细菌药物敏感试验的标准操作程序（药敏SOP文件）

1、广东省中医院检验科细菌药物敏感试验的标准操作程序一、方法改进Kirby-Bauer法二、原理 将含有抗菌药物的纸片贴在已接种待测菌的琼脂平板上。抗菌药物在琼脂内由纸片中心向四周扩散，其浓度呈梯度递减。经过规定时间、条件的孵育培养后，在纸片周围一定距离内细菌生长受到抑制，形成透明的抑菌圈。其直径大小与药物浓度的对数呈线性关系。抑菌圈的大小反映待试菌对测定药物的敏感程度。三、菌株 各种标本别离出的待测病原菌。四、仪器设备普通培养箱： CO2培养箱：五、实验材料培养基：M-H琼脂商业成品：用于非苛养菌的药物敏感性试验。5%脱纤维羊血M-H琼脂商业成品：用于苛养菌的药物敏感性试验。HTM：用于嗜血杆菌

2、的药物敏感性试验。试剂：无菌生理盐水自制比浊仪法国生物梅里埃公司生产或麦氏标准比浊管商业成品抗菌药物纸片：品牌： 英国OXOID储存条件：-20冰箱使用期限：有效期内使用，常用纸片开启后60天有效。不常用的纸片，开启后装在含有枯燥剂的密封盒内，-20冰箱保存，有效期内使用。4其他：无菌棉拭、纸片分配器、镊子、游标卡尺或毫米尺、接种环。六、标准操作步骤 在平板上挑取适量已分纯菌落，将细菌溶于0.9%无菌生理盐水中，用比浊仪或0.5麦氏标准比浊管将菌液浓度调整至0.5麦氏单位，含菌量1-2108cfu/L。测试平板接种：用无菌棉签浸入调节好的细菌悬液，将多余细菌悬液在管壁挤出，在平板上反复涂布三次

3、，每次旋转平皿60，最后沿平板周围涂两圈，保证涂布均匀。平板在室温下枯燥3-5min后贴纸片：无论用手工贴或纸片分配器，必须使纸片完全与琼脂外表接触，各纸片中心相距应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm，一旦贴在某一位置，不应变动位置。15分钟后将贴有纸片的平板置35孵育18-24小时测链球菌的敏感性，应5%CO2 35孵育18-24小时。结果判读：用游标卡尺或毫米尺量取抑菌圈直径以mm为单位，根据CLSI标准，按敏感S、中介I、耐药R报告。以没有明显肉眼可见生长物区域为抑菌圈边绝缘，极其细小菌落生长可以忽略不计。由于培养基内抗药成份使其对甲氧苄啶和磺胺甲噁唑引起的轻微细菌生长，生长层小

4、于20%可以忽略不计。七、药敏纸片的选择及判断标准：我们以CLSI/NCCLS修订的选药分组为根本标准，同时参照国内知名医院的经验来进行药物敏感试验。肠肝菌科细菌抗菌药物选择，见表1。铜绿假单胞菌抗菌药物选择，见表2。不动杆菌属细菌抗菌药物选择，见表3。嗜麦芽窄食单胞菌和伯克霍德菌抗菌药物选择，见表4。葡萄球菌属细菌抗菌药物选择，见表5。肠球菌属细菌抗菌药物选择，见表6。肺炎链球菌属细菌抗菌药物选择，见表7。除肺炎链球菌之外的链球菌属细菌抗菌药物选择，见表8。沙门氏、志贺氏菌抗菌药物选择，见表9嗜血杆菌属抗菌药物选择，见表10肠杆菌科及不动杆菌属细菌纸片法药敏判断标准，见表11。CLSI/NC

5、CLS大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、奇异变形杆菌*ESBLs检测的筛选和确证试验，见表12。铜绿假单胞菌等糖不发酵革兰阴性杆菌纸片法药敏判断标准，见表13。葡萄球菌属细菌纸片法药敏判断标准，见表14。CLSI/NCCLS纸片扩散法*检测葡萄球菌中由mecA基因介导的耐药，见表15。肠球菌纸片法药敏判断标准，见表16。肺炎链球菌纸片法药敏判断标准，见表17。除肺炎链球菌以外的其他链球菌纸片法药敏判断标准，见表18。沙门菌、志贺菌纸片法药敏判断标准，见表19。嗜血杆菌属纸片法药敏判断标准，见表20。纸片法药敏标准菌株质控范围，见表21。表1 肠杆菌科细菌抗菌药物选择抗菌药物ABCU抗菌药

6、物ABCU阿米卡星亚胺培南庆大霉素美罗培南氨苄西林环丙沙星哌拉西林SXT-TMP头孢唑啉头孢西丁头孢克罗氨苄西林/舒巴坦头孢丙烯头孢哌酮/舒巴坦头孢呋辛哌拉西林/他唑巴坦头孢噻肟头孢噻肟/克拉维酸头孢吡肟头孢他啶/克拉维酸头孢他啶呋喃妥因ESBLs表2 铜绿假单胞菌抗菌药物选择抗菌药物ABCU抗菌药物ABCU阿米卡星亚胺培南庆大霉素美罗培南哌拉西林环丙沙星头孢哌酮氧氟沙星氨曲南替卡西林/克拉维酸头孢他啶头孢哌酮/舒巴坦头孢吡肟哌拉西林/他唑巴坦表3 不动杆菌属细菌抗菌药物选择抗菌药物ABCU抗菌药物ABCU阿米卡星亚胺培南庆大霉素美罗培南哌拉西林环丙沙星头孢呋辛SXT-TMP头孢噻肟氨苄西林/

7、舒巴坦头孢他啶头孢哌酮/舒巴坦头孢吡肟哌拉西林/他唑巴坦表4 嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌抗菌药物选择抗菌药物ABCU抗菌药物ABCU头孢他啶*左氧氟沙星*美罗培南*SXT-TMP米诺环素* 为伯克霍尔德菌所选用药物* 为嗜麦芽窄食单胞菌所选用药物其余为两菌共选用药物。表5 葡萄球菌属细菌抗菌药物选择抗菌药物ABCU抗菌药物ABCU青霉素万古霉素庆大霉素替考拉宁苯唑西林左氧氟沙星头孢唑啉SXT-TMP头孢呋辛头孢西丁克林霉素氨苄西林/舒巴坦红霉素呋喃妥因磷霉素利福平MRS注：头孢西丁药敏结果可判别MR菌株，但报告时报苯唑西林耐药或敏感。表6 肠球菌属细菌抗菌药物选择抗菌药物ABCU抗菌药

8、物ABCU氨苄西林环丙沙星呋喃妥因庆大霉素120 ug万古霉素红霉素替考拉宁表7 肺炎链球抗菌药物选择抗菌药物ABC抗菌药物ABC青霉素E-test*氯霉素万古霉素克林霉素红霉素苯唑西林*左氧氟沙星头孢丙烯* 判别PSSP及PNSP菌株。* 适用于PNSP菌株，进一步确证PSSP、PISP和PRSP。表8 除肺炎链球之外的链球菌属细菌抗菌药物选择抗菌药物ABC抗菌药物ABC青霉素头孢丙烯红霉素头孢曲松克林霉素万古霉素左氧氟沙星表9 沙门氏、志贺氏菌抗菌药物选择抗菌药物ABC抗菌药物ABC氨苄西林环丙沙星氨苄西林/舒巴坦氯霉素头孢曲松复方新诺明表10 嗜血杆菌属抗菌药物选择抗菌药物ABCU抗菌药

9、物ABCU氨苄西林AMP四环素TEC头孢他啶CAZ头孢丙烯CPR氯霉素CHL阿齐霉素美罗培南MEM表11 CLSI/NCCLS 肠杆菌科及不动杆菌属细菌纸片法药敏判断标准试验条件：培养基：M-H琼脂接种物：菌落悬浮液0.5麦氏单位培养条件：352，空气，16-18小时质控菌：大肠埃希菌 ATCC 25922大肠埃希菌 ATCC 35218用于测定-内酰胺酶抗菌药物纸片含量ug判断标准mm备注阿米卡星AMC3015-16庆大霉素GEN1013-14氨苄西林AMP1014-16氨苄西林/舒巴坦AMP/SUL10/1012-14哌拉西林PIP10018-20头孢唑啉CEZ3015-17头孢克洛CEC

10、3015-17头孢丙烯CPR3015-17头孢呋辛CXM3015-17头孢噻肟CTX3015-22头孢他啶CAZ3015-17亚胺培南IPM1014-15环丙沙星CIP516-20呋喃妥因NIT30015-16尿液中的肠杆菌科细菌加做复方磺胺甲噁唑SMZ-TMP1.25/23.7511-15头孢西丁FOX3015-17头孢哌酮/舒巴坦CFP/SUL75/3516-20哌拉西林/三唑巴坦PIP/TAZ100/1018-20头孢吡肟FEP3015-17美罗培南MEM1014-15头孢他啶/克拉维酸CAZ/CLA30/10见注1。头孢噻肟/克拉维酸CTX/CLA30/10见注1。注：大肠埃希菌、肺炎

11、克雷伯菌、产酸克雷伯菌要进行ESBLs确证试验测定，当头孢他啶/克拉维酸与头孢他啶抑菌圈直径相差5mm者，或头孢噻肟/克拉维酸与头孢噻肟直径相差5mm者应报告为产ESBLs，并对所有青霉素类；一、二、三代头孢菌素类抗生素报告耐药。如遇菌血症或无菌体液中别离出奇异变形杆菌时，并当临床医生需要时亦要进行ESBLs的检测。表12 CLSI/NCCLS大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、奇异变形杆菌*ESBLs检测的筛选和确证试验方法初筛试验表型确证试验培养基MH琼脂MH琼脂抗微生物药物纸片浓度头孢泊肟 10g或头孢他啶 30g或氨曲南 30g或头孢噻肟 30g或头孢曲松 30g或使用一种以上的药

12、物进行筛选将会提高检测的敏感性头孢他啶 30g头孢他啶/克拉维酸 30/10g和头孢噻肟30g头孢噻肟/克拉维酸 30/10g确证试验要求同时做上述四种纸片接种同纸片扩散法同纸片扩散法孵育条件同纸片扩散法同纸片扩散法孵育时间同纸片扩散法同纸片扩散法结果判度头孢泊肟抑菌圈 17mm头孢他啶抑菌圈 22mm氨曲南抑菌圈 27mm头孢噻肟抑菌圈 27mm头孢曲松抑菌圈 25mm意味着可疑有ESBL的产生2药中任何一个药物，在加克拉维酸后，抑菌圈直径与不加克拉维酸的抑菌圈相比，5mm者，判定为产ESBL质控建议阴性对照：大肠埃希菌 ATCC 25922参考质控标准，见表阳性对照：肺炎克雷伯菌 ATCC

13、 700603头孢泊肟抑菌圈 9-16mm头孢他啶抑菌圈 10-18mm氨曲南抑菌圈 9-17mm头孢噻肟抑菌圈 17-25mm头孢曲松抑菌圈 16-24mmESBLs筛选试验中，肺炎克雷伯菌ATCC 700603作为质评菌株；肺炎克雷伯菌ATCC 700603或大肠埃希菌ATCC 25922作为常规质控菌株。阴性对照：大肠埃希菌ATCC 25922：加有克拉维酸的抑菌圈比没有加克拉维酸的抑菌圈2mm。阳性对照：肺炎克雷伯菌 ATCC 700603 头孢他啶/克拉维酸抑菌圈头孢他啶抑菌圈5mm头孢噻肟/克拉维酸抑菌圈头孢噻肟抑菌圈3mmESBLs确证试验中，肺炎克雷伯菌ATCC 700603和

14、大肠埃希菌ATCC 25922作为常规质控菌株。*常规实验中不推荐对奇异变形杆菌的ESBLs筛选，除非有临床特别要求。表13CLSI/NCCLS铜绿假单胞菌等糖不发酵革兰阴性杆菌纸片法药敏判断标准试验条件：培养基：M-H琼脂接种物：菌落悬浮液0.5麦氏单位培养条件：352，空气，16-18小时；嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌需培养20-24小时。质控菌：大肠埃希菌 ATCC 25922铜绿假单胞菌 ATCC 27853 大肠埃希菌 ATCC 35218用于测定-内酰胺酶抗菌药物纸片含量ug判断标准mm备注阿米卡星AMK3015-16庆大霉素GEN1013-14哌拉西林PIP10017R ，

15、18S铜绿假单胞菌头孢他啶CAZ3015-1716-20洋葱伯克霍尔德菌头孢哌酮CFP3016-20氨曲南ATM3016-21亚胺培南IPM1014-15环丙沙星CIP516-20复方磺胺甲噁唑SXT-TMP1.25/23.7511-15替卡西林/克拉维酸TIC/CLA75/1014R ，15S铜绿假单胞菌头孢哌酮/舒巴坦CFP/SUL75/3516-20哌拉西林/三唑巴坦PIP/SUL100/1017R， 18S铜绿假单胞菌头孢吡肟FEP3015-17美罗培南MEM1014-1516-19洋葱伯克霍尔德菌米诺环素3015-18左氧氟沙星LEV514-16注：1非发酵细菌属除铜绿假单胞菌、不动

16、杆菌属细菌、嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌外，均需用稀释法进行药敏试验。2铜绿假单胞菌在治疗过程中易产生耐药，因此在治疗3-4天后需重新进行药敏试验。3嗜麦芽窄食单胞菌纸片法药敏只需报告：米诺环素、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑；洋葱伯克霍尔德菌只报告：头孢他啶、美罗培南、米诺环素、复方磺胺甲噁唑。表14CLSI/NCCLS葡萄球菌属细菌纸片法药敏判断标准试验条件：培养基：M-H琼脂接种物：菌落悬浮液0.5麦氏单位培养条件：33-35不能超过35，空气，16-18小时；苯唑西林、万古霉素结果需24小时观察结果。质控菌：金黄色葡萄球菌 ATCC 25923大肠埃希菌 ATCC 35218用于测定

17、-内酰胺酶抗菌药物纸片含量ug判断标准mm备注庆大霉素GEN3013-14青霉素PEN10units29 S，28 R头孢西丁FOX30金葡菌、路登葡萄球菌：20 S，19 R其他凝固酶阴性葡萄球菌：25 S，24 R对头孢西丁耐药需向临床报告为MR细菌，同时报告万古霉素结果。氨苄西林/舒巴坦AMP/SUL10/1012-14头孢唑啉CEZ3015-17头孢呋辛CXM3015-17万古霉素VAN3015 S培养24小时观察结果红霉素ERY1514-22克林霉素(CLI)215-20复方磺胺甲噁唑SMZ-TZP1.25/23.7511-15磷霉素(FOS)2013-15利福平(RIF)517-1

18、9替考拉宁(TEC)3011-13左氧氟沙星(LEV)514-16呋喃妥因NIT30015-16尿液标本需加做注：1对于MR的葡萄球菌，氨苄西林、头孢菌素类和其他-内酰胺类抗生素应报告耐药。2需进行克林霉素诱导试验D-试验检测，假设D-试验阳性的葡萄球菌，应报告克林霉素耐药。3葡萄球菌属细菌药敏结果要严格控制在33-35不能超过35。4如出现对万古霉素中度敏感或耐药的菌株需进行MIC测定。表15 CLSI/NCCLS纸片扩散法*检测葡萄球菌中由mecA基因介导的耐药抗菌药物细菌抑菌圈直径mm备注头孢西丁30ug金黄色葡萄球菌和路登葡萄球菌1920抑菌圈直径19必须报告苯唑西林耐药，20报告苯唑

19、西林敏感。凝固酶阴性葡萄球菌除路登葡萄球菌2425抑菌圈直径24必须报告苯唑西林耐药，25报告苯唑西林敏感。* 使用标准纸片扩散法条件，必须培养24小时观察结果，如果18小时出现耐药可报告结果。读取头孢西丁结果使用反射光。克林霉素诱导试验D-试验原理：克林霉素诱导试验是指使用常规药物敏感试验方法对红霉素耐药并对克林霉素耐药的葡萄球菌属进行的测定，又称为D-试验。菌株：常规别离的葡萄球菌属细菌。抗菌药物：红霉素 15g克林霉素 2g质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC 25923；另外可用内局部离到的D-试验阳性和阴性的金黄色葡萄球菌。步骤：标准纸片扩散法1根据葡萄球菌属细菌纸片扩散法所需的培养基、

20、接种物和培养条件。2红霉素与克林霉素纸片边缘到边缘距离为15-26mm。3经过培养后，观察克林霉素靠近红霉素纸片处的区域情况。结果观察：当克林霉素的抑菌圈在靠近红霉素纸片处发生变形，犹如英文字母“D时，称为D-试验阳性。结果报告：当D-试验阳性，需向临床报告克林霉素耐药。备注：测克林霉素诱导型耐药的D形试验扩大到溶血链球菌A、B、C、D群和来自阴道及尿的B群链球菌。细节和葡萄球菌的类似。孕妇围产期对B群链球菌预防用药时选青霉素，氨苄西林，过敏时低危孕妇可用头孢唑林，高危孕妇就要选克林霉素和红霉素，但最近出现红霉素及克林霉素的耐药株，所以用药前要有这两药的药敏结果。在美国A群链球菌耐红霉素的有1

21、0%，耐克林霉素的有7%，B群链球菌耐红霉素的有25%，耐克林霉素的有15%。表16CLSI/NCCLS肠球菌纸片法药敏判断标准试验条件：培养基：M-H琼脂接种物：菌落悬浮液0.5麦氏单位培养条件：352，空气，16-18小时；万古霉素24小时观察结果。质控菌：金黄色葡萄球菌 ATCC 25923抗菌药物纸片含量ug判断标准mm备注庆大霉素GEN1207-9氨苄西林AMP1016R， 17S环丙沙星CIP516-20万古霉素VAN3015-16红霉素ERY1514-22呋喃妥因FUR30015-16替考拉宁TEC3011-13VRE增做如下药敏：氯霉素CHL3013-17四环素TEC3015-

22、18磷霉素FOS2013-15利福平RIF517-19注：1当进行万古霉素对肠球菌药敏试验时,药敏平皿应培育24小时,并用透射光观察结果。2当万古霉素抑制圈内出现薄雾状或任何生长现象均表示耐药，如出现中介值和耐药菌株需进行VRE菌株确认。表17CLSI/NCCLS肺炎链球菌纸片法药敏判断标准试验条件：培养基：5%羊血M-H琼脂接种物：菌落悬浮液0.5麦氏单位培养条件：352，5%CO2，20-24小时。 质控菌：肺炎链球菌 ATCC 49619抗菌药物纸片含量ug判断标准mm备注青霉素1 ug苯唑西林20见注1。红霉素1516-20克林霉素216-18左氧氟沙星514-16头孢丙烯3015-1

23、7PISP、PRSP需用E-test方法增做如下药敏：青霉素见注2头孢曲松0.5 ug/ml1 ug/ml脑脊液标本非脑脊液标本万古霉素1 ug/ml美罗培南0.25 ug/ml注：1当苯唑西林抑菌圈直径19mm时，需加做青霉素E-test，确证PSSP、PISP、PRSP。2青霉素MIC：0.06 ug/mlPSSP0.125-1 ug/mlPISP2 ug/mlPRSP表18CLSI/NCCLS除肺炎链球菌以外的其他链球菌纸片法药敏判断标准试验条件：培养基：5%羊血M-H琼脂接种物：菌落悬浮液0.5麦氏单位培养条件：352，5%CO2，20-24小时。 质控菌：肺炎链球菌 ATCC 496

24、19抗菌药物纸片含量ug判断标准mm备注青霉素GEN10units24红霉素ERY1516-20克林霉素CLI216-18左氧氟沙星LEV514-18头孢丙烯CFP3015-17头孢曲松CRO302425-26-溶血-溶血万古霉素(VAN)3017注：-溶血链球菌A、B、C、G群和来自阴道和尿液的B群链球菌应测红霉素诱导耐药试验D-试验。假设D-试验阳性应报告临床克林霉素耐药。链球菌D-试验方法同葡萄球菌相同，红霉素纸片与克林霉素纸片边缘12mm。表19 CLSI/NCCLS沙门菌、志贺菌纸片法药敏判断标准试验条件：培养基：M-H琼脂接种物：菌落悬浮液0.5麦氏单位培养条件：352，空气，16

25、-18小时质控菌：大肠埃希菌 ATCC 25922大肠埃希菌 ATCC 35218用于测定-内酰胺酶抗菌药物纸片含量ug判断标准备注氨苄西林AMP1014-16氨苄西林/舒巴坦AMP/SUL10/1012-14头孢曲松CRO3014-20注2环丙沙星CIP516-20氯霉素CHL3013-17复方磺胺甲噁唑SXT1.25/23.7511-15注：对于肠道内沙门菌、志贺菌只需做氨苄西林、一种喹诺酮类、复方磺胺甲噁唑，并作为常规报告。但对于肠道外沙门菌需做氯霉素和一种三代头孢菌素，并报告。对于16岁骨骼系统未发育完全的小儿应报头孢曲松的药敏结果，不报环丙沙星和氯霉素。表20CLSI/NCCLS嗜血

26、杆菌属纸片法药敏判断标准试验条件：培养基：嗜血杆菌试验培养基(HTM)接种物：菌落悬浮液0.5麦氏单位培养条件：352，5%CO2，16-18小时。 质控菌：流感嗜血杆菌 ATCC 49247流感嗜血杆菌 ATCC 49766大肠埃希菌ATCC35218(测试阿西林/克拉维酸时)抗菌药物纸片含量ug判断标准mm备注氨苄西林AMP1019-21头孢他啶CAZ3026氯霉素CHL3026-28美罗培南MEM1020四环素TEC3026-28头孢丙烯CPR3015-17阿齐霉素1512药敏结果修正规那么：美国NCCLS药敏规那么指出，耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌MRSA或耐苯唑西林的凝固酶阴性的葡萄球

27、菌MRCNS应报告对所有头孢类和其他-内酰胺类如阿莫西林/克拉维酸，氨苄西林/舒巴坦耐药。产超广谱-内酰胺酶ESBLs的革兰阴性杆菌，应报对所有三代头孢菌素和氨曲南耐药。耐甲氧西林葡萄球菌MRS的检测：用30g头孢西丁纸片扩散法确证。金黄色葡萄球菌的头孢西丁抑菌圈直径19mm，应报告苯唑西林耐药，头孢西丁抑菌圈直径20mm，报告苯唑西林敏感；凝固酶阴性葡萄球菌的头孢西丁抑菌圈直径24mm，应报告苯唑西林耐药，头孢西丁抑菌圈直径25mm，报告苯唑西林敏感。ESBLs检测的筛选和确诊试验：CLSI/NCCLS规定肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌ESBLs的筛选试验和确证试验表1

28、2。目前，NCCLS推荐的纸片扩散法或MIC法是世界许多国家用于检测ESBLs的表型标准方法。这两个方法仅适用于肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌及奇异变形杆菌。当菌株产ESBLs时，不管其体外药敏试验是否敏感，均应报告为对所有超广谱头孢菌素和氨曲南耐药。ESBLs菌株的报告凡ESBLs菌株必须向临床报告。应注明ESBLs菌株对所有的青霉素类、头孢菌素类抗生素和氨曲南耐药。如实报告头孢哌酮/舒巴坦SCF、哌拉西林/他唑巴坦TZP、替卡西林/克拉维酸TIM和亚胺培南IPM药敏结果。临床意义敏感S：表示被测细菌引起的感染，除禁忌症外，可用该抗生素常用剂量而到达治疗目的。中介I：表示被测菌株可通

29、过剂量受到抑制，或在药物被生理性浓集的部位受抑制。由于微小的技术因素失控可以对结果解释错误，所以这范围只是抑菌环直径介于敏感和耐药之间的缓冲域。抑菌环落入中介范围，其意义不明确，如果没有其它可以替代的药物，应重复或再以稀释法测定MIC。耐药R：被测菌不能被该抗生素的常用剂量在组织内或血液中的浓度到达抑制作用，且不管其剂量大小或细菌所在部位。不常见抗生素敏感试验结果细菌或菌群类a未曾报告过的不常见表型，和/或因技术错误造成的结果类b在的规那么中可能不常见的表型，和/或因技术错误造成的结果肠杆菌科任何种亚胺培南-I或R阿米卡星-R氟喹诺酮类-R大肠埃希菌氨苄西林-SESBL确认阳性克雷伯菌属氨苄西

30、林-SESBL确认阳性嗜麦芽窄食单胞菌碳青霉烯类-S复方磺胺甲噁唑-R肠球菌属万古霉素-R金黄色葡萄球菌万古霉素-I或R凝固酶阴性葡萄球菌万古霉素-I或R肺炎链球菌氟喹诺酮类-R万古霉素c-NS青霉素-R3代头孢菌素-R-溶血链球菌氨苄西林或青霉素c-NS万古霉素c-NS草绿色链球菌万古霉素-NSa. 当表中所列结果来自个别患者别离的细菌，应用以下一条或多条予以证实：确保不常见结果不是因为抄写错误、污染或用了有缺陷的试剂板、平皿或卡片。检查患者过去的结果，确认是否是曾经别离过的菌株和已经得到证实的。确认菌株的鉴定正确性。重复药敏试验并确认结果，有时改换一种试验方法重复结果是有帮助的。对于表中某

31、些抗生素只有敏感判断标准的菌株，如果表现出不敏感表中列为NS,万古霉素中介度或耐药的葡萄球菌：确认菌株鉴定正确确认药敏试验结果保存菌株将菌株送参考实验室，并用NCCLS参考稀释方法试验b. 当表中所列结果来自个别患者别离的细菌，如果不是耐药规那么中常见的，应该考虑按类中所列步骤进行验证。c. 对这些抗生素/细菌组合，到目前为止，还未有耐药记载。八、质量控制培养基的质控根据?中华人民共和国卫生行业标准WS/T2322002商业性微生物培养基质量检验规程?要求，常规使用培养基只需对淋球菌培养基进行室内质控质控菌株使用标准菌株：淋病奈瑟菌43069或43070进行生长试验，奇异变形杆菌43071或表

32、皮葡萄球菌12228做局部抑制试验即可。血平板、麦康凯平板、伊红美兰平板、SS平板、沙保罗平板、营养肉汤、结核分枝杆菌培养基、支原体培养基等只需商家提供质控证明即可。购置的培养基，必须检查每批培养基，包括：平板的裂纹、充碟均匀、培养基裂纹、溶血、冷冻、过多的气泡或者斑点、污染的检查。凡购置的培养基，生产厂商必须提供质控在控证明材料。2. 质控菌株的保存及其工作质控菌株的使用1质控菌株的保存1培养基：无菌脱纤维羊血、脱脂牛奶、大豆胰蛋白消化肉汤TSB1015甘油2浓度：0.5个麦氏单位、淋球菌1.0个麦氏单位、0.51.0ml/支，转种一次保证足够一年的使用量。3温度：-70保存4溶解转种后丢弃

33、，处理送高压蒸汽灭菌2工作质控菌株最多下传三代，用琼脂斜面或平板保存于28，可用四周，每月启用一支新标准菌株。3. 鉴定仪器及其配套试剂的质控鉴定仪器及其配套试剂的质控严格按照说明书进行。4. 药敏纸片质控质控菌株应按标准方法与临床标本别离菌同步进行药敏试验。更换抗生素纸片或培养基时必需用相应质控菌株测试。采用药敏K-B法进行室内质控。所有抗生素纸片在实行常规监控一周一次质控前应用质控菌株连续监测20-30天，对每种药，每种菌，连续20次或30次试验中，结果不超出质控范围1个或3个，可转为一周一次质控的方法。只要抑菌圈直径超出可接受范围都必需校正。当失控原因不明时，可用相应质控菌株连续监测5天

34、，如果全部到达可接受范围，可恢复一周一次质控。纸片法药敏标准菌株质控范围，见表19。3 使用质控菌株要求包括主要的菌属和全部的抗生素谱，所以标准菌株要包括：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ESBL菌株、粪肠球菌、肺炎链球菌。5. 鉴定血清和鉴定用试剂和纸片鉴定血清质控每个季度进行一次鉴定用试剂质控每天进行，包括触酶、氧化酶、凝固酶、革兰染液和抗酸染液。鉴定用纸片在有效期内每个月进行一次，包括：奥普托欣、杆菌肽、-内酰氨酶、因子、因子、因子。6. 药敏纸片室内质控失控报告需要包含几个方面：失控工程名称记录此次质控使用的药敏纸片、MH培养基、盐水等的批号记录失控值、失控菌株

35、和孵箱温度分析失控原因：药敏纸片效期和药效、培养基效期和培养基厚度等、比浊仪、孵箱温度、标准菌株污染或者变异、人为因素等，药敏试验过程涉及到的因素都应在分析范围之内。纠正措施采取纠正措施后的结果最后的结论及其经验教训，以后应该注意的问题。操作者、室内组长、科室主任签名和日期。质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC 25923大肠埃希菌ATCC 25922大肠埃希菌ATCC 35218铜绿假单胞菌ATCC 27853肺炎链球菌 ATCC 49619粪肠球菌 ATCC 29212表21 CLSI/NCCLS纸片法药敏标准菌株质控范围抗菌药物纸片含量大肠埃希菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌肺炎链球菌ATCC 259