崔芳芳的医学硕士学位论文开题报告

1、11/12 . . 硕士学位论文开题报告（ 医学类 ）姓 名：芳芳学号：2011600270专 业：科学研 究 方 向：培 养 单 位：北华大学指 导 教 师与 职 称：王爱平 硕士研究生导师 教授2012 年10 月 论文题目骨形态发生蛋白（BMP-2）与男性肝炎后肝硬化相关骨营养不良的研究课题来源属何项目、课题（国家、部委、市、校管、自选）项目、课题名称经费来源自选自筹选题依据、目的与意义我国是全球感染病毒性肝炎人数最多的国家达到1.3亿人口，其中相当一部分患者会进展至肝硬化。目前国外均有研究与文献报道肝炎后肝硬化患者当部分合并有相关骨营养不良与骨质疏松症。但是关于骨形态发生蛋白（BMP-

2、2）与男性肝炎后肝硬化相关骨营养不良的研究报告尚不多见，为此我们拟对这一课题加以研究，以期揭示（BMP-2）与男性肝炎后肝硬化相关骨营养不良发病机制间的关系。国外研究现状关于慢性肝病患者合并不同程度骨质疏松症（OP）目前国外均有相关的研究报道。据不同文献报道, 慢性肝病合并OP的发生率为12%-55%1-3，骨折发生率为5%-20%1。由于慢性肝病病因不同， 研究方法、研究群体的差异, 使OP的发生率报道不一。 慢性病毒性肝炎、肝硬化引起的骨密度异常目前尚缺乏大规模的临床流行病学研究报道。1.国外：Schiefke等4测量了43例慢性病毒性肝炎患者的骨密度, 其中慢性丙型肝炎30例、慢性乙型肝

3、炎13例， 发现骨密度下降25例(58%), 诊断OP 8例(19%)。 Cijevschi等5的研究显示93例肝炎后肝硬化患者中, 发生骨量减少或骨质疏松的比例为30/93(32.3%), 且骨密度降低与低体质量指数(10年)等因素存在明显相关性。Wang等6分析17例乙型肝炎肝硬化的骨活检结果， 14例(82.4%)存在程度不等的骨质疏松， 表现为骨细胞萎缩、减少或消失, 骨小梁变细、断裂, 骨小梁间隙增宽。Crawford7等研究113例肝硬化患者得到结论为：骨转换率随病情加重而加速。Sokhi8等测定104例肝硬化患者BMD发现不同阶段肝硬化患者均存在骨密度下降的现象。2.国：王义国9

4、等观察61例乙型肝炎肝硬化患者的骨密度(采用DXA检测), 发现普遍并骨量减少与健康对照组相比有显著性差异。付明生等10研究显示乙型肝炎后肝硬化患者明显存在有骨营养不良。马新秋等11研究了肝硬化Child分级与骨密度与骨代的关系，以上资料均提示慢性病毒性肝炎、肝硬化患者易合并OP。 病毒性肝病相关性骨质疏松的发生机制相当复杂, 目前尚未完全明了。 多位学者对其发病机制进行过相关的综述, 包括维生素D和钙代异常、营养不良、性腺功能减退等。 近年研究发现多种细胞因子如白介素1(interleukin-1, IL-1)、白介素6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor n

5、ecrosis factor-, TNF-)、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1, IGF-1)参与了骨代过程。 IL-1、IL-6、TNF-是较强的骨吸收因子, 可共同促进破骨细胞形成， 诱发骨吸收，影响正常骨重建， IGF-1是主要在肝脏合成的骨形成强刺激因子。 乙型肝炎肝硬化患者血清IL-1、IL-6、TNF-明显升高, IGF-1明显降低, 均可引起骨吸收增加、骨形成减少, 从而导致OP。 还有文献12报道慢性丙型肝炎患者血清IGF-1水平明显降低。 提示细胞因子可能在病毒性肝炎肝硬化患者并发OP的发病机制中扮演重要的角色。生理状态下，骨代一般

6、包括骨吸收和骨形成两方面,它受体某些激素如甲状旁腺素、降钙素等的调节，从而维持代平衡近年研究13表明,来自基质中的破骨细胞、成骨细胞和髓腔间充质细胞等能以自分泌或旁分泌形式分泌细胞因子，并调节骨代，这些细胞因子甚至比激素更重要，有可能正是因为这些细胞因子调控机制的障碍影响了骨代过程，使骨形成-骨吸收偶联出现失调而导致骨质疏松症。在众多影响骨代的细胞因子中，骨形态发生蛋白(BMP)起到了十分关键的调节作用。骨形态发生蛋白(BMP)是最早由Urist在脱钙骨基质中提取的一种活性蛋白质,属于转化生长因子(TGF)-超家族成员。大部分BMP在C端含有7个高度保守的半胱氨酸残基，其中6个在部形成二硫键,

7、1个参与肽键间二硫键形成,使2个多肽键连接成二聚体,这种典型的局部二硫键结构称为半胱氨酸结14，成熟的BMP结构均为1个二硫键连接的二聚体分子。研究表明BMP是一种多功能细胞因子15,可作为动物体骨诱导剂诱导间充质细胞定向分化为成骨细胞并形成骨组织。临床上又可作为骨移植剂，对骨折修复、骨量维持均有显著疗效15-18。BMP有1型和2型两种受体，它们分别起丝氨酸和氨酸激酶的作用。属于细胞跨膜信号受体，TGF-蛋白家族信息均由这两种受体传递，BMP与其受体结合形成异四聚体复合物(由两个1型和两个2型受体组成)时,便可启动信号通路 14-19，它主要通过激活Smad途径和P38一丝裂原激活蛋白激酶(

8、MAPK)途径传递信息，且这两种途径有协同作用20。BMP一般存在于骨基质中，破骨细胞在溶骨过程中释放酸性物质溶解骨基质,可诱导其活化的BMP则通过与周围胞膜或胞浆受体结合诱导间充质细胞分化为软骨细胞或成骨细胞，或者在其他因子如TGF一的协同作用下使软骨和骨分化为成熟的软骨与骨。根据氨基酸排序不同，可将BMP分为不同亚型。目前已确认18种BMP亚型,即BMP118,但BMP-1不属BMP家族,它主要参与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的活化。BMP家族通常是指BMP2一11,它们属于同一亚组，而BMP12一14属于另一亚组，可称为软骨形态发生蛋白(CDMP)，它们诱导软骨形成能力较成骨作用强

9、21。BMP-2、4、6、7、9具有骨诱导性，其中BMP-2、7已应用于临床，BMP -2位于人染色体20P12上,是最早发现的BMP，在胚胎发育与细胞分化方面扮演着关键性角色22。它不仅可诱导未分化间充质细胞分化为骨系细胞，而且也可促进骨骼矿化23。此外， BMP -2还能促进成骨细胞标志基因骨诱导蛋白()P)、核心结合因子a1(Cbfal)、碱性磷酸酶(ALP)、脂肪酸结合蛋白-4(FABP-4)等的表达，这些基因相应蛋白在骨细胞分化中也起非常关键的作用24。研究容围本课题研究所选入组对象均为成年男性，研究组与对照观察组的入组对象均排除分泌系统和肾脏系统疾病。立题出发点主要考虑排除性别因素

10、所导致的干扰，因为女性绝经期后由于雌激素水平下降普遍会出现骨代转换水平增加而骨密度下降的现象，以与分泌和肾脏系统疾病所导致的原发性、继发性骨质疏松症。经排除性别因素，自身合并疾病因素干扰后，通过对比入组对象骨形态发生蛋白（BMP-2）水平我们期待发现男性肝炎后肝硬化合并骨质疏松患者血清（BMP-2）水平与对照组的差别。目前世界卫生组织推荐应用QCT骨密度测量仪检测骨密度值作为判定骨质疏松依据。我们遵循这一评判标准通过对研究组与对照组分别检测左侧桡骨下1/3处骨密度值进行比照后通过对数据比较分析，希望得到男性肝炎后肝硬化患者骨密度下降与骨形态发生蛋白（BMP-2）含量之间存在相关联的直接依据。实

11、施与实验方案1.研究对象组：拟选取2012年10月2014年2月在我院肝病科明确诊断为肝炎后肝硬化的男性住院患者35例，按照Child-Pugh分级定为代偿性肝硬化（Child-PughA级），失代偿性肝硬化（Child-PughB、C级），所选病例均排除肾脏、分泌系统疾病。所选病例均符合2000年中华医学会会议制定的病毒性肝炎防治方案的诊断标准。2.对照观察组：选取2012年10月2014年2月于我院门诊进行体检的普通男性健康人群数量30名，所选人群均排除肝病、肾脏疾病与分泌系统疾病。1.2 应用方法1.2.1. 应用美国雅培制药生产的试剂经放免法检测研究组与对照组的血清甲状旁腺素（PTH）

12、与降钙素（CT）并与正常临床参考值进行比照。应用日本东芝全自动生化仪检测血清Ca2+与碱性磷酸酶（ALP）并记录检测结果。1.2.2 血样采集与进行bmp-2的检测：取研究对象组和对照观察组清晨空腹静脉血，肝素抗凝，分离血清，加入抑肽酶防止蛋白降解,置于-80冷冻保存。bmp-2的检测采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunoadsordent assay,elisa)，试剂盒由精美生物制品代理，具体操作严格按照说明书。1.2.3. 应用QCT骨密度测量仪检测研究组与对照组的左侧桡骨下1/3处骨密度值进行比照。1.3 统计方法数据用x s表示，组间比较采用t检验，p0.05

13、有统计学意义查阅主要文献1Raisz LG. Pathogenesis of osteoporosis: concepts, conflicts, and prospects. J Clin Invest 2005; 115: 3318-3325 2Goral V, Simsek M, Mete N. Hepatic osteodystrophy and liver cirrhosis. World J Gastroenterol 2010; 16: 1639-1643 3Collier J. Bone disorders in chronic liver disease. Hepatolog

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