330.002227方差分析差异源SSdfMSFF0.05F 0.01组间0.09049940.0226252.4636472.8167084.313429组内0.202035220

26、.009183总计0.29253426由于F检验结果表明，FF0.01F0.05，故差异性极显著，说明这四个温度梯度之间存在着极 显著的差异。说明用甲醇作为山楂果肉里面多酚的提取剂热稳定性极不好，由于 温度的变化而使山楂果肉里多酚的含量发生显著的变化，从而能够确定山楂果肉 里多酚的稳定性随时间的变化较大，热稳定性不好。表4肉丙方差分析结果SUMMARY组观测数求和平均方差肉丙对照30.971170.3237230.02266730C63.0080.5013330.00975445C63.0280.5046670.00805460C63.4010.5668330.00086175C63.6150.60250.022249方差分析差异源SSdfMSFF0.05F0.01组间0.17306240.0432653.8085492.8167084.313429组内0.249922220.01136总计0.42298426由于F0.05 F F0.01，故差异性显著，同时也可判断这种差异不是由取样 误差引起的，而是存在本质差异。表明用丙酮作为山楂肉里面多酚的提取剂热稳 定性不好。3结果通过实验可以知道：1、山楂果皮中，用25%的丙酮作为多酚的提取剂，提 取出来的多酚比用75%的甲醇作为多酚的提取剂提取出来的多酚的热稳定性好； 2、山楂果肉中，用25%的丙酮