电化学发光原理及优势

1、Lifeneedsanswers电化学发宪原理及优势电化学发光原理电化学发光免疫测定-ECLIAlectrochemiuminescenceimmunoassay是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。它的标记物的发光原理与一般的化学发光(CL)不同，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。-ECL不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于DNA/RNA探针检测。一先继放射免疫(RIA)、酶免疫(EIA)、荧光免疫(FIA)、化由免疫(CLIA)测定以后的新一

2、代标记免疫测定技术。(Roch,ECL是罗氏在免疫检测方面的专利技术。ECL技术配以精心设计的免疫试剂，使得罗氏能够给出精确而敏感的检测结果。ECL反应的过程：-标记Ruthenium的高特异性抗体与被测物结合后后顺磁性微珠结合-利用磁场吸附磁性微珠;用ProCell溶液将结合了急磁性微珠的抗原抗体复合物与未结合的组分分离。的廿测发射并喧县一被测物浓度成线性关系电压启动反应Roche电化学发光底物一ArutheniumcomplexisusedastheECL*label抗体抗原抗原抗体结合免疫复合物的形成第一抗体标记生物素（与微磁珠结合）第二抗体标记Ruthenium（产生光信号）生物素Ru

3、thenium两种抗体皆能与靶抗原特异性结合免疫复合物抗体Source:RocheDiagnosticsResearchandDevelopmentRoche夹心法反应SANDWICHPRINCIPLEFIRSTIMMUNOLOGICALREACTIONTRIPROPYLAMINERUTHENIUMLABELLEDLT*ANTIBODYOANTIGENSECONDREACTIONLIGHTREACTIONSERUMCONSTITUENTSSIGNAL(LIGHT)CONCENTRATIONMAGNETICFORCE&ELECTRICALPOTENTIALTBIOTINYLATEDANTIBOD

4、YCSTREPTAVIDIN-COATEDMICROPARTICLE竞争法反应FIRSTREACTIONSECONDREACTIONLIGHTREACTIONAMTGEM:黑WMELLEDTfilPTOPYIAMINE8 DTIMVLftTED AKTDENSTREPTAVIDIN-COATEDIJCROPARTCLEECL反应过程如下：-反应溶液被转移至测量池。加上磁场的测量池表面吸附磁性微珠。-加入ProCell洗脱溶液中未结合的组分并提供ECL反应所必须的TPA。释放电子发生氧化反-施加电压启动ECL反应。电化学反应过程：在工作电极上(阳极)加一定的电压能量作用下，二价的三联哦噬钉Ru(

5、bpy)32+释放电子发生氧化反应而成为三价的三联此噬钉,Ru(bpy)3J3+,同时，电极表面的TPA也释放电子发生氧化反应而成为阳离子滋爱悉TPA+,并迅速自发脱去一个质子而形成激发态三丙胺，这样，在反应体系中就存在具有强氧化性的三价的三联此噬钉Ru(bpy)33+和具有强还原性的激发态三丙胺。化学发光过篦真有强氧化性的三价的三联毗噬钉Ru(bpy)33+和具有强还原性的激发态三丙胺发生氧化还原反应，结果使三济稻三联毗噬钉Ru(bpy)33+还原成激发态的二价的三联哦咤钉Ru(bpy)32+,其能量策源于二价他三联哦噬“Ru(bpy)33+与凝爰态三击胺之间的应势差，激发态Ru(bp幻32

6、+以荧光机制盘变并以释放出一个波长为620nm光子的方式释放能量，而成为基态的Ru(bpy)32+o1循环过程：上述化学审光过程用工,磁体系中也存任二优的三联叫【噬钉Ru(bpy)32+和三丙胺(TPA),使得电极表面向电化学反应和化学发光过藤可庆寐续进行，这样，整个反应过程可以循环进行。4大提曾j,所公测发射光信号的循环过程,用定值苣硒的放大，从而使检测灵敏度大ECL测定具有局灵敏的特点。.最重要的组成部分测量池抗原/抗体生物素亲和晶包被的磁性微粒子ProCellMsolution（TPA-三丙胺）CleanCellMsolution（KOH-清洗液）电压伯金电极磁铁光电倍增管出信号的检测光

7、电倍增管检测信号丰富的免疫检测项目超过85项检测项目AccessIIARCHITECTCentaurIMMULITEVISTALOCIVITROSECiQRoche）试剂稳定开瓶有效期长开瓶有效期（天）为什么选择电化学发光技术ECL优势之一快速的检测时间可控的反应体系,的检测范围氐标本检测用量高精密度和高灵敏度;待测组分，使用电幺发光反应。可控的反应体系 采用磁场分离待测物反应系统后光电倍 号，否则，游离的 O因此，这一过程 是很必要的。珠绑定的组分分亶出）juis，4 aRoche施加磁场，吸附磁 性微珠力口入ProCell溶夜分 离绑定磁珠的免疫 复合物去除影响信号检测 的因素显著提高检

8、测结果灵敏度Roche可控的反应体系施加电压启动电化学发光反应ECL技术的特点:施加电压启动电化学发光反应电压的应用是ECL反应可控性的关键：三联毗咤钉和三丙胺正常状态下非常稳定，只有电压存在的情况下才会被激活Roche可控的反应体系信号产生迅速(slunoo1)2.075601.630匀所带cB可控的反应信号产生均一而稳定1,电化学发光技术 电压启动反应信号均一稳定化学发光技术5反应启动不均一-KRoche为什么选择电化学发光技术ECL优势之二快速的检测时间可控的反应体系勺检测范围宗木检测用量高精密度和高灵敏度J灵敏度生物素一链霉亲和素特异性亲和作用生物素作为第二标记物与包被链

9、霉亲和素的微磁珠结合生物素与链霉亲和素特异间的特异性亲和作用是目前已知的最牢固的非共价生物结合作用最大限度的捕获待测免疫复合物大大提高ECL反应的灵敏度11高精密度和高灵敏度信号循环放大并保持稳定循环放大的过程是指信号能不断生成且保持稳定ECL 反应中Ru(bpy)3间的转化_二相足，这 命可放大。光电倍增管准确检测信号Roche高精密度和高灵敏度信号迅速生成且保持稳定3高精密度和高灵敏度言号迅速生成且保持稳定ECL7560Roche为什么选择电化学发光技术ECL优势之三快速的检测时间可控的反应体系的检测范II高精密度和高灵敏度_低标本检测用量低标本检测用量与市场上主要产品的比较ECL技术因其

10、灵敏度很高，所以标本检测用量很低。低标本检测用量患者的痛苦更小MyoglobinCK-MBVistaLOCIcobasesystemsARCHITECTNT-proBNP/BNPTroponinT/l为什么选择电化学发光技术ECL优势之四快速的检测时间可控的反应体系的检测范围R标本检测用量高精密度和高灵敏度稀释复检宽广的检测范围更少的复检Log(ECL4intensity(countslog(CRuCbpy)32+/M)cobasesystemsRoche宽广的检测范围市场上主要产品的比较ARCHITECTAccessIICentaurVistaLOCIIMMULITEVITROSECiQan

11、ti-TPOCAI25EstradiolHCG+bProgesteronePTH术ECL优势之五快速的检测时间市场上主要产品的比较cobaseanalyzersAccessIIARCHITECTCentaurImmuliteVistaLOCIVITROSECiQ10203040506070标本检测时间（分钟）MaxAverageSTATRocheAccessIIARCHITECTVistaLOCIcobaseanalyzersImmulite快速的检测时间最迅速的急诊项目检测时间11CentaurPTHNT-proBNP/BNPMyoglobinCK-MBTroponinhCGVITROSEC

12、iQ051045152025303540标本检测时间（分钟）Roche为什么选择电化学发光技术ECL优势可控的反应体系快速的检测时间,的检测范围氐标本检测用量高精密度和高灵敏度(Roch,参考网站.http:www.http: HYPERLINK http:/www.abbottc www.abbottchttp: HYPERLINK http:/www.beckmancoult www.beckmancoult.http:diagnostics.siemensc听引用的数据等信息均来自于以上网站(2009.7)Roche谢谢您的关注RocheDiagnostics(Shanghai)LimitedShangha