单抗的制备方法

1、GamePlanforAb00001cn-protein目标：利用重组蛋白作为免疫原，制备针对XXX蛋白的小鼠单克隆抗体，承诺WB/ELISAo 要求：至少1株，WB能够检测到20ng/lane的重组蛋白和细胞裂解液中过表达蛋白，ELISA 可以识别天然蛋白，是否能够检测到内源蛋白得根据其丰度另议。背景：xxx蛋白隶属于xxx家族，有XXX结构域，分子量大小XXX KD，有XXX翻译后修饰。客户提供XXX蛋白，为天然/商品化/原核/真核重组蛋白，XXX体系表达，XXX纯化方 式获得，有XX/无标签，浓度为XXX mg/ml，纯度75%以上，缓冲液为XXX buffer保 存，保存条件为-20C

2、，避免反复冻融，请分装冻存。必需材料：客户提供XXX蛋白，浓度XXX mg/ml，共xxx ml，纯度75%，蛋白总量不低于1mg，免疫与检测用；客户提供转有含XXX蛋白的细胞裂解液WB膜（膜蛋白提供膜组分，核蛋白提供核组 分，每孔30ug总蛋白）；客户提供0.1mg商品化抗xxx蛋白的抗体（可选）；客户提供阴性对照YYY蛋白/空白细胞培养液等应用于特异性筛选（可选）。实验计划：第一部分：免疫原制备：根据样品信息单对客户提供的XXX蛋白进行BCA定量以及SDS电泳检测目的蛋白 浓度及纯度，制备免疫原，备用。请质检同时制备至少两张XXX蛋白的WB膜，1ug/张。请销售提醒客户必须在10天内提供W

3、B膜。第二部分：制备分泌识别XXX的单克隆抗体的杂交瘤细胞株实验动物免疫使用第一部分制备的免疫原免疫小鼠，共3只。Email通知客户项目启动，并通 知客户支付启动费；实验动物免疫反应监测监测小鼠针对免疫原的免疫反应(ELISA法，xxx蛋白包板检测，100ng/well； WB,重组蛋白20ng/lane，阳性对照抗体为标签单抗)，并尽快寄少量尾血给客 户验证。Email通报项目进展；请质检部门先完成ELISA，然后再决定何时进行重组蛋白WB，但是必须在进行 融合前完成。细胞融合综合考虑ELISA和WB结果，根据客户最关心的应用，挑选免疫反应最佳的1 只小鼠进行细胞融合，Email通报项目进展

4、；杂交瘤细胞克隆筛选在获得杂交瘤细胞后进行初步筛选(ELISA法，xxx蛋白包被检测，100ng/well， 阳性对照为心脏血和标签单抗)，挑选阳性克隆扩大培养，Email通报项目进 展；并于23天内对获得的初筛阳性克隆进行ELISA复筛(ELISA法，XXX蛋白，YYY 蛋白/空白细胞培养液等包被，阳性对照为心脏血和标签单抗)，挑选特异性 识别XXX蛋白阳性克隆扩大培养；对复筛阳性克隆进行WB评价，阳性对照为心脏血和标签单抗。并尽快寄上 清给客户验证。灵敏度检测：ELISA法，XXX蛋白梯度包被检测，初步评价克隆的滴度。备注：如果没有获得所需的阳性克隆，则免费重复1次第二部分1-4步。若仍 然不能获得所需单抗，则通知客户放弃该项目。客户克隆筛选与确认将实验室确认的阳性细胞克隆的上清和尾血样品寄送给客户，由客户按照需求 进行筛选(ELISA，WB或其他试验等)最终确定需要的克隆1-5株。多于5株， 每株额外收费。细胞冻存和交付实验室根据客户需求将细胞扩增，在付清成功费后与细胞上清一并寄送给客户。 在客户确认细胞成功传代和保种成功后，销毁备份（最长3个月）。3个月以上 将按照每个月每株收取保管费200元。第三部分：腹水和抗体生产，23周。客户选择（）株杂交瘤细胞，每个杂交瘤细胞株接种2只Bal