核壳型白藜芦醇分子印迹微球研制及应用

1、核-壳型白藜芦醇分子印迹微球研制及应用【摘要】以外貌修饰乙烯基团的si2微球为基体，白藜芦醇为模板分子，丙烯酰胺aa为成效单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯egda为交联剂，接纳外貌印迹技能制备核-壳型白藜芦醇印迹微球。接纳红外光谱ir、扫描电子显微镜se对该分子印迹微球举行表征，效果表白，si2外貌乐成接枝一层厚度为200n的印迹聚合物，该印迹微球颗粒疏散匀称。接纳高效液相色谱技能对印迹微球的吸附性举行研究表白，此印迹微球具有精良的识别性能，使用sathard模子阐发得出印迹微球的最大吸附量别离为qax1=9.087g/g和qax2=13.80g/g。此印迹微球乐成用于疏散虎杖提取液中白藜芦醇。【关

2、键词】分子印迹微球；白藜芦醇；吸附性能；核-壳型keyrdsleularlyiprintedirsphere；resveratrl；adsrptinprperty；re-shell1弁言比年来，新型印迹技能不竭涌现，包罗接纳溶胶-凝胶技能举行本体聚合1，2，在硅胶外貌举行外貌聚合35。前者聚合物存在模板分子包埋过深、难以洗脱、外形不规矩、机器性能低等缺点;后者的外貌印迹质料的巨细可控，颗粒匀称，轻易洗脱，尤其通过操纵外貌聚合壳层的厚度，可有用淘汰包埋征象。虎杖系蓼科属多年生草本植物，具有祛风利湿、散瘀定痛、止咳化痰的作用，重要含有蒽醌类和芪类化合物，此中芪类身分白藜芦醇resveratrl具有

3、抗癌、抗氧化、抗自由基、抗细菌和真菌等作用6。如今，提取疏散白藜芦醇的要领重要有溶剂提取和酶法提取7及印迹技能1。向海燕等以溶胶-凝胶法合成白藜芦醇印迹聚合物，但是其印迹聚合物模板分子包埋过深，难以洗脱，粒径不规矩、不匀称。为了降服这些缺陷，本研究以si2微球为载体，通过接枝乙烯基三甲氧基硅烷vts，在si2微球外貌引入双键，合成核-壳型的白藜芦醇分子印迹微球，并用于疏散虎杖提取液中的白藜芦醇。2实行部门2.1仪器与试剂l-2022aht型高效液相色谱仪日本岛津公司；gh-30a型双光束红外分光光度计天津港东科技生长；kq-250e型超声波洗濯器昆山市超声仪器；lg10-2.4a台式高速离心机

4、北京医用离心机厂。正硅酸乙酯tes，siga公司；丙烯酰胺aa，阐发纯；白藜芦醇标样，中国药检所；乙二醇二甲基丙烯酸酯egda，siga公司；偶氮二异丁腈aibn，阐发纯；乙烯基三甲基硅烷vts，siga公司；乙腈色谱纯；乙酸、无水乙醇、氨水、hl阐发纯；虎杖采自湖南张家界粉末。2.2印迹微球的制备取0.5g外貌活化的si2微球，疏散于10.0l50%乙醇的水溶液中，参加0.75lvts，50下反响24h。硅烷化后，用乙醇在超声下洗去未反响的vts，然后于100下枯燥3h，使vts与si2外貌的羟基充实交联键合，得到乙烯基修饰的si2微球vt-si2。非印迹微球nniprintedplyers

5、，nips的合成要领与分子印迹微球合成要领完全同等，只是在合成时不参加模板分子。2.3印迹微球的吸附性能研究及其表征接纳gh-30a型双光束红外分光光度计，对si2微球、vt-si2微球、洗脱脱模板分子白藜芦醇前、后的ips举行红外表征。2.4现实样品检测取1.0g洗脱后的分子印迹微球，装入直径为1.0、容量为10.0l的聚丙烯柱中，柱子的下端口用棉花塞住，从上口装入印迹微球，再塞上棉花，参加乙醇抽滤，使印迹微球在柱内排布精细。取3.0g虎杖质料粉末投入100l圆底烧瓶中，参加30.0lv(甲醇)v(乙酸)=82混淆溶液，超声30in，80下回流3h，然后举行过滤，蒸出溶剂，用甲醇重新溶解，得

6、虎杖提取液。取5.0l虎杖提取液，注入提取柱，抽滤，网络过柱液，先用5.0l甲醇冲洗提取柱，然后用5.0lv(甲醇)v(乙酸)=91混淆溶液冼脱，网络洗脱液，用hpl检测白藜芦醇的含量。图1si2微球外貌印迹制备途径图略fig.1synthesisrutinefsi2leularyiprinedplyers3效果与讨论3.1印迹微球的制备及形貌表征以vts为毗连si2和aa的前言，接纳热聚合技能，以白藜芦醇为模板分子，aa为成效单体，egda为交联剂，颠末abin引发，在暖和的条件下制备出包覆了白藜芦醇的印迹聚合薄层。颠末甲醇-乙酸溶液洗脱后，白藜芦醇从印迹微球聚合薄层中洗脱出来，在印迹微球的

7、薄层中留下对白藜芦醇具有特异汲取的清闲。si2微球外貌印迹微球制备途径如图1所示。制备的分子印迹聚合物微球有以下特点：在si2微球外貌引入了双键，加强了分子印迹聚合物薄层与载体之间的共价键作用力，使聚合物薄层安稳地聚合在微球外貌；通过改变vt-si2，aa和egda的比例，操纵壳层厚度，有用淘汰了包埋，利于洗脱。研究表白，当vt-si2，aa和egda的质量比为119，其壳层厚度可操纵在200n以下；可加强分子印迹聚合物微粒外貌的影象效应和机器性能。图2si2和印迹微球的扫描电镜图略fig.2sanningeletrnirspi(se)iagesfsi2andleularlyiprintedp

8、lyers(ips)扫描电镜对si2微球和ips举行形貌阐发的效果见图2。si2微球粒径匀称约为200n、规矩。ips外貌平滑，粒径匀称，粒径约为600n。由此可估算外貌印迹聚合物壳层厚度约为200n。3.2吸附实行接纳静态吸附法，通过hpl检测，别离得出ips和nips对白藜芦醇的吸附等温线，如图3a所示。效果表白，ips对白藜芦醇具有较强的吸附本领，而nips对白藜芦醇的吸附本领小，这表白ips对白藜芦醇具有较强的印迹效应。进一步使用sathard模子7阐发，sathard方程为：q/=qaxq/kd。式中，kd是接合位点的平衡解离常数；qax是结合位点的最大表不雅结合量g/g；表现吸附平

9、衡液的平衡浓度g/l。以q/对q作图可得两条差异歪率的直线图3b，ips在研究浓度范畴内对模板分子存在两种吸附的结合位点。按照歪率和截距可以得出亲和位点解离常数和最大表不雅结合量别离为kd1=0.1724g/l，qax1=9.087g/g；kd2=0.6018g/l，qax2=13.80g/g。图3印迹微球和非印迹微球的吸附等温线(a)及sathhard曲线(b)略fig.3adsrptinisthers(a)andsathardplts(b)fadsrptinisthersfipsandnniprintedplyers(nips)3.3红外光谱阐发将si2，vt-si2，ips模版洗脱后、i

10、ps未洗脱模版别离举行红外光谱阐发(图4)。比力图4a和4b可见，在1413和16371有汲取峰，此中14131处是甲基的弯曲振动，16371是的伸缩振动，这表白乙烯基硅烷乐成的修饰到si2微球外貌。在图4和4d中，35001是h的汲取峰，315034001是nh键的伸缩振动地区，17251属于的伸缩振动。图4d中，145016601属于苯环的伸缩振动，31001是苯环h和乙烯基h的伸缩振动，而图4却没有这些峰，这表白白藜芦醇分子可以从印迹微球外貌洗脱干净。图4si2(a)、乙烯基修饰的si2(b)、ips(模板洗脱后)()、ips(未洗脱模板)(d)的红外图谱略fig.4irspetrafs

11、i2(a)，si2difiedithvinyl(b)，ips(afterelutingtheteplate)()，ips(befreelutingteplate)(d)3.印迹微球对虎杖提取液中白藜芦醇的疏散接纳hpl检测白藜芦醇尺度溶液，确定白藜芦醇的出峰时间，别离检测虎杖提取液、过柱液、洗脱液中白藜芦醇的含量，如图所示。比拟虎杖提取液图b和过柱液图的色谱图，盘算提取液中白藜芦醇的含量为45.7%，过柱后溶液中白藜芦醇含量为5.4%，这表白虎杖提取液通过印迹疏散柱，白藜芦醇轻易被印迹添补物吸附。用甲醇冲洗印迹柱后，再用v(甲醇)v(乙酸)=91混淆溶液洗脱，网络洗脱液、检测，得色谱图d，柱洗脱液中白藜芦醇含量为89.3%。效果表白，本印迹添补质料具有较强的吸附性能，白藜芦醇与印迹微球的结合键比力安稳，可以或许将虎杖溶液中的白藜芦