实验七：叶绿体色素的提取和纸层析

1、实验七：叶绿体色素的提取和纸层析于路遥121140072实验目的：了解叶绿素的提取和纸层析的方法实验原理：【1】叶绿体色素的提取、分离实验原理：植物叶绿体色素是吸收太阳光能，进行光合作用的重要物质.它一般由 叶绿素a,叶绿素b,胡萝卜素和叶黄素组成，它们与类囊体膜上的蛋白 质相结合，而成为色素蛋白复合体。绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素） 这两类色素都很难溶于水，而易溶于有机溶剂，故可用乙醇，丙酮等有 机溶剂提取。【2】叶绿体色素的提取原理：由于光合色素位于叶绿体中的类囊体上，要把它提取出来必须破坏叶表皮、细胞壁和细胞膜、叶绿体的双层膜，所以要剪碎后加二氧化 硅研

2、磨，以便使色素充分被提取。又因为叶绿体的色素不溶于水，但 可溶于有机溶剂中，所以还要加入乙醇或其它有机溶剂使色素溶解， 来提取各种色素。另外还要加碳酸钙以保护叶绿体中的色素，原因是加碳酸钙以调节液 体的pH，防止叶绿素被破坏。叶绿体中的色素溶解于有机溶剂如乙醇 或丙酮（相似相溶），形成色素液。实验材料：菠菜或青菜叶片.仪器设备：研钵，漏斗，冻存管，剪刀，滴管，滤纸，脱脂棉（或尼龙布 或纱布），毛细管，吸水纸。药品试剂：无水乙醇或丙酮；石英砂；碳酸钙粉；层析液：石油醚10ml+丙酮2ml+苯1ml方法与步骤：叶绿体色素的提取（1）取植物新鲜叶片2 g,洗净，擦干，去掉粗的叶脉，剪碎，放入研钵中；

3、（2）研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，研磨至近乎糊状，加入10-15mL无 水乙醇，再研磨片刻，提取3-5 min，然后用漏斗（内放一层薄的脱脂棉）过 滤，即得色素提取液。叶绿体色素的分离（1）制备滤纸条：剪去一端两角，在距离剪角一端11.5 cm处用铅笔画 线（或简单做个记号）。（2）画滤液细线：用毛细吸管吸收少量滤液，沿铅笔线（记号）处均匀地画 一条直的滤液细线。干燥后，连续重复35次，至滤液细线呈绿色。（3）分离色素：倒入层析冻存管23 ml层析液，适当调节层析液液面，以 放入滤纸条后样品线至少稍稍高出滤液为宜。以将滤纸条尖端朝下略微斜靠 烧杯内壁，轻轻插入层析液，旋紧盖子。实验结果：得

4、到叶绿素提取液及纸层析结果如下:问题解答：问：有什么注意事项？答：【1】取材时要选取新鲜的颜色较深的叶片（以便使滤液中含较多的色素） 【2】研磨时加入石英砂（为了研磨得充分，更有效地破坏细胞结构）（但 由于二氧化硅粉是特别细的白色粉末，再加上控制不好用量，易过 量，使滤液中含有较多的二氧化硅，而导致滤液颜色变浅。滤液中 杂质越多，实验现象越不明显。不要加太多！）【3】加入少许碳酸钙（为了防止在研磨过程中，叶绿素受到破坏。因为 叶绿素分子结构中含有一个镁原子，当细胞破裂时，细胞液内有机 酸中的氢可取代镁原子而成为褐色的去镁叶绿素，碳酸钙可中和有 机酸以防止去镁反应的发生。）【4】研磨要迅速、充分

5、。（因为一是因为提取液容易挥发；二是为了使 叶绿体完全破裂，从而能提取较多的色素；三是叶绿素极不稳定， 能被活细胞中的叶绿素酶水解而破坏。迅速和充分是存在着一定冲 突的两种要求，在实验中，可采用先不加提取液，研磨几分钟后再 加入提取液。）【5】制备滤纸条时，根据边缘扩散原理，物质分子沿边缘扩散速度要大 于里边扩散的速度，因此要将滤纸条的一端剪去两角。（主要是为了 延长边缘长度，这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀，便于观察实 验结果。）【6】画线时，一定要细并且直。（这样可以防止色素带重叠，使色素分 子均匀分布在一条直线上，做到扩散起点一致。重复划2-3次，是为 了增加滤液细线上的色素分子数量，使实验效果更加明显。）【7】分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线没及到层析液。（这