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文档简介

1、饲用葡萄糖氧化酶作用机理及功效葡萄糖氧化酶介绍葡萄糖氧化酶应用研究内容提纲总结夏盛葡萄糖氧化酶使用案例1葡萄糖氧化酶简介葡萄糖氧化酶是一种氧化还原酶,在分子氧的存在下,专一地氧化-D-葡萄糖生成D-葡萄糖酸内酯,同时消耗氧,生成过氧化氢;过氧化氢在过氧化氢酶作用下,分解生成水和1/2氧,而后水又与葡萄糖酸内酯结合产生葡萄糖酸。 在此过程中,葡萄糖氧化酶的特点是能够消耗氧气,催化葡萄糖氧化,最终产物是葡萄糖酸。GOD催化-D-葡萄糖的速度是催化-D-葡萄糖的150倍.反应方程式:2葡萄糖氧化酶的来源 1904年发现于黑曲霉菌丝; 1928年确定它是一种氧化还原酶,也是成功应用于工业的少数几种非水

2、解酶之一; 1960 年Kusai等、1964 年Pazur和Swobodda分别从青霉和黑曲霉中提纯葡萄糖氧化酶。 1995 年 , Petruccioli等用青霉的突变株生产出葡萄糖氧化酶。 1999年农业部将其定为12种允许使用的饲用酶制剂之一; 目前生产上一般采用的霉菌是黑曲霉和青霉属菌株。 允许使用的饲料添加剂目录青霉黑曲霉4不同菌种来源对比 菌种特异青霉黑曲霉分子量150kD152kD碳氢化合物11%16%氨基酸(赖氨酸、苯丙氨酸)较多(组氨酸、精氨酸、酪氨酸)较多Km(米氏常数)1130Vmax 值925458Km表示酶和底物之间的亲和能力,Km值越大,亲和能力越弱,反之亦然。在

3、同等底物浓度的条件下,Km值越大,其所需的酶浓度越大,即所需添加量也越大。(引自 Biotechnology Advance 27(2009): 489-501)反应时间pH值剩余葡萄糖值(%)特异青霉黑曲霉特异青霉黑曲霉0h8.018.21h6.336.817.117.73h6.216.5615.516.36h6.146.3714.415.48h5.716.057.99.1目的:比较特异青霉和黑曲霉的产物生成量及底物消耗量步骤:配制18%葡萄糖溶液,测定初始葡萄糖含量,加入一定量碳酸钙,调试pH值,分别加入同等活力不同来源葡萄糖氧化酶,以及过量过氧化氢酶,磁力搅拌器,用鼓风机通入一个大气压的

4、空气,保持氧气充足。6葡萄糖氧化酶酶学特性在pH为4.08.0之间具有很好的稳定性,最适 pH 值为6.08葡萄糖氧化酶酶学特性枯草杆菌蛋白酶(pH6.0)、胰蛋白酶(pH6.8)和胃蛋白酶(pH4.5)不能分解葡萄糖氧化酶酶学特性作用温度为2060, 最适温度35耐温性能良好,经85处理1min,酶活保持在80%以上耐温性能15%湿度条件下,混合葡萄糖氧化酶和饲料后制粒结果存储稳定性良好,避光、干燥处保存12个月活力不低于90%。11在畜禽机体内的作用机理及功效清除过量自由基保持肠道上皮完整减少病原入侵耗氧,抗氧化有机弱酸、提供酸性环境过氧化氢、强氧化性-D葡萄糖H2O2葡萄糖酸O2H2OG

5、OD过氧化氢酶消除肠道病原菌生存环境,保持肠道菌群生态平衡提高消化酶活,改善饲料品质,提高饲料消化率缓解霉菌毒素中毒保护肠道健康维护肠道健康、提高免疫功能,促进消化吸收、替代抗生素、预防霉菌毒素中毒1/2O2(一)保持肠道上皮细胞的完整,抑制球虫和病原菌的入侵1994年赵文等在氧自由基与肠道损伤中表明:机体内产生的氧自由基会破坏肠道上皮细胞的完整性造成肠道损伤。在葡萄糖氧化酶催化的反应过程中,可以清除氧自由基,保护肠道健康,从而抑制病原菌入侵。GOD的还原过程13GOD组015日龄0.20%GOD拌料;1660日龄用0.12%0.16%GOD拌料,如有球虫则饮水添地克珠利 13d。对照组15日

6、龄起饮水添加地克珠利至 60日龄出舍,发生球虫病则饮三维治球粉 3d。(引自湖北畜牧兽医,2004(1):31-33)备注:GOD酶活15u/g14(引自河北农业大学,1997,1(4)空白对照:不攻毒攻毒对照和试验组:进行鸡白痢沙门氏菌攻毒,其中试验组,攻毒后进行治疗。备注:GOD酶活15u/g15(二)改善胃肠道酸性环境,促进营养物质消化吸收 催化葡萄糖生成葡萄糖酸,在肠道内发挥酸化剂的作用,创造酸性环境;降低胃中的pH值,激活胃蛋白酶,促进营养物质的消化吸收;(引自河北农业大学学报,2009:34(4)对照组添加0.15%GOD添加0.3%GOD添加0.4%GOD添加0.5%GOD备注:

7、GOD酶活15u/g16(三)促进肠道益生菌的定殖,清除有害菌的繁殖。生成的葡萄糖酸可降低胃肠内PH值,为乳酸菌生长制造酸性环境;葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖去除肠道内氧气,为厌氧有益菌双歧杆菌的增殖制造厌氧环境;(引自畜牧与兽医杂志,2011:43(6)对照组添加0.1%GOD添加0.2%GOD添加0.3%GOD备注:GOD酶活15u/g17(四)生成的过氧化氢通过破坏霉菌毒素的结构解除毒性。葡萄糖氧化酶可抑制黄曲霉、黑根霉、青霉等多种霉菌,对黄曲霉毒素B中毒症有很好的预防效果;葡萄糖氧化酶作用生成一定量的过氧化氢,使如黄曲霉毒素这种具备氧杂萘邻酮基团的霉菌毒素被氧化脱氢,分子结构发生改变,解除

8、毒性。或通过氧化作用破坏呋喃环结构,使环打开,毒性消失,从而达到脱毒的作用;(引自:冯定远,左建军 著饲料酶制剂的应用技术体系,31-25)18(引自生物学杂志,2014 ,31 (2)) 表2. 添加葡萄糖氧化酶对解除霉菌毒素小鸡存活率的比较(引自动物营养学报 ,2014 ,26 (11)) 表1. 葡萄糖氧化酶对饲喂霉变玉米小鼠体重的影响75000u/t备注:GOD酶活15u/g19葡萄糖氧化酶使用案例夏盛(一)提高动物生产性能(二)降低抗生素使用20葡萄糖氧化酶使用案例夏盛(一)提高动物生产性能(二)降低抗生素使用21(一)提高动物生产性能 安徽雨润集团滁州沃得养猪场应用实例断奶仔猪试验

9、方案试验目的葡萄糖氧化酶对断奶仔猪生长的影响试验时间2015/09/12-2015/10/13试验地点安徽滁州(雨润集团-滁州沃得利养殖场)试验对象24日龄断奶仔猪,试验组和对照组各103头试验过程实验组仔猪饲喂过程中按照333g/t添加葡萄糖氧化酶(GOD200),对照组饲喂相同的饲料但不添加葡萄糖氧化酶。饲喂30天后比较两组猪的料肉比、腹泻率和日增重。222310.6%24试验方案试验目的不同添加量葡萄糖氧化酶(100u/g)对蛋种鸡性能的影响试验时间2013年9月22日至10月27日试验地点郑州荥阳蛋种鸡养殖场,试验期35d试验对象25-28周龄的罗曼褐蛋种鸡试验过程选取A、B、C、D

10、4组鸡作为实验对象,其中A组(对照)仅仅饲喂基础日粮,B组(300g/t GOD )、C组(500g/t GOD)、D组(700g/t GOD)在基础日粮的基础上添加了不同剂量的葡萄糖氧化酶。通过连续35日的持续跟踪试验 ,对比产蛋率、受精率和健雏率。(一)提高动物生产性能 郑州荥阳某蛋种鸡场应用实例罗曼褐蛋种鸡25文章日粮中添加葡萄糖氧化酶对罗曼褐蛋种鸡产蛋性能的影响中国饲料添加剂2014(2)26试验方案试验目的GOD200的使用对蛋鸡产蛋率和蛋壳品质的影响试验时间2015/10/30-2015/12/02试验地点湖北马鞍山(鑫欣禽业有限公司)试验对象48周龄海兰褐商品代蛋鸡,实验组(34

11、55只)、对照组(3463只)。试验过程选取335日龄的产蛋鸡,其中实验组按照250g/t的比例在饮水中添加葡萄糖氧化酶,对照组饮水中不添加葡萄糖氧化酶,每日统计实验组和对照组的产蛋率及蛋壳品质。海兰褐蛋鸡(一)提高动物生产性能 安徽马鞍山鑫欣禽业商品蛋鸡应用实例272.3%月平均2855.6% 29每日产蛋率对比30试验方案试验目的葡萄糖氧化酶抗应激作用试验时间2015/09/03-2015/09/30 试验地点安徽郎溪(郎溪立大养殖场)试验对象42周龄樱桃谷种鸭,试验组(306)、对照组(402)、对照组(500)、对照组(506),每组2000只,共计8000只。试验过程实验组饲料按照3

12、00g/t的量添加GOD200(不溶),3个对照组饲喂同一基础日粮不添加GOD。饲喂4周,每日统计产蛋率进行比较。(一)提高动物生产性能 安徽郎溪立大肉种鸭场应用实例 樱桃谷种鸭312.786.346.5419.63延缓后期产蛋率的降低32葡萄糖氧化酶使用案例夏盛(一)提高动物生产性能(二)降低抗生素使用33试验方案试验目的葡萄糖氧化酶替代抗生素试验试验时间2015年12月-2016年2月,试验期为61天 试验地点温氏肉鸡场试验对象1日龄黄羽肉鸡试验过程选取三群鸡作为试验对象,其中A组作为对照组正常按照饲养程序添加抗生素,B组、C组作为试验组,其中B组添加200g/t的GOD200,C组添加3

13、00g/t的GOD200。整个养殖期结束后对比A、B、C三组肉鸡的日增重、料肉比和死淘率。(二)降低抗生素的使用 广东温氏青年鸡34不同浓度葡萄糖氧化酶对肉鸡161天龄生长性能的影响35试验方案试验目的不同的GOD200添加量对青年鸡性能的影响。试验时间2015年6月27日-2015年8月27日,试验期为60天 试验地点南阳市华东禽业青年鸡场试验对象1日龄青年鸡,每组10000羽。试验过程雏鸡从1日龄开始试验,其中对照组仅仅饲喂基础日粮,3个试验组分别在基础日粮中添加不同浓度的GOD,A组(250g/t)、B组(200g/t)、C组(150g/t)。试验结束后(青年鸡60日龄),对比分析4组鸡

14、群的体重、死淘率和用药费用。(二)降低抗生素的使用 南阳市华东禽业青年鸡应用实例青年鸡36文章葡萄糖氧化酶在青年鸡中应用效果分析中兽医学杂志2015(10)37试验方案试验目的GOD200对肉鸡生长的促进作用试验时间2015/09/16-2015/10/24试验地点安徽芜湖(明玮生态科技园有限公司)试验对象3日龄817商品肉鸡,实验组和对照组各12000只。试验过程3日龄开始实验组全群饮用葡萄糖氧化酶,全程除开口药外不添加任何药物(全程成本550元);对照组从3日龄开始按照原用药程序饮用(全程成本7200元),不添加葡萄糖氧化酶。出栏时比较两组鸡的出栏体重、料肉比和死淘率。817商品肉鸡(二)

15、降低抗生素的使用 安徽芜湖某肉鸡养殖场应用实例3839试验方案试验目的GOD100对肉鸭生长性能的影响试验时间2014年7月14日-2014年8月25日,试验期为42天 试验地点高唐六和荣达下属肉鸭养殖场试验对象1日龄樱桃谷鸭,每组6000羽。试验过程选择同一批24000羽的1日龄雏鸭分为4组,饲喂同一基础日粮。3个试验组在饮水中添加500g/t的葡糖糖氧化酶的同时按照表1对用药计划进行修改。试验结束后对比4组出栏肉鸭的体重、死淘率、料肉比。表1: 各组用药情况对照组ABC日粮基础日粮基础日粮基础日粮基础日粮葡萄糖氧化酶500g/t500g/t500g/t抗球虫药正常添加正常添加减半正常添加肠

16、炎药正常添加正常添加正常添加减半(二)降低抗生素使用 山东高唐荣达某肉鸭养殖场应用实例4041(二)降低抗生素使用 西北农林科技大学试验场应用实例AA肉鸡试验方案试验目的不同菌种来源GOD200对肉鸡性能的影响试验时间2015年11月-2015年12月,试验期为42d 试验地点西北农林科技大学试验场试验对象AA肉鸡试验过程选取840只鸡分为4个组,其中阴、阳性对照各1组,试验组2个,按照表1在饲料或饮水中添加不同的产品。每个组设7个重复。试验结束后对比各组鸡群的体重和料肉比。42N组P组A组B组日粮基础日粮基础日粮基础日粮基础日粮GOD(黑曲霉)00300g/t0GOD(特异青霉)000300

17、g/t抗生素组-+-备注:抗生素组包含硫酸粘杆菌素20g/t,恩拉霉素6g/t,盐霉素钠60g/t。 不同菌种来源添加活力一致。表1. 各组药物使用情况434445总结葡萄糖氧化酶催化的反应通过消耗氧气制造厌氧环境、清除氧自由基;通过产生葡萄糖酸制造肠道酸性环境促进益生菌的占位和营养物质消化吸收;通过产生的过氧化氢消除霉菌毒素的毒性。应用过程中添加葡萄糖氧化酶后可以有效的降低仔猪腹泻;延长蛋鸡产蛋高峰、减少软壳蛋和白壳蛋;减少甚至消除肉鸡养殖过程中抗生素的使用。当下食品安全问题日益得到重视,葡萄糖氧化酶必将为健康养殖提供新的突破口。46贵公司葡萄糖氧化酶与其它厂家的区别:夏盛葡萄糖氧化酶的基因

18、来源为青霉,而其它厂家的产品来源于黑曲霉,青霉源的葡萄糖氧化酶拥有更高的底物结合能力,反应速率更快。菌种特异青霉黑曲霉分子量150kD152kD碳氢化合物11%16%氨基酸(赖氨酸、苯丙氨酸)较多(组氨酸、精氨酸、酪氨酸)较多Km(米氏常数)1130Vmax 值925458(引自 Biotechnology Advance 27(2009): 489-501)酶学小知识预混料中含有高浓度的矿物元素(金属离子),会不会导致酶失活?在酶促反应中,酶的活性受到金属离子的影响。但是,酶促反应要在水溶液中才能进行,也就是说只有水分含量达到一定程度后才可以。预混料虽然含有大量的金属离子,但是水分含量很低(12%),酶促反应难以发生,所以不会导致酶失活。颗粒型的酶制剂是不是耐高温性能更好?使用效果是不是更好?酶制剂能否耐高温并不决定于是否是颗粒或是粉状,而是受到多种因素的影响(菌种、载体等等),首先是菌种的影响最大,如果是耐高温的菌种,那么即使是粉状酶,其耐高温性能也不错,如高温淀粉酶。作为同一种酶,如果经过了包被,包被材料合格,其耐温性有一定的提高,但提高的程度受到包被工艺和包被材料的影响。就使用效果而言,颗粒酶并不一定比粉状酶好,第一,颗粒酶粒度和比重与饲料不完全一致,导致混合不均匀,或分层,从而导致效果不稳定或不明显。酶的耐高温性能你们是怎么检测的?

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