（母种转管技术）学习资料单

1、第二章菌种的来源第四节：母种转管技术在食用菌生产过程中，由于分离或引进的原始母种数量有限，不能满足生产 所需，因此，需要进行母种的扩大繁殖。首先我们先了解一下什么是母种转管，母种转管是指将分离培养成的母种菌 丝体，无菌操作移接到空白试管培养基上，这个操作过程叫做转管或转代。母种转管是食用菌制种工作中的一项最基本的操作，无论是菌种的继代、分 离、鉴定还是食用菌形态、生理、生化等方面的研究都离不开母种转管操作。转管后的母种叫再生母种或移接母种。一支斜面母种可转接60100支试 管，母种转管次数不可太多，一般母种可转接34次，不能超过4次，以免造 成污染、生活力降低或退化现象的发生。再生母种（移接母

2、种）：一支斜面母种可转接60100支试管，母种转管次 数不可太多，一般母种可转接34次，不能超过4次，以免造成污染、生活力 降低或退化现象的发生。母种转管所需要用到的设备与用具主要有超净工作台、酒精灯、接种钩、接 种铲、75%酒精棉球、95%酒精、工具支架、PDA斜面培养基、平皿、口取纸、恒 温培养箱等。为避免有害微生物的活动而造成污染，确保母种转管操作过程顺利完成及菌 丝体进行纯培养，母种转管需要在无菌的环境中以无菌操作方法完成，必须遵循 无菌操作规程，有5点要求：1、接种前对接种室要提前2天用烟雾消毒剂进行熏蒸消毒。2、提前30分 钟打开超净工作台，使用75%酒精棉擦拭超净工作台面，将培养

3、基放入接种室工 作台上，并准备好用具。打开紫外线杀菌灯消毒30分钟。3、换好清洁的工作服, 同时清洗双手，然后将菌种带入接种室内。4、关闭紫外线杀菌灯，取少许75% 酒精棉擦拭双手、菌种容器表面、及接种工具。5、酒精灯火焰属外焰区域温度 最高，火焰周围810厘米范围内的空间为无菌区，所有操作过程必须靠近火焰 周围10厘米范围内进行，但要注意不要离火焰太近以免烫伤菌种。转管操作时 动作要快，转管时间不易太长。母种转管的具体操作过程。母种转管操作流程我们可以分3个步骤来完成.首先，取少许酒精棉擦拭双 手、接种工具及母种容器表面，点燃酒精灯，右手拿起接种钩、接种铲沾取酒精 在火焰上灼烧后放在工具支架

4、上冷却备用。2拿起母种试管放到左手，用拇指与食指握在手中，斜面向上，右手小指与 手撑握住棉塞拔掉，拔出的棉塞勿触及任何地方。试管口在酒精灯火焰上灼烧 一下，右手拿起接种钩将母种菌丝面前端1cm勾出去除掉。更换接种钩，在培养基表面横向左右切割，切割宽度为2 mm左右，切透菌 丝表面至培养基内侧，但不能切断培养基，切好后接种钩灼烧冷却备用。3拿起空白培养基放置于左手母种试管外侧平行握住，斜面向上。右手无名 指与小指夹住棉塞拔掉，拿起接种铲伸入母种试管内，接种铲垂直于菌丝面向内 切割两次，之间距离为2 mm左右，使用接种铲水平铲取接种块，带少许培养基, 迅速移接到空白斜面培养基内，接种块要接种于斜面

5、培养基的中间位置上。抽出 接种铲，灼烧试管口，将棉塞在火焰上轻轻灼烧一下，并在火焰旁将棉塞塞上, 注意转接过程中不要使接种块沾在试管壁上。转管操作完成。如果需要转接多支试管或多个品种，重复以上操作步骤即可。整个操作过程 要快速、准确、熟练。当母种转管操作结束后，要将母种的棉塞在火焰上轻轻灼 烧一下，重新塞到母种试管上，放回原位。转管结束后，试管用皮筋每7支或10支一捆扎好，贴上标签，注明品种名 称及日期等，注意标签贴的位置不要遮挡棉塞及培养基，以避免后期菌丝生长及 污染情况的观察。使用牛皮纸将棉塞端包好，置于恒温培养箱中避光培养，根据 不同菌类对生长温度的要求，设置最适合菌丝生长的培养温度。一般培养3天后, 要检查菌丝的生长情况，发现污染或生长不良的情况，要及时挑出处理，以免蔓 延。培养10-15天，母种菌丝即可长满。污染的试管要经过高压灭菌后，方可进 行清洗处理。在母种转管过程中有6点需要注意的事项：1、原母种培养基内的老接种块因培养进间过长，生活力下降，不易接入新 培养基内。母种转管时切割的接种块不易太大。2、母种转管时切勿使试管口离开酒精灯火焰的无菌区范围。3、操作时试管口尽量向下轻斜，以减少杂菌污染机会。4、母种转管前要准备好一些无菌棉塞，一起放入接种室内，以便更换受潮 的棉塞。5